Name: Injection intraveineuse optimisée chez le poisson-zèbre adulte (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-12-20T14:40:00.000+00:00
Duration: 5 min 17 s
Description: Découvrez une méthode d'injection intraveineuse optimisée pour le poisson-zèbre adulte. Cette technique améliore la survie et l'engraftement cellulaire pour l'étude des maladies hématologiques et le développement de nouvelles thérapies.

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<ol><li>Choi, T. Y., Choi, T. I., Lee, Y. R., Choe, S. K., Kim, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+as+an+animal+model+for+biomedical+research%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Zebrafish as an animal model for biomedical research.</a> Exp Mol Med. 53 (3), 310-317 (2021).</li>
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<li>Wu, J. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+xenograft+in+zebrafish+embryos%3A+a+new+platform+for+translational+research+in+gastric+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Patient-derived xenograft in zebrafish embryos: a new platform for translational research in gastric cancer.</a> J Exp Clin Cancer Res. 36 (1), 160(2017).</li>
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<li>Stoletov, K., Montel, V., Lester, R. D., Gonias, S. L., Klemke, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-resolution+imaging+of+the+dynamic+tumor+cell+vascular+interface+in+transparent+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">High-resolution imaging of the dynamic tumor cell vascular interface in transparent zebrafish.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 104 (44), 17406-17411 (2007).</li>
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<li>Wang, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgenic+IDH2%28R172K%29+and+IDH2%28R140Q%29+zebrafish+models+recapitulated+features+of+human+acute+myeloid+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Transgenic IDH2(R172K) and IDH2(R140Q) zebrafish models recapitulated features of human acute myeloid leukemia.</a> Oncogene. 42 (16), 1331(2023).</li>
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<li>Hilligan, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravenous+administration+of+BCG+protects+mice+against+lethal+SARS-CoV-2+challenge%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Intravenous administration of BCG protects mice against lethal SARS-CoV-2 challenge.</a> J Exp Med. 219 (2), e20211862(2022).</li>
<li>Moreo, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravenous+administration+of+BCG+in+mice+promotes+natural+killer+and+T+cell-mediated+antitumor+immunity+in+the+lung%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Intravenous administration of BCG in mice promotes natural killer and T cell-mediated antitumor immunity in the lung.</a> Nat Commun. 14 (1), 6090(2023).</li>
<li>Wang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravenous+administration+of+IL-12+encoding+self-replicating+RNA-lipid+nanoparticle+complex+leads+to+safe+and+effective+antitumor+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Intravenous administration of IL-12 encoding self-replicating RNA-lipid nanoparticle complex leads to safe and effective antitumor responses.</a> Sci Rep. 14 (1), 7366(2024).</li>
<li>Saleem, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+best+practice+for+validating+tail+vein+injections+in+rat+with+near-infrared-labeled+agents%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A new best practice for validating tail vein injections in rat with near-infrared-labeled agents.</a> J Vis Exp. (146), e59295(2019).</li>
<li>Rojas, A. M., Shiau, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain-localized+and+Intravenous+Microinjections+in+the+Larval+Zebrafish+to+Assess+Innate+Immune+Response%5BTitle%5D)+AND+%22Bio+Protoc%22%5BJournal%5D)">Brain-localized and Intravenous Microinjections in the Larval Zebrafish to Assess Innate Immune Response.</a> Bio Protoc. 11 (7), e3978(2021).</li>
<li>van Soest, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+static+immersion+and+intravenous+injection+systems+for+exposure+of+zebrafish+embryos+to+the+natural+pathogen+Edwardsiella+tarda%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Immunol%22%5BJournal%5D)">Comparison of static immersion and intravenous injection systems for exposure of zebrafish embryos to the natural pathogen Edwardsiella tarda.</a> BMC Immunol. 12, 58(2011).</li>
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<li>Gerlach, G. F., Schrader, L. N., Wingert, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissection+of+the+adult+zebrafish+kidney%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Dissection of the adult zebrafish kidney.</a> J Vis Exp. (54), e2839(2011).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Autoclaves stérilisateur à vapeur</td><td>HIRAYAMA&nbsp ;</td><td>HRG-140</td><td></td></tr><tr><td>Centrifugeuse 5424</td><td>Eppendorf</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Countess 3 Compteur de cellules automatisé</td><td>Thermofisher</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Countess II FL</td><td>Invitrogen</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ethyl 3-aminobenzoate de méthanesulfonate sel (Tricaine)</td><td>Sigma-aldrich</td><td>MKCL9483</td><td></td></tr><tr><td>Falcon 40 &micro ; Crépine à cellules m</td><td>CORNING</td><td></td><td>Bleu, stérile, emballé individuellement, 50/caisse</td></tr><tr><td>FBS, qualifié</td><td>Gibco</td><td>26140079</td><td></td></tr><tr><td>FITC-Dextran (MW 10000)&nbsp ;</td><td>MedChemExpress</td><td>60842-46-8</td><td></td></tr><tr><td>Aiguille d’injection</td><td>Hamilton ;</td><td>HAMI207434</td><td>34 G, longueur 10 mm</td></tr><tr><td>Micro seringue</td><td>Hamilton&nbsp ;</td><td>7635-01&nbsp ;</td><td>10 et micro ; Capacité L, modèle 701 RN</td></tr><tr><td>Nikon SMZ18</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>PBS pH 7,4 (1x)</td><td>Gibco</td><td>10010023</td><td></td></tr><tr><td>Pénicilline-Streptomycine (5 000 U/mL)</td><td>Gibco&trade ;</td><td>15070063</td><td>100x</td></tr><tr><td>pointes de pipette</td><td>Eppendorf&nbsp ;</td><td>epTIPS</td><td></td></tr><tr><td>Pipette monocanal</td><td>Eppendorf&nbsp ;</td><td>05-403-151</td><td></td></tr><tr><td>Eau distillée ultrapure</td><td>Invitrogen</td><td>10977015</td><td></td></tr></tbody></table>

injection intraveineuse optimisée chez le poisson-zèbre adulte

Optimized Intravenous Injection in Adult Zebrafish

Pour évaluer l’efficacité et la précision de différentes méthodes d’injection chez les poissons Casper adultes, une analyse comparative a été réalisée à l’aide de techniques intracardiques, OI et IV (figure 2A). Des quantités variables de cellules WKM de poissons Tg(mpo : EGFP) ont été injectées, chacune mélangée avec un colorant FITC-dextran à des concentrations de 1 × 105 et de 3 × 105 cellules. Le succès de chaque méthode a été déterminé par une évaluation microscopique immédiate de la présence du signal GFP après l’injection. Les résultats ont révélé des variations significatives dans le succès de la livraison entre les méthodes. La méthode d’injection IV a démontré la plus grande efficacité, avec des signaux GFP détectés chez 41 des 43 poissons. En revanche, la méthode d’osmose inverse a montré un succès limité, avec des injections réussies observées chez seulement 3 poissons sur 37. La méthode intracardiaque a permis d’accoucher avec succès chez 11 des 40 poissons (figure 2A). La survie des poissons transplantés a également été surveillée. Les poissons injectés par les méthodes OI et intracardiaque avaient des taux de survie significativement inférieurs à ceux injectés par voie intraveineuse (figure 2B). Notamment, le nombre de cellules injectées a influencé les taux de survie chez les poissons injectés par voie intraveineuse, les receveurs recevant 3 × 105 cellules montrant une meilleure survie. Ces résultats mettent en évidence l’efficacité et la fiabilité supérieures de la méthode d’injection IV dans l’administration de cellules et de substances dans le poisson-zèbre adulte.
L’efficacité de la greffe des cellules WKM chez les poissons Casper receveurs a été évaluée de manière approfondie en surveillant le signal GFP des cellules transplantées. Chez les poissons qui ont reçu des injections IV, les signaux GFP étaient détectables dès le troisième jour après la transplantation (Figure 2C), indiquant un processus de greffe rapide et efficace. En revanche, les poissons qui ont subi des injections RO et intracardiaques ont montré une émergence retardée du signal GFP, indiquant un taux de greffe plus lent. Au 17e jour après la transplantation, les cellules transplantées avaient principalement repeuplé la moelle rénale, les signaux GFP les plus prononcés ayant été observés chez les poissons injectés par voie intraveineuse (figure 2C). L’analyse cytométrique en flux de la KM des receveurs a souligné l’efficacité de la méthode d’injection IV. Chez les receveurs ayant reçu une injection initiale de 3 × 10à 5 cellules par voie intraveineuse, environ 18 % des cellules de la KM étaient positives à la GFP, une proportion similaire à celle trouvée dans la moelle rénale du poisson donneur Tg(mpo : EGFP) qui n’avait subi aucune transplantation (Figure 2D,E). En revanche, l’injection intracardiaque a donné environ 5 % de cellules GFP positives, tandis que la méthode RO n’a produit qu’environ 2 % de cellules GFP positives dans la moelle rénale des receveurs. De plus, le taux de greffe était corrélé positivement avec le nombre de cellules injectées, démontrant que des doses de cellules plus élevées entraînaient une plus grande greffe. Ces résultats confirment la robustesse de la technique d’injection IV pour faciliter la greffe cellulaire et le repeuplement ultérieur de la moelle rénale.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67463/67463fig01v2.jpg"> 
Figure 1 : Résultats de survie après l’irradiation et l’injection intraveineuse chez le poisson-zèbre adulte. (A) Les poissons Casper ont été exposés à une irradiation allant jusqu’à 35 Gy et ont surveillé leur survie pendant 30 jours, confirmant que la dose sublétale de 25 Gy était (n = 10 pour tous les groupes). (B) Des diagrammes schématiques qui illustrent les sites d’injection pour le poisson zèbre Casper et le poisson zèbre TU, ainsi que des exemples de poissons injectés avec succès. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67463/67463fig01largev2.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67463/67463fig02v2.jpg"> 
Figure 2 : Comparaison des injections rétro-orbitaires, intracardiaques et intraveineuses chez le poisson-zèbre adulte. (A) Représentations schématiques et résultats représentatifs des méthodes d’injection OI, intracardiaque et IV chez le poisson-zèbre adulte. Les chiffres dans le coin inférieur droit indiquent le nombre de poissons injectés avec succès ou mal injectés par rapport au nombre total tenté pour chaque méthode, le signal GFP a été vérifié au microscope fluorescent immédiatement après l’injection. (B) Survie globale des receveurs après transplantation avec différents nombres de cellules de moelle rénale de donneur par différentes méthodes d’injection (IV-100K : n = 24 ; Intracardique-100K : n = 10 ; RO-100K : n = 12 ; IV-300K : n = 20 ; Intracardique-300K : n = 6 ; RO-300K : n = 8). (C) Observation de l’efficacité de la greffe chez les receveurs après la transplantation via les méthodes d’injection RO, intracardique et IV (D) Graphique de cytométrie en flux représentatif pour les cellules GFP-positives dans la KM des receveurs à 17 jours après la transplantation. (E) Le pourcentage de cellules GFP+ dans le KM des receveurs 17 jours après la transplantation, ainsi que dans le KM du poisson donneur Tg(mpo :EGFP) sans irradiation (IV-100K : n = 30 ; Intracardique-100K : n = 28 ; RO-100K : n = 22 ; IV-300K : n = 22 ; Intracardique-300K : n = 26 ; RO-300K : n = 18). Les données sont moyennes ± s.e.m. Une ANOVA à un facteur a été réalisée pour D. Un test de log-rank a été effectué pour B. *P &lt; 0,05, **P &lt; 0,01, ***P &lt; 0,001, ****P &lt; 0,0001. Barres d’échelle = 1 mm (A, C). Abréviations : RO = rétro-orbitale ; IV = intraveineuse ; GFP = protéine fluorescente verte ; KM = moelle rénale ; SSC-A = surface de crête de diffusion latérale ; FITC-A = surface du pic d’isothiocyanate de fluorescéine. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67463/67463fig02largev2.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>

Injection intraveineuse optimisée chez le poisson-zèbre adulte

Intravenous (IV) injection is widely recognized as the most effective and commonly utilized method for achieving systemic delivery of substances in ...

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Ici, nous montrons comment faire rétro-orbitaires d'injection chez le poisson zèbre adulte.

Rétro-orbitaire d&#39;injection chez le poisson zèbre pour adultes

Nous décrivons une technique de micro-injection de la famille des aminosides, la gentamicine, en 2 jours post-fetilization (DPF) des larves de poisson zèbre pour induire des lésions rénales aiguës (IRA). Nous décrivons également une méthode pour monter toute l'immunohistochimie, plastique enrobage et de sectionnement des larves de poisson zèbre pour visualiser les dégâts médiation AKI.

Microinjections intraveineuse de larves de poisson zèbre pour étudier lésions rénales aiguës

Nous démontrons injection intrapéritonéale dans le poisson zèbre adulte. Nous utilisons une microseringue 10 ul Nanofil contrôlée par un contrôleur Micro4 et UltraMicroPump III. Cette manifestation comprend l'utilisation de l'eau froide comme anesthésique.

Injection intrapéritonéale en Zebrafish adultes

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Injection intrapéritonéale : une méthode d’administration de solution dans la cavité abdominale d’un poisson-zèbre adulte

Cette vidéo décrit la technique d’administration de composés dans le cœur du poisson-zèbre adulte par injection intrathoracique.

Injection intrathoracique : administration composée au cœur du poisson-zèbre adulte

Nous décrivons ici un protocole pour la vaccination de l’adulte poisson zèbre (Danio rerio) avec un vaccin à base d’ADN et de démontrer la validation d’un événement de vaccination réussie. Cette méthode convient pour la projection préclinique de vaccins candidats dans divers modèles d’infection.

Vaccination de poisson-zèbre adulte pour la projection préclinique des vaccins basés sur l’ADN

Cette méthode repose sur l’injection de 0,5 − 3 μL de solution dans le thorax du zébrafish adulte. La procédure fournit efficacement des protéines et des composés chimiques à la proximité du cœur de zébrafish sans endommager l’organe. L’approche est appropriée pour tester les effets des facteurs exogènes sur divers tissus du cœur.

Injection intrathoracique pour l’étude du coeur de zebrafish adulte

Une nouvelle méthode d’injection intrapéritonéale (IP) chez le poisson-zèbre adulte est décrite. Lors de la manipulation de composés toxiques tels que la doxorubicine, cette procédure est plus efficace que les deux méthodes de propriété intellectuelle précédemment mentionnées. La technique est conçue pour être facilement adoptée par les chercheurs ayant une expérience limitée du modèle du poisson zèbre.

Une technique d’injection intrapéritonéale chez le poisson-zèbre adulte qui minimise les dommages corporels et la mortalité associée

Ce manuscrit présente en détail la procédure d’injection intra-iliaque dans l’artère iliaque (AII), une technique permettant d’administrer des cellules cancéreuses spécifiquement aux tissus des membres postérieurs, y compris les os, afin d’établir des métastases osseuses expérimentales. Bien qu’initialement établi avec des modèles de tumeurs mammaires, ce protocole peut être facilement étendu à d’autres types de cancer.

Intra-iliaque Artère injection pour la modélisation efficace et sélective des métastases osseuses Microscopique

Découvrez une méthode d'injection intraveineuse optimisée pour le poisson-zèbre adulte. Cette technique améliore la survie et l'engraftement cellulaire pour l'étude des maladies hématologiques et le développement de nouvelles thérapies.

Injection intraveineuse optimisée chez le poisson-zèbre adulte

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