Name: Progrès dans les cellules tueuses naturelles exprimant le récepteur de l’antigène chimérique dérivé de cellules souches pluripotentes humaines induites (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-02-14T14:10:00.000+00:00
Duration: 11 min 8 s
Description: Découvrez une méthode de différenciation de cellules NK CAR dérivées d'iPSC humaines pour l'immunothérapie anticancéreuse. Ce protocole améliore l'activité antitumorale et la persistance in vivo grâce à l'intégration génique non virale et CRISPR-Cas9.

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<table><tbody><tr><td>aAPC&nbsp ;</td><td>Dean A. Lee lab&nbsp ;</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>milieu de culture a-MEM&nbsp ;</td><td>Fisher Scientific&nbsp ;</td><td>Cat#12634</td><td></td></tr><tr><td>APC anti-DYKDDDDK (FLAG Tag)</td><td>BD Biosciences&nbsp ;</td><td>Cat#637308</td><td></td></tr><tr><td>APC-anti-humain TRA-1-81&nbsp ;</td><td>ThermoFisher</td><td>17-8883-42&nbsp ;</td><td></td></tr><tr><td>APC-CD16</td><td>BD Biosciences&nbsp ;</td><td>Cat#302015</td><td></td></tr><tr><td>APC-CD43&nbsp ;</td><td>BD Biosciences</td><td>Cat# 560198&nbsp ;</td><td></td></tr><tr><td>APC-CD45&nbsp ;</td><td>BD Biosciences</td><td>Cat# 555485&nbsp ;</td><td></td></tr><tr><td>APC-GPC3</td><td>BD Biosciences&nbsp ;</td><td>Cat#DB100B</td><td></td></tr><tr><td>APC-NKG2D&nbsp ;</td><td>BD Biosciences&nbsp ;</td><td>Cat# 558071&nbsp ;</td><td></td></tr><tr><td>Réactif de détection CellEvent Caspase-3/7 Green&nbsp ;</td><td>Thermo pêcheur&nbsp ;</td><td>Cat#C10423</td><td></td></tr><tr><td>Kit de prolifération de cellules violettes CellTrace&nbsp ;</td><td>Thermo pêcheur&nbsp ;</td><td>Cat#C34571</td><td>Colorant fluorescent de traçage cellulaire&nbsp ;</td></tr><tr><td>La solution CryoStor&nbsp ;</td><td>Stem Cell Technologies</td><td>https://www.stemcell.com/products/cryostor-cs10.html</td><td>Milieu de cryoconservation</td></tr><tr><td>CTS NK Xpander</td><td>Gibco</td><td>A5019001</td><td></td></tr><tr><td>CTS NK-Xpander Medium</td><td>Life Technologies</td><td>Cat#A5019001</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Gibco 11965084</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DMEM, hyperglucose, GlutaMAX Supplement, pyruvate</td><td>Gibco</td><td>10569010</td><td></td></tr><tr><td>Kit d’enrichissement de cellules NK humaines EasySep&nbsp ;</td><td>StemCell Technologies, Inc.&nbsp ;</td><td>Cat#19055</td><td></td></tr><tr><td>Éthanolamine</td><td>Sigma Aldrich</td><td>E9508</td><td></td></tr><tr><td>Sérum fœtal bovin&nbsp ;</td><td>Fisher Scientific&nbsp ;</td><td>Cat# 10437010</td><td></td></tr><tr><td>FITC-CD94&nbsp ;</td><td>BD Biosciences&nbsp ;</td><td>Cat#555888</td><td></td></tr><tr><td>GlutaMAX Supplément</td><td>Gibco</td><td>35050061</td><td></td></tr><tr><td>GolgiPlug&nbsp ;</td><td>BD Biosciences&nbsp ;</td><td>Cat#555029</td><td></td></tr><tr><td>GolgiStop&nbsp ;</td><td>BD Biosciences&nbsp ;</td><td>Cat#554724</td><td></td></tr><tr><td>Mélange de nutriments F-12 de Ham, supplément GlutaMAX</td><td>Gibco</td><td>31765035</td><td></td></tr><tr><td>sérum de cheval&nbsp ;</td><td>Fisher Scientific&nbsp ;</td><td>Chat # 16050130</td><td></td></tr><tr><td>Sérum Humain&nbsp ;</td><td>AB Sigma-Aldrich</td><td>Cat#BP2525100</td><td></td></tr><tr><td>Kit NucleofectorTM de cellules souches humaines&nbsp ;</td><td>Lonza&nbsp ;</td><td>Cat# VPH-5012</td><td></td></tr><tr><td>Humain : Cellules HePG2&nbsp ;</td><td>ATCC&nbsp ;</td><td>Cat#HB-8065</td><td></td></tr><tr><td>Humain : HePG2-td-tomates-luc cellules&nbsp ;</td><td>Dan S. Kaufman lab</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Humain : cellules iPS&nbsp ;</td><td>Dan S. Kaufman lab&nbsp ;</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Humain : cellules SNU-449</td><td>ATCC</td><td>Cat#CRL-2234</td><td></td></tr><tr><td>Humain : SNU-449-td-tomato-luc cells&nbsp ;</td><td>Dan S. Kaufman lab</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>IncuCyte Caspase-3/7 Dosage de l’apoptose verte&nbsp ;</td><td>Essenbioscience&nbsp ;</td><td>Cat#4440</td><td></td></tr><tr><td>Acide L-ascorbique</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A5960</td><td></td></tr><tr><td>MP Biomedicals&nbsp ; Sérum humain, type AB</td><td>MP Biomedicals</td><td>ICN2938249</td><td></td></tr><tr><td>mTeSR plus</td><td>StemCell Technologies, Inc.&nbsp ;</td><td>100-0276</td><td></td></tr><tr><td>Logiciel NovoExpress&nbsp ;</td><td>ACEA Biosciences&nbsp ;</td><td></td><td></td>https://www.agilent.com/en/product/research-flow-cytometry/flow-cytometry-software/novocyte-novoexpress-software-1320805</tr><tr><td>Anticorps anti-humain SSEA-4 PE/Cy7&nbsp ;</td><td>Biolegend</td><td>330420</td><td></td></tr><tr><td>PE-CD16&nbsp ;</td><td>BD Biosciences&nbsp ;</td><td>Cat#560995&nbsp ;</td><td></td></tr><tr><td>PE-CD226</td><td>BD Biosciences&nbsp ;</td><td>Cat#559789</td><td></td></tr><tr><td>PE-CD34&nbsp ;</td><td>BD Biosciences</td><td>Cat# 555822&nbsp ;</td><td></td></tr><tr><td>PE-CD45&nbsp ;</td><td>BD Biosciences&nbsp ;</td><td>Cat# 555483&nbsp ;</td><td></td></tr><tr><td>PE-CD94&nbsp ;</td><td>BD Biosciences&nbsp ;</td><td>Cat#555888&nbsp ;</td><td></td></tr><tr><td>PE-cy7-CD56&nbsp ;</td><td></td><td>BioLegend Cat# 318318&nbsp ;</td><td></td></tr><tr><td>Ligand PE-FAS&nbsp ;</td><td>BD Biosciences&nbsp ;</td><td>Cat#564261&nbsp ;</td><td></td></tr><tr><td>PE-NKp30</td><td>BD Biosciences</td><td>Cat# 558407</td><td></td></tr><tr><td>PE-NKp44&nbsp ;</td><td>BD Biosciences&nbsp ;</td><td>Cat#558563&nbsp ;</td><td></td></tr><tr><td>PE-NKp46</td><td>BD Biosciences&nbsp ;</td><td>Cat#331908</td><td></td></tr><tr><td>PE-NKp46&nbsp ;</td><td>BD Biosciences&nbsp ;</td><td>Cat#557991&nbsp ;</td><td></td></tr><tr><td>Couche leucocytaire du sang périphérique&nbsp ;</td><td>Banque de sang de San Diego (https://www. sandiegobloodbank.org/)&nbsp ;</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>PE-TRAIL&nbsp ;</td><td>BD Biosciences&nbsp ;</td><td>Cat#565499&nbsp ;</td><td></td></tr><tr><td>pKT2-mCAG-IRES-GFP-ZEO&nbsp ;</td><td>Branden Moriarity lab&nbsp ;</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>plasmide pMAX-GFP</td><td>Lonza</td><td>N/A</td><td>contrôle positif GFP&nbsp ;</td></tr><tr><td>Prisme 9</td><td>Graphpad&nbsp ;</td><td>Version 9</td><td></td></tr><tr><td>pSpCas9&nbsp ;</td><td>GenScript</td><td>PX165</td><td></td></tr><tr><td>Tampon de lyse RBC (10x)</td><td>Biolegend</td><td>Cat#420301</td><td></td></tr><tr><td>BFGF humain recombinant de base&nbsp ;</td><td>R& D Systems&nbsp ;</td><td>Cat#4114-TC</td><td></td></tr><tr><td>BMP-4 humain recombinant&nbsp ;</td><td>PeproTech</td><td>Cat#120-05</td><td></td></tr><tr><td>Ligand FLT-3 humain recombinant&nbsp ;</td><td>PeproTech</td><td>Cat# 300-19 IL-15</td><td></td></tr><tr><td>humaine recombinante&nbsp ;</td><td>PeproTech</td><td>Cat# 200-15</td><td></td></tr><tr><td>IL-2 humaine recombinante&nbsp ;</td><td>PeproTech</td><td>Cat# 200-02</td><td></td></tr><tr><td>IL-3 humaine recombinante&nbsp ;</td><td>PeproTech</td><td>Cat#200-03</td><td></td></tr><tr><td>IL-7 humaine recombinante&nbsp ;</td><td>PeproTech</td><td>Cat# 200-07</td><td></td></tr><tr><td>Protéine ganglionnaire humaine recombinante</td><td>R& D Systems&nbsp ;</td><td>Cat#3218-ND-025</td><td></td></tr><tr><td>SCF humain recombinant&nbsp ;</td><td>PeproTech</td><td>Cat# 300-07</td><td></td></tr><tr><td>TGF-&bêta humain recombinant ; 1</td><td>PeproTech</td><td>Cat#100-21</td><td></td></tr><tr><td>VEGF humain recombinant&nbsp ;</td><td>PeproTech</td><td>Cat# 100-20</td><td></td></tr><tr><td>RPMI1640</td><td>Gibco</td><td>11875093</td><td></td></tr><tr><td>Sélénite de sodium</td><td>Sigma Aldrich</td><td>214485</td><td></td></tr><tr><td>STEMdiff APEL 2 Medium</td><td>StemCell Technologies, Inc.&nbsp ;</td><td>5270</td><td>EB formation medium</td></tr><tr><td>STEMdiff APEL2 Medium&nbsp ;</td><td>StemCell Technologies, Inc.&nbsp ;</td><td>Cat#05270</td><td></td></tr><tr><td>Super piggyBac Vecteur d’expression de la transposase</td><td>SBI</td><td>Cat#PB210PA-1</td><td></td></tr><tr><td>SYTOX AADoute de coloration à cellules mortes</td><td>avancées ThermoFisher Scientific</td><td>S10274, S10349</td><td>Kit de solution de coloration des cellules mortes</td></tr><tr><td>&beta ;-mercaptoethanol</td><td>Gibco</td><td>21985023</td><td></td></tr></tbody></table>

progrès dans les cellules tueuses naturelles exprimant le récepteur de l’antigène chimérique dérivé de cellules souches pluripotentes humaines induites

Advances in Human Induced Pluripotent Stem Cell-Derived Chimeric Antigen Receptor-Expressing Natural Killer Cells

Schéma de principe de la différenciation et de l’expansion des cellules NK dérivées d’iPSC anti-GPC3-CAR Le schéma illustre la différenciation in vitro de cellules NK modifiées anti-GPC3-CAR dérivées de cellules souches pluripotentes induites humaines (iPSC) et une représentation schématique du vecteur piggyBac portant la construction CAR GPC3. Initialement, les iPSC non modifiées sont transfectées avec un vecteur piggyBac codant pour le CAR GPC3 (récepteur antigénique chimérique). Après la t...

Progrès dans les cellules tueuses naturelles exprimant le récepteur de l’antigène chimérique dérivé de cellules souches pluripotentes humaines induites

Natural killer (NK) cells are innate immune cells that play a crucial role in the body's defense against tumors and viral infections. The generation of ...

advances-human-induced-pluripotent-stem-cell-derived-chimeric-antigen

Research

Recherche

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie et infection

Nous décrivons ici une méthode pour l'activation et l'expansion des cellules NKT de gros populations de cellules T en utilisant des cellules présentant l'antigène artificielles (VAMP). L'utilisation de CD1d basée aAPC offre une méthode normalisée pour générer des nombres élevés de cellules NKT fonctionnelles.

Présentatrice d&#39;antigène artificielle d&#39;activation à médiation cellulaire (AAPC) et l&#39;expansion des cellules T tueuses naturelles

Cette vidéo présente une technique de génération ex vivo de lymphocytes T à récepteur antigénique chimérique (CAR) spécifique de l’antigène tumoral. Des vecteurs rétroviraux porteurs d’ARN transgénique sont mélangés à des cellules de la rate dans un milieu complété par de l’interleukine-2 pour favoriser la survie et la prolifération des lymphocytes T. Le mélange est ensuite transféré sur une plaque recouverte de fragments de fibronectine humaine recombinante et centrifugée pour faciliter la...

Une technique ex vivo pour générer des lymphocytes T récepteurs antigéniques chimériques spécifiques à une tumeur

Une méthode simple et fiable est décrit ici pour analyser un ensemble de fonctions des cellules NK telles que la dégranulation, la cytokine et la production de chimiokines dans les différents sous-ensembles de cellules NK.

Cytométrie de flux à base de test pour la surveillance des cellules NK Fonctions

Nous décrivons un système d'essai in vitro quantitatif de cytolyse en temps réel pour évaluer la puissance des cellules De T de récepteur d'antigène chimérique ciblant les cellules tumorales liquides et pleines. Ce protocole peut être étendu pour évaluer d'autres cellules effectrices immunitaires, ainsi que des traitements combinés.

Un analyse de puissance en temps réel pour les cellules T de récepteur d'antigène chimérique ciblant les cellules cancéreuses solides et hématologiques

Nous décrivons ici une méthode de culture in vitro de co aux cellules de T de tumeur ciblée de défi de manière récursive, qui permet une analyse phénotypique et fonctionnelle de l’activité antitumorale des lymphocytes T.

En reprise cellule tumorale in Vitro pour l’évaluation prédictive de l’antigène chimérique fonction antitumorale des récepteurs des lymphocytes T

Nous présentons ici un protocole d’édition de gènes dans les cellules T humaines primaires utilisant la technologie CRISPR Cas pour modifier les cellules CAR-T.

Production de cellules CAR-T humaines conçues par CRISPR

Ici, nous présentons une méthode pour développer le tueur naturel du sang périphérique (PBNK), les cellules NK des tissus hépatiques et les cellules du récepteur antigénique chimérique (CAR)-NK dérivées de cellules mononucléaires du sang périphérique (PBMC) ou du sang de cordon (CB). Ce protocole démontre l’expansion des cellules NK et CAR-NK à l’aide de cellules nourricières 221-mIL-21 en plus de la pureté optimisée des cellules NK expansées.

TUEUR NATUREL (NK) ET PROCÉDÉ D’EXPANSION CELLULAIRE CAR-NK UTILISANT UNE LIGNÉE CELLULAIRE B MODIFIÉE PAR UNE LIGNÉE CELLULAIRE B LIÉE À LA MEMBRANE

Le présent protocole montre comment différencier les cellules CD3−/CD45+CD56+ présentant une cytotoxicité légère des cellules souches à potentiel élargi humain (CSEPH) dans des conditions de culture 3D et 2D. Cela permet une validation phénotypique de routine sans la destruction du microenvironnement complexe.

Production de cellules tueuses naturelles à partir de cellules souches humaines à potentiel élargi

Ce protocole fournit un flux de travail rationalisé pour générer et tester des cellules T régulatrices du récepteur antigénique chimérique humain (CAR Tregs).

Génération de lymphocytes T régulateurs du récepteur de l’antigène chimérique humain

Nous décrivons un protocole de transfection pour produire des cellules tueuses naturelles à récepteur antigénique chimérique (CAR-NK) ciblant les agents pathogènes fongiques à l’aide du système de transposon non viral de la Belle au bois dormant. Pour évaluer l’activation spécifique de l’antigène, nous avons co-cultivé les cellules modifiées avec des tubes germinaux d’Aspergillus fumigatus et mesuré la sécrétion d’IFN-γ.

Ingénierie de cellules tueuses naturelles à récepteur antigénique chimérique ciblant les infections fongiques à l’aide du système de transposon non viral de la Belle au bois dormant

Ce protocole fournit un flux de travail standardisé in vitro. pour une mesure cohérente de la cytotoxicité naturelle, médiée par les récepteurs antigéniques chimériques et dépendante des anticorps des cellules humaines naturelles tueuses grâce à l’imagerie des cellules vivantes et à la cytométrie en flux.

Quantification de la cytotoxicité des cellules NK potentialisée par des récepteurs antigéniques chimériques et des anticorps thérapeutiques à l’aide d’imagerie à cellules vivantes et de cytométrie en flux

Découvrez une méthode de différenciation de cellules NK CAR dérivées d'iPSC humaines pour l'immunothérapie anticancéreuse. Ce protocole améliore l'activité antitumorale et la persistance in vivo grâce à l'intégration génique non virale et CRISPR-Cas9.

Progrès dans les cellules tueuses naturelles exprimant le récepteur de l’antigène chimérique dérivé de cellules souches pluripotentes humaines induites (Vidéo) | JoVE Journal

Progrès dans les cellules tueuses naturelles exprimant le récepteur de l’antigène chimérique dérivé de cellules souches pluripotentes humaines induites

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