Name: Détection rapide de la virulence et du typage d’Helicobacter pylori à l’aide de la technologie de marquage par points quantiques (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-13T13:05:00.000+00:00
Duration: 5 min 13 s
Description: Découvrez la détection rapide de la virulence d'Helicobacter pylori par marquage à points quantiques et immunochromatographie. Cette méthode précise permet de différencier les souches et d'optimiser les traitements personnalisés.

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Cette étude (KY2025-191-01) a été réalisée conformément aux directives du comité d’éthique de la recherche humaine de l’Hôpital populaire de la province du Guangdong (Académie des sciences médicales du Guangdong), Université de médecine du Sud. Cet article est conforme à la demande de dérogation au consentement éclairé.
REMARQUE : Cette étude vise à utiliser la technologie des points quantiques pour concevoir et développer un kit permettant de diagnostiquer si l’espèce sanguine des participants contient des anticorps anti-uréase d’Helicobacter pylori (Uréase), des anticorps de la cytotoxine vacuolaire A (VacA) et des anticorps anti-toxine du gène A lié à la cytotoxine (CagA) afin de déterminer si H. pylori est infecté et si la souche infectée est de type I ou de type II. Ce kit utilise une méthode sandwich à double antigène pour mesurer les anticorps d’Helicobacter pylori Urease, les anticorps CagA et les anticorps VacA. Lorsque l’échantillon de test contenant la substance cible est ajouté au tampon d’échantillonnage, il s’écoule à travers le tampon quantique et la membrane par siphon, formant un complexe antigène-anticorps en phase solide. Après le repérage, la ligne de détection et la masse sont lues respectivement par l’analyseur. La valeur du signal de la ligne de contrôle est utilisée pour déterminer l’état négatif et positif de l’anticorps Urase, de l’anticorps CagA et de l’anticorps VacA sur la base des valeurs du signal T/C de chacun des trois anticorps. Le schéma de conception est illustré à la figure 1.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67792/67792fig01.jpg"> 
Figure 1 : Schéma de principe de la carte de test de typage de H. pylori. La figure montre la structure et la composition de la carte de test. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67792/67792fig01large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
1. Préparation du kit
<ol>
	<li>Mise en place d’un système de réaction tampon d’acide éthanesulfonique (MES) QDs-2-(n-morphine)<ol>
		<li>Équilibrez la solution QDs d’origine à la température ambiante (RT). Ensuite, aspirez 1000 μL et ajoutez un volume égal de solution de MES 2x (la concentration finale de MES était de 10 mmol/L).</li>
		<li>Mélanger, agiter et soniser pendant 30 s à 3 min.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Activation<ol>
		<li>Ajouter 20 mg/mL de 1-éthyl-3-(3-diméthylaminopropyl)carbodiimide (EDC)/N-hydroxysuccinimide (NHS) dans le système tampon QDs-MES dans un rapport de 10:1. Mélangez, secouez et sioniquez pendant 3 min.</li>
		<li>Placez la solution préparée dans un bain-marie à 37 °C pendant 15 min et centrifugez-la à 13 000 × g pendant 20 min.</li>
		<li>Retirer le surnageant de la solution centrifugée et le dissoudre à nouveau avec une solution 1x MES. Soufflez la solution à plusieurs reprises avec une pipette, secouez-la pour la mélanger uniformément et sonicez-la pendant 3 min.</li>
		<li>Placez la solution ci-dessus dans un bain-marie à 37 °C pendant 15 min et centrifugez à 13 000 × g pendant 20 min.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Couplage<ol>
		<li>Ajouter 0,03 mg d’antigène d’uréase, d’antigène CagA, d’antigène VacA et d’IgG anti-souris de chèvre à 1000 μL de solution d’activation, pipeter l’embout à plusieurs reprises, agiter et sonicer pendant 3 min.</li>
		<li>Placez la solution ci-dessus dans un bain-marie à 37 °C et réagissez pendant 3 h.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Fermeture et stockage<ol>
		<li>Ajouter 100 μL de solution bloquante (tableau supplémentaire 1) et incuber pendant 1 h.</li>
		<li>Centrifuger la solution bloquée à 13 000 × g pendant 15 min.</li>
		<li>Retirer le surnageant de la solution centrifugée, ajouter 750 μL de solution de reconstitution (tableau supplémentaire 1), pipeter, agiter et sonicer à plusieurs reprises pendant 5 min, puis conserver à 4 °C.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
2. Préparation des plaques revêtues
<ol>
	<li>Préparation des pads quantiques<ol>
		<li>Diluez le complexe d’antigène de H. pylori marqué par des points quantiques 1:5 avec un tampon de dilution de points quantiques pour préparer la quantité requise en fonction de la production par lots.</li>
		<li>Prenez le tampon quantique et vaporisez uniformément une certaine quantité de complexe d’antigène de H. pylori marqué par des points quantiques sur le tampon à l’aide d’un pulvérisateur à film et séchez-le à 37 °C pendant 30 min.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Préparation de la membrane<ol>
		<li>Utilisez le tampon d’impression pour diluer les matériaux de revêtement de la ligne de contrôle et de la ligne d’essai et préparer la quantité requise en fonction du volume de production du lot.</li>
		<li>Collez la membrane de nitrocellulose sur la plaque de polychlorure de vinyle (PVC), utilisez un pulvérisateur d’or rayé pour appliquer uniformément l’application uniforme de la ligne de contrôle de la qualité et tester les matériaux de la ligne sur la membrane, et faites sécher à 57 °C pendant 24 h.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
3. Assemblage
<ol>
	<li>Collez les pastilles quantiques et d’échantillon sur la plaque de PVC pelliculée dans l’ordre.</li>
</ol>
4. Couper en lanières
<ol>
	<li>À l’aide d’un coupe-bandes, coupez la grande planche assemblée en bandelettes de test.</li>
</ol>
5. Emballage intérieur
<ol>
	<li>Complétez l’emballage selon les exigences de composition du kit. REMARQUE : Les composants du kit sont les suivants : (i) Carte de test : Il se compose d’une coque de bandelette de test et d’une bandelette de test. La bandelette de test se compose d’une plaque en PVC, d’un tampon d’échantillonnage, d’un tampon quantique (un complexe d’antigènes marqué par des points quantiques ; le complexe contient l’antigène Urease, l’antigène CagA, l’antigène VacA et l’IgG de souris), une membrane nitrocellulosique (la zone de détection est fixée avec l’antigène VacA, l’antigène CagA et l’antigène Urease (expression eucaryote de l’antigène recombinant), et la zone de contrôle de la qualité est recouverte d’IgG anti-souris de chèvre (poly anticorps de chèvre)), et du papier absorbant. Différentes spécifications d’emballage ont des quantités de cartes de test différentes. Une carte de test est nécessaire pour le réactif d’une personne. (ii) Carte SD : 1 pièce/boîte. Les composants de la carte de test et de la carte SD (Secure Digital) provenant de différents lots de kits de test ne doivent pas être mélangés.</li>
</ol>
6. Traitement des échantillons
REMARQUE : Pour le prélèvement d’échantillons, reportez-vous aux Procédures nationales d’exploitation des laboratoires cliniques.
<ol>
	<li>Prélevez le sang dans un tube de gel de séparation. Prenez soin d’éviter l’hémolyse.</li>
	<li>Testez l’échantillon de sérum séparé dans les 4 heures à température ambiante (RT). S’il ne peut pas être testé à temps, conservez l’échantillon à une température de 2 à 8 °C pendant 3 jours. À long terme (dans un délai de 1 an), scellez-le et conservez-le à une température inférieure à -20 °C.</li>
	<li>Restaurez les échantillons en RT et mélangez-les soigneusement avant de les utiliser. REMARQUE : Les échantillons congelés et décongelés doivent être complètement décongelés avant d’être utilisés, et le nombre de cycles de congélation-décongélation ne doit pas dépasser cinq. Des échantillons congelés et décongelés à plusieurs reprises peuvent entraîner la détérioration de l’analyte et doivent être évités. Des échantillons de chyle et d’hémolyse sévères affecteront également le test et doivent être évités.</li>
</ol>
7. Procédure de l’essai
<ol>
	<li>Sortez le kit de réactifs et les matériaux de contrôle qualité pour équilibrer en RT.</li>
	<li>Préparation de l’échantillon : Centrifuger l’ensemble des échantillons de sang à 1467 g pendant 10 min.</li>
	<li>Vérifiez que le numéro de lot de la carte SD correspond à celui du kit de réactifs. Insérez la carte SD dans l’instrument pour l’étalonnage automatique.</li>
	<li>Mettez l’instrument et l’ordinateur d’opération sous tension. Lancez le logiciel désigné et sélectionnez le module de test . Choisissez Paramètres d’initialisation pour initialiser l’instrument et attendez que l’opération soit terminée.</li>
	<li>Accédez à la zone de réactif de l’instrument et retirez l’emplacement de la carte de test. Ouvrez le kit de réactifs et sélectionnez le nombre requis de cartes de test.</li>
	<li>Ouvrez les sachets en aluminium des cartes de test et placez-les dans la fente selon l’orientation indiquée. Réinsérez la fente pour carte dans la zone de réactif de l’instrument.</li>
	<li>Tests de contrôle de la qualité (CQ)<ol>
		<li>Dans le module Test , sélectionnez Saisie manuelle. Cliquez sur Saisie d’informations et saisissez les informations spécifiques sur le matériau de contrôle qualité. Cliquez sur Générer. Placez les matériaux de contrôle qualité dans le support d’échantillons désigné, en veillant à ce que l’ordre et l’orientation soient corrects.</li>
		<li>Cliquez sur Démarrer le test pour lancer le test de contrôle qualité. L’aiguille d’échantillon de l’instrument aspire 80 μL de l’échantillon et le distribue verticalement dans le puits d’échantillon. L’instrument commencera à chronométrer automatiquement après la distribution de l’échantillon. Après 15 min, l’instrument effectuera la détection, lira les valeurs de mesure et affichera les résultats.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Exemple de test : dans le module de test , sélectionnez LIS bidirectionnel. Placez les échantillons à tester dans le support d’échantillons désigné, en veillant à ce qu’ils soient correctement ordonnés et orientés. Cliquez sur Démarrer le test. De même, l’instrument aspirera 80 μL d’échantillon de chacun et les traitera de la même manière que le processus de CQ.</li>
	<li>Une fois les tests terminés, retirez les cartes de test usagées de l’instrument et jetez-les avec les déchets médicaux.</li>
</ol>
8. Contrôle de la qualité
<ol>
	<li>H. pylori négatif : Vérifiez et assurez-vous que les résultats des produits de référence négatifs pour Helicobacter pylori , à savoir l’anticorps anti-uréase, l’anticorps CagA et l’anticorps VacA, sont tous négatifs.</li>
	<li>Infection à H. pylori de type II : Vérifiez et assurez-vous que le produit de référence d’Helicobacter pylori de type II, c’est-à-dire l’anticorps Urease, est positif et que les résultats de l’anticorps CagA et de l’anticorps VacA sont tous négatifs.</li>
	<li>Infection à H. pylori de type I : Vérifiez et assurez-vous que le produit de référence d’Helicobacter pylori de type I, c’est-à-dire que l’anticorps contre l’uréase est positif, l’anticorps CagA et/ou l’anticorps VacA sont positifs.</li>
</ol>
9. Analyse des résultats
<ol>
	<li>Infection de type II par des souches faibles ou non toxigènes : Lorsque les résultats de l’anticorps Urease sont positifs et que les résultats des anticorps CagA et des anticorps VacA sont négatifs, interprétez-le comme une infection par une souche faible ou non toxigène de H. pylori .</li>
	<li>Infection de type I par des souches productrices de toxines hautement pathogènes : Lorsque le résultat de l’anticorps Urease est positif et que le résultat de l’anticorps CagA ou de l’anticorps VacA est positif, ou que les deux sont positifs, interprétez-le comme une infection par une souche productrice de toxine H. pylori hautement pathogène.</li>
	<li>Négatif : Lorsque les lectures de l’anticorps Urease, de l’anticorps CagA et de l’anticorps VacA sont toutes négatives, interprétez cela comme l’absence d’infection par des souches de H. pylori .</li>
	<li>Non valide : Lorsque l’instrument juge le résultat non valide, vérifiez qu’il n’y a pas de fonctionnement incorrect ou de défaillance du kit de réactifs et réessayez la procédure.</li>
</ol>
10. Étalonnage de l’analyseur de fluorescence
<ol>
	<li>Tout d’abord, allumez l’analyseur et laissez-le se réchauffer pendant environ 15 minutes pour stabiliser ses performances. Ensuite, insérez l’étalon d’étalonnage fourni par le fabricant dans le porte-échantillon.</li>
	<li>Ensuite, accédez à la fonction d’étalonnage sur l’interface de l’analyseur et lancez le processus. L’analyseur détectera automatiquement la fluorescence de l’étalon et ajustera ses paramètres internes en conséquence pour correspondre aux valeurs de référence prédéfinies.</li>
	<li>Après cela, retirez l’étalon d’étalonnage et insérez un échantillon blanc pour vérifier que les lectures sont dans la plage acceptable.</li>
	<li>La répétition régulière de ces étapes selon le calendrier recommandé permet de maintenir la précision de l’analyseur pour des mesures fiables.</li>
</ol>

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<li>Zhou, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+fast+and+sensitive+doubleantigen+sandwich+lateral+flow+immunoassay+based+on+quantum+dot+nanobeads+and+its+clinical+performance+in+detecting+SARSCoV2+total+antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22Sens+Actuators+B+Chem%22%5BJournal%5D)">Development of a fast and sensitive doubleantigen sandwich lateral flow immunoassay based on quantum dot nanobeads and its clinical performance in detecting SARSCoV2 total antibodies.</a> Sens Actuators B Chem. 343, 130139(2021).</li>
<li>Liu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Consistency+analysis+of+highsensitivity+cardiac+troponin+I+in+peripheral+blood+and+venous+blood+using+quantum+dot+immunofluorescence+method+and+its+clinical+application+in+acute+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Chest+Dis%22%5BJournal%5D)">Consistency analysis of highsensitivity cardiac troponin I in peripheral blood and venous blood using quantum dot immunofluorescence method and its clinical application in acute myocardial infarction.</a> J Chest Dis. 14 (4), 1267-1274 (2022).</li>
<li>Xirong, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+quantum+dotbased+lateral+flow+immunoassay+test+strips+for+rapid+and+sensitive+detection+of+SARSCoV2+neutralizing+antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Development of quantum dotbased lateral flow immunoassay test strips for rapid and sensitive detection of SARSCoV2 neutralizing antibodies.</a> Sci Rep. 13, 22253(2023).</li>
<li>Purwidyantri, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Programmable+graphenebased+microfluidic+sensor+for+DNA+detection%5BTitle%5D)+AND+%22Sens+Actuators+B+Chem%22%5BJournal%5D)">Programmable graphenebased microfluidic sensor for DNA detection.</a> Sens Actuators B Chem. 367, 132044(2022).</li>
<li>Lee, K. S., Wagner, M., Stocker, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ramanbased+sorting+of+microbial+cells+to+link+functions+to+their+genes%5BTitle%5D)+AND+%22Microb+Cell%22%5BJournal%5D)">Ramanbased sorting of microbial cells to link functions to their genes.</a> Microb Cell. 7 (3), 62-65 (2020).</li>
<li>Hu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Design+and+fabrication+of+carbon+dots+for+energy+conversion+and+storage%5BTitle%5D)+AND+%22Chem+Soc+Rev%22%5BJournal%5D)">Design and fabrication of carbon dots for energy conversion and storage.</a> Chem Soc Rev. 48 (8), 2315-2337 (2019).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Chlorhydrate de 1-(3-diméthylaminopropyl)-3-éthylcarbodiimide (EDC)</td><td>Sigma</td><td>25952-53-8</td><td>5 g/bouteille</td></tr><tr><td>Acide éthanesulfonique 2-(n-morphine) (MES)</td><td>Sigma</td><td>145224-94-8</td><td>100 g/bouteille</td></tr><tr><td>Centrifugeuse</td><td>Sigma</td><td>3K15</td><td></td></tr><tr><td>Analyseur d’immuno-fluorescence</td><td>Guangzhou Labsim Biotech Co., Ltd</td><td>Province du Guangdong Dispositif médical N° d’enregistrement </td><td></td>2017221743</tr><tr><td>Kit de test de dactylographie Helicobacter pylori&nbsp ;</td><td>Chongqing iSIA BIO-Technology Co., Ltd</td><td>Enregistrement national des dispositifs médicaux n° 20203400330</td><td>QDs Méthode d’immunofluorescence</td></tr><tr><td>Sel de sodium de N-hydroxythiosuccinimide (NHS)</td><td>Sigma</td><td>106627-54-7</td><td>1 g/bouteille</td></tr></tbody></table>

détection rapide de la virulence et du typage d’helicobacter pylori à l’aide de la technologie de marquage par points quantiques

Rapid Detection of Helicobacter pylori Virulence and Typing Using Quantum Dot Labeling Technology

La figure 2 montre le principe de fonctionnement de l’immunoanalyseur à fluorescence à points quantiques. Il se compose principalement d’une source lumineuse d’excitation, d’une source lumineuse réceptrice, d’un module de circuit de conversion photoélectrique, d’un circuit de traitement du signal, d’un circuit de conversion de valeur AD et d’un module de calcul de traitement du signal ; La source lumineuse d’excitation génère des marqueurs fluorescents. Il absorbe la lumière monochromatique ...

Détection rapide de la virulence et du typage d’Helicobacter pylori à l’aide de la technologie de marquage par points quantiques

We present a method based on quantum dot labeling technology for rapidly detecting the virulence of Helicobacter pylori and performing typing, aiming to ...

rapid-detection-helicobacter-pylori-virulence-typing-using-quantum

Research

Recherche

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie et infection

Le protocole présente une méthode non invasive pour le diagnostic rapide des infections de l’estomac à Helicobacter pylori par le test de corde et détermine sa résistance aux antibiotiques à la clarithromycine et à la lévofloxacine en utilisant la réaction en chaîne de la polymérase quantitative (qPCR).

Diagnostic rapide quantitatif par réaction en chaîne par polymérase (qPCR) de l’infection à Helicobacter pylori et de la résistance aux antibiotiques

Une méthode rapide et précise de détection de H. pylori et de test de résistance aux médicaments est très importante pour éradiquer efficacement H. pylori dans la pratique clinique. Ce protocole vise à présenter une méthodologie spécifique impliquant la réaction en chaîne quantitative par polymérase de la muqueuse gastrique (qPCR) pour la détection rapide de H. pylori et de la résistance aux antibiotiques.

Analyse quantitative de la réaction en chaîne par polymérase de la muqueuse gastrique pour détecter Helicobacter pylori et la résistance aux antibiotiques

Le protocole utilise un échantillonnage non invasif des selles combiné à une réaction en chaîne quantitative par polymérase pour offrir une méthode de diagnostic pratique et rapide de l’infection à Helicobacter pylori et de sa résistance à la clarithromycine et aux quinolones.

Détection de l’infection à Helicobacter pylori et de la résistance aux antibiotiques par analyse quantitative de la réaction en chaîne par polymérase dans les selles

Dans cette étude, une technique de détection sandwich basée sur des anticorps doubles a été développée pour la détection rapide des antigènes fécaux infectés par Helicobacter pylori.

Détection rapide de l’antigène fécal de l’infection à Helicobacter pylori grâce à la technologie de détection à double sandwich d’anticorps

Ce protocole décrit un simple adhésif à base de bandes approche pour l'échantillonnage de tomate et d'autres surfaces de produits frais, suivie d'une détection rapide des cellules de l'ensemble...

Combinaison de adhésif à base de bandes d&#39;échantillonnage et de fluorescence In situ</emHybridation> pour la détection rapide des Salmonella Sur les produits frais

Un rapide et précise au point de soins de test pour l'aspergillose pulmonaire invasive est présentée. Il tire parti de la technologie de flux latéral en utilisant un anticorps monoclonal spécifique qui se lie à...

Détection de l&#39;aspergillose pulmonaire invasive chez les patients hémopathie maligne en utilisant la technologie de flux latéral-

Cet article illustre l’utilisation du marquage radio par chasse d’impulsions en combinaison avec la photoréticulation spécifique au site pour surveiller les interactions entre une protéine d’intérêt et d’autres facteurs chez E. coli. Contrairement aux méthodes traditionnelles de réticulation chimique, cette approche génère des « instantanés » à haute résolution d’une voie d’assemblage ordonnée dans une cellule vivante.

Surveillance de l’assemblage d’un facteur de virulence bactérienne sécrété à l’aide d’une réticulation spécifique au site

Nous décrivons ici une méthode pour visualiser l’organite bactérien oncogénique connu sous le nom de système de sécrétion Cag de type IV (Cag-T4SS).  Nous constatons que le Cag-T4SS est produit de manière différentielle à la surface de H. pylori en réponse à des conditions variables de disponibilité du fer.

Haute résolution microscopie électronique de la Helicobacter pylori Cag sécrétion de type IV Système Pili Produit dans différentes conditions de Fer Disponibilité

Des complexes HLA / peptide de classe I intactes sont éliminées par les cellules cancéreuses, ce qui représente un biomarqueur potentiel de cancer concerné. En utilisant la technologie des capteurs sans étiquette et récepteur des cellules T imitant les anticorps monoclonaux, la détection de la remise MIF / HLA-A * 02: 01 complexes dans les surnageants de cellules MDA-MB-231, dopés sérum humain, et le plasma du patient est démontrée, ce qui permet le développement de un nouveau cancer de la...

Détection de l&#39;antigène leucocytaire humain biomarqueurs du cancer du sein Utilisant la technologie des biocapteurs Sans étiquette

Les cultures dérivées de cellules souches recèlent un énorme potentiel pour modéliser les maladies infectieuses. Ici, la culture d’organoïdes gastriques de souris et d’humains dérivés de cellules souches adultes est décrite. Les organoïdes sont micro-injectés avec l’agent pathogène gastrique Helicobacter pylori.

Organoïdes de modèle pour les maladies infectieuses: la culture des droits humains et murins organoïdes d&#39;estomac et microinjection de Helicobacter pylori

Découvrez la détection rapide de la virulence d'Helicobacter pylori par marquage à points quantiques et immunochromatographie. Cette méthode précise permet de différencier les souches et d'optimiser les traitements personnalisés.

Détection rapide de la virulence et du typage d’Helicobacter pylori à l’aide de la technologie de marquage par points quantiques (Vidéo) | JoVE Journal

Détection rapide de la virulence et du typage d’Helicobacter pylori à l’aide de la technologie de marquage par points quantiques

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