Name: Cryosectionnement et immunomarquage de la rétine de souris (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-02-28T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 30 s
Description: Apprenez le cryosectionnement et l'immunomarquage de la rétine de souris pour la recherche en neurosciences et ophtalmologie. Cette méthode permet d'obtenir des coupes de haute qualité préservant la morphologie des photorécepteurs.

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<ol><li>Tokuyasu, K. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunochemistry+on+ultrathin+frozen+sections%5BTitle%5D)+AND+%22Histochem+J%22%5BJournal%5D)">Immunochemistry on ultrathin frozen sections.</a> Histochem J. 12 (4), 381-403 (1980).</li>
<li>Ramos-Vara, J. A., Miller, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((When+tissue+antigens+and+antibodies+get+along%3A+Revisiting+the+technical+aspects+of+immunohistochemistry--the+red%2C+brown%2C+and+blue+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+Pathol%22%5BJournal%5D)">When tissue antigens and antibodies get along: Revisiting the technical aspects of immunohistochemistry--the red, brown, and blue technique.</a> Vet Pathol. 51 (1), 42-87 (2014).</li>
<li>Usukura, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+cryosectioning+technique+for+the+observation+of+intracellular+structures+and+immunocytochemistry+of+tissues+in+atomic+force+microscopy+%28AFM%29%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">A cryosectioning technique for the observation of intracellular structures and immunocytochemistry of tissues in atomic force microscopy (AFM).</a> Sci Rep. 7 (1), 6462(2017).</li>
<li>Park, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Supramolecular+organization+of+rhodopsin+in+rod+photoreceptor+cell+membranes%5BTitle%5D)+AND+%22Pflugers+Arch%22%5BJournal%5D)">Supramolecular organization of rhodopsin in rod photoreceptor cell membranes.</a> Pflugers Arch. 473 (9), 1361-1376 (2021).</li>
<li>Boonstra, H., Oosterhuis, J. W., Oosterhuis, A. M., Fleuren, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cervical+tissue+shrinkage+by+formaldehyde+fixation%2C+paraffin+wax+embedding%2C+section+cutting+and+mounting%5BTitle%5D)+AND+%22Virchows+Arch+A+Pathol+Anat+Histopathol%22%5BJournal%5D)">Cervical tissue shrinkage by formaldehyde fixation, paraffin wax embedding, section cutting and mounting.</a> Virchows Arch A Pathol Anat Histopathol. 402 (2), 195-201 (1983).</li>
<li>Stradleigh, T. W., Ishida, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fixation+strategies+for+retinal+immunohistochemistry%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Retin+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Fixation strategies for retinal immunohistochemistry.</a> Prog Retin Eye Res. 48, 181-202 (2015).</li>
<li>Thavarajah, R., Mudimbaimannar, V. K., Elizabeth, J., Rao, U. K., Ranganathan, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+and+physical+basics+of+routine+formaldehyde+fixation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Oral+Maxillofac+Pathol%22%5BJournal%5D)">Chemical and physical basics of routine formaldehyde fixation.</a> J Oral Maxillofac Pathol. 16 (3), 400-405 (2012).</li>
<li>Li, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+improved+method+for+preparation+of+mouse+retinal+cryosections%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Histochem%22%5BJournal%5D)">An improved method for preparation of mouse retinal cryosections.</a> Eur J Histochem. 64 (3), 3154(2020).</li>
<li>Yang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+quick+protocol+for+the+preparation+of+mouse+retinal+cryosections+for+immunohistochemistry%5BTitle%5D)+AND+%22Open+Biol%22%5BJournal%5D)">A quick protocol for the preparation of mouse retinal cryosections for immunohistochemistry.</a> Open Biol. 11 (7), 210076(2021).</li>
<li>Szel, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unique+topographic+separation+of+two+spectral+classes+of+cones+in+the+mouse+retina%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Unique topographic separation of two spectral classes of cones in the mouse retina.</a> J Comp Neurol. 325 (3), 327-342 (1992).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>-80 &deg ; C congélateur</td><td>Haier</td><td>DW-86L626</td><td></td></tr><tr><td>Lames de microscope à adhérence</td><td>CITOTEST</td><td>80312-3161</td><td></td></tr><tr><td>Alexa488-Goat anti-Rabbit</td><td>Proteintech</td><td>SA00006-2</td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6J souris</td><td>The Jackson Laboratory</td><td>664</td><td></td></tr><tr><td>Microtome de cryosection</td><td>Leica</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Cryostat</td><td>LEICA</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Cell Signaling Technology</td><td>4083S</td><td></td></tr><tr><td>Microscope de dissection</td><td>ZEISS</td><td>3943030830</td><td></td></tr><tr><td>Sérum d’âne</td><td>Solarbio</td><td>S9100</td><td></td></tr><tr><td>Moules d’encastrement</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>1841</td><td></td></tr><tr><td>Ciseaux de dissection fine</td><td>RWD</td><td>S13001-10</td><td></td></tr><tr><td>Pince fine</td><td>RWD</td><td>F11020-11</td><td></td></tr><tr><td>Milieu de montage aqueux Fluoromount</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F4680</td><td></td></tr><tr><td>Incubateur</td><td>Shanghai Yuejin</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1049330500</td><td></td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1048771000</td><td></td></tr><tr><td>Kimwipes</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>FIS-06666</td><td></td></tr><tr><td>Microscope confocal laser</td><td>ZEISS</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Couvercle de microscope Verre</td><td>CITOTEST</td><td>80340-3610</td><td></td></tr><tr><td>Na2HPO4</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1065860500</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9888</td><td></td></tr><tr><td>NaOH</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1091371003</td><td></td></tr><tr><td>O.C.T COMPOUND</td><td>Sakura</td><td>4583</td><td></td></tr><tr><td>Pap</td><td>pen Sigma-Aldrich</td><td>Z672548</td><td></td></tr><tr><td>PFA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>441244</td><td></td></tr><tr><td>Rabbit anti-PDE6B</td><td>Proteintech</td><td>22063-1-AP</td><td></td></tr><tr><td>Shaker</td><td>SCILOGEX</td><td>8042210200</td><td></td></tr><tr><td>Ciseaux à ressort</td><td>RWD</td><td>S11036-08</td><td></td></tr><tr><td>Saccharose</td><td>BioFroxx</td><td>1245GR500</td><td></td></tr><tr><td>Super glue</td><td>Deli</td><td>7147S</td><td></td></tr><tr><td>Corde de tennis (1.24 mm)</td><td>Gosen</td><td>TS761</td><td></td></tr><tr><td>Tribromoethanol</td><td>Macklin</td><td>T831042</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Solarbio</td><td>IT9100</td><td></td></tr></tbody></table>

cryosectionnement et immunomarquage de la rétine de souris

Cryosectioning and Immunostaining of Mouse Retina

En suivant le protocole décrit ci-dessus, les yeux de souris C57Bl/6J de type sauvage âgées de 1 mois ont été fixés dans 4 % de PFA. Les échantillons fixés ont ensuite été intégrés dans l’OCT et cryosectionnés. Les coupes ont été immunomarquées avec un anticorps anti-PDE6B et contre-colorées avec du DAPI pour marquer les noyaux. La PDE6B est une protéine de phototransduction spécifiquement exprimée dans les cellules photoréceptrices des bâtonnets4. Par rapport aux protocoles traditionnels, ce prot...

Cryosectionnement et immunomarquage de la rétine de souris

Tissue sectioning and immunohistochemistry are essential techniques in histological and pathological studies of retinal diseases using animal models. ...

cryosectioning-and-immunostaining-of-mouse-retina

Research

Recherche

JoVE Journal

Neuroscience

Neurosciences

La rétine murin néonatal fournit un modèle physiologique bien caractérisé de l'angiogenèse, qui permet à des enquêtes sur les rôles des différents gènes ou des médicaments qui modulent l'angiogenèse dans...

Mont entiers immunofluorescence de la rétine de souris néonatal chargé d&#39;enquêter sur l&#39;angiogenèse<em&gt; In vivo</em

La méthode de post-intégration immunogold est l’un des moyens les plus efficaces de fournir des analyses à haute résolution de la localisation subcellulaire de molécules spécifiques. Nous décrivons ici un protocole permettant d’analyser quantitativement les récepteurs du glutamate au niveau des synapses du ruban rétinien.

Haute résolution quantitative immunomarquage Analyse des Récepteurs Membranaires au rétiniennes Synapses ruban

Nous montrons trois techniques de préparation de tissus différents pour la visualisation d’immunohistochemical des péricytes microvasculaire rétine de rat, c'est-à-dire, cryo-sections, ensemble-montages et hypotonique isolement du réseau vasculaire.

Rétiniennes Cryo-sections, ensemble-montages et préparations hypotonique vaisseaux isolés pour la visualisation d’Immunohistochemical des péricytes microvasculaire

Ce rapport décrit des méthodes complètes pour préparer les sections congelées de rétine de souris pour l'immunohistochimie (IHC).  Les méthodes décrites incluent la dissection de la tasse postérieure oculaire, la fixation de paraformaldehyde, l'intégration dans la température de coupe optimale (OCT) orientation de médias et de tissu, sectionnement et immunostaining.

Préparation de la souris Retinal Cryo-sections pour l'immunohistochimie

Ici, nous présentons un protocole pour adapter la méthode CLARITY des tissus cérébraux pour les rétines de montage entier afin d’améliorer la qualité de la coloration immunohistochimique standard et de l’imagerie à haute résolution des neurones rétinins et de leurs structures subcellulaires.

Immunomarquage de rétines à monture entière avec la méthode de nettoyage tissulaire CLARITY

Ce protocole présente deux techniques pour isoler les compartiments subcellulaires des photorécepteurs de bâtonnets murins pour l’analyse des protéines. La première méthode utilise de la rétine vivante et du papier filtre de cellulose pour séparer les segments extérieurs des tiges, tandis que la seconde utilise de la rétine lyophilisée et du ruban adhésif pour décoller les couches internes et externes des segments.

Deux méthodes de peeling pour l’isolement des compartiments des cellules photoréceptrices dans la rétine de la souris pour l’analyse des protéines

Un protocole d’immunohistochimie détaillé est présenté ici pour identifier, valider et cibler les caspases fonctionnellement pertinentes dans les tissus complexes.

Quantification de la caspase-9 immunocolorée dans le tissu rétinien

Ce protocole décrit la procédure d’isolement de la rétine de souris et d’immunomarquage pour marquer toutes les cellules ganglionnaires de la rétine (CGR). Le processus est suivi d’une imagerie et d’un comptage automatique des CGR à l’aide d’un logiciel basé sur l’IA, offrant une méthode simple, rapide et précise pour quantifier les CGR dans l’ensemble de la rétine de la souris.

Immunocoloration intégrale et comptage automatique des cellules ganglionnaires rétiniennes de souris

Les péricytes dans le système vasculaire rétinien ont été examinés par coloration immunofluorescente avec le récepteur du facteur de croissance dérivé des plaquettes β après injection rétro-orbitaire de lectine fluorescente de tomate. La rétine marquée a ensuite été traitée avec la méthode de nettoyage des tissus et montée entière pour visualiser les vues tridimensionnelles des péricytes entourant le système vasculaire rétinien au microscope confocal.

Visualisation 3D des péricytes vasculaires rétiniens chez la souris par immunomarquage 

La rétine présente une organisation spatiale complexe à travers sa structure laminaire. Les techniques modernes de transcriptomique spatiale et de séquençage nécessitent des coupes de tissus &lt; 20 μm d’épaisseur, ce qui limite leur applicabilité à la recherche rétinienne. Cette méthode de cryosectionnement fraîchement congelée produit de fines sections de la rétine de la souris tout en préservant les relations spatiales planes, permettant une cartographie moléculaire complète à travers les...

En face Cryosectionnement de la rétine de souris pour l’analyse moléculaire spatiale de haute dimension

Apprenez le cryosectionnement et l'immunomarquage de la rétine de souris pour la recherche en neurosciences et ophtalmologie. Cette méthode permet d'obtenir des coupes de haute qualité préservant la morphologie des photorécepteurs.

Cryosectionnement et immunomarquage de la rétine de souris

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