Name: Optimisation de l’isolement et de la purification des cellules mésangiales glomérulaires murines (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-07T14:50:00.000+00:00
Duration: 4 min 46 s
Description: Découvrez un protocole optimisé d'isolement et de culture de cellules mésangiales glomérulaires murines par digestion à la collagénase. Cette méthode robuste permet de maintenir l'expression protéique pour la recherche rénale.

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<ol><li>Pollak, M. R., Quaggin, S. E., Hoenig, M. P., Dworkin, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+glomerulus%3A+The+sphere+of+influence%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+J+Am+Soc+Nephrol%22%5BJournal%5D)">The glomerulus: The sphere of influence.</a> Clin J Am Soc Nephrol. 9 (8), 1461-1469 (2014).</li>
<li>Mené, P., Simonson, M. S., Dunn, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiology+of+the+mesangial+cell%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Rev%22%5BJournal%5D)">Physiology of the mesangial cell.</a> Physiol Rev. 69 (4), 1347-1424 (1989).</li>
<li>Avraham, S., Korin, B., Chung, J. J., Oxburgh, L., Shaw, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mesangial+cell+-+the+glomerular+stromal+cell%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Nephrol%22%5BJournal%5D)">The mesangial cell - the glomerular stromal cell.</a> Nat Rev Nephrol. 17 (12), 855-864 (2021).</li>
<li>Chadban, S. J., Atkins, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glomerulonephritis%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Glomerulonephritis.</a> Lancet. 365 (9473), 1797-1806 (2005).</li>
<li>Qian, Y., Feldman, E., Pennathur, S., Kretzler, M., Brosius, F. C. 3rd <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+fibrosis+to+sclerosis%3A+Mechanisms+of+glomerulosclerosis+in+diabetic+nephropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">From fibrosis to sclerosis: Mechanisms of glomerulosclerosis in diabetic nephropathy.</a> Diabetes. 57 (6), 1439-1445 (2008).</li>
<li>Zhu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Iga+Gut+microbiome+regulates+the+production+of+hypoglycosilated+iga1+via+the+tlr4+signaling+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Nephrol+Dial+Transplant%22%5BJournal%5D)">Iga Gut microbiome regulates the production of hypoglycosilated iga1 via the tlr4 signaling pathway.</a> Nephrol Dial Transplant. 39 (10), 1624-1641 (2024).</li>
<li>Kong, L. -L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+murine+models+of+diabetic+nephropathy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Diabetes+Res%22%5BJournal%5D)">Advances in murine models of diabetic nephropathy.</a> J Diabetes Res. 2013, 797548(2013).</li>
<li>Schiffer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibitory+smads+and+tgf-beta+signaling+in+glomerular+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Soc+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Inhibitory smads and tgf-beta signaling in glomerular cells.</a> J Am Soc Nephrol. 13 (11), 2657-2666 (2002).</li>
<li>Gyarmati, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sparsentan+improves+glomerular+hemodynamics%2C+cell+functions%2C+and+tissue+repair+in+a+mouse+model+of+FSGS%5BTitle%5D)+AND+%22JCI+Insight%22%5BJournal%5D)">Sparsentan improves glomerular hemodynamics, cell functions, and tissue repair in a mouse model of FSGS.</a> JCI Insight. 9 (19), e177775(2024).</li>
<li>Chafin, C. B., Regna, N. L., Hammond, S. E., Reilly, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+and+urinary+microRNA+alterations+in+NZB%2FW+mice+with+hydroxychloroquine+or+prednisone+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Immunopharmacol%22%5BJournal%5D)">Cellular and urinary microRNA alterations in NZB/W mice with hydroxychloroquine or prednisone treatment.</a> Int Immunopharmacol. 17 (3), 894-906 (2013).</li>
<li>Lucero, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tnf-%CE%B1+plus+il-1%CE%B2+induces+opposite+regulation+of+cx43+hemichannels+and+gap+junctions+in+mesangial+cells+through+a+rhoa%2Frock-dependent+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Tnf-α plus il-1β induces opposite regulation of cx43 hemichannels and gap junctions in mesangial cells through a rhoa/rock-dependent pathway.</a> Int J Mol Sci. 23 (17), (2022).</li>
<li>Schnaper, H. W., Hayashida, T., Hubchak, S. C., Poncelet, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tgf-beta+signal+transduction+and+mesangial+cell+fibrogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Renal+Physiol%22%5BJournal%5D)">Tgf-beta signal transduction and mesangial cell fibrogenesis.</a> Am J Physiol Renal Physiol. 284 (2), F243-F252 (2003).</li>
<li>Mackay, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glomerular+epithelial%2C+mesangial%2C+and+endothelial+cell+lines+from+transgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+Int%22%5BJournal%5D)">Glomerular epithelial, mesangial, and endothelial cell lines from transgenic mice.</a> Kidney Int. 33 (3), 677-684 (1988).</li>
<li>Wilson, H. M., Stewart, K. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glomerular+epithelial+and+mesangial+cell+culture+and+characterization%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Glomerular epithelial and mesangial cell culture and characterization.</a> Methods Mol Med. 107, 269-282 (2005).</li>
<li>Menè, P., Stoppacciaro, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+propagation+of+glomerular+mesangial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Isolation and propagation of glomerular mesangial cells.</a> Methods Mol Biol. 466, 3-17 (2009).</li>
<li>Gilbert, S. F., Migeon, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((D-valine+as+a+selective+agent+for+normal+human+and+rodent+epithelial+cells+in+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">D-valine as a selective agent for normal human and rodent epithelial cells in culture.</a> Cell. 5 (1), 11-17 (1975).</li>
<li>Kreisberg, J. I., Venkatachalam, M., Troyer, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contractile+properties+of+cultured+glomerular+mesangial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Contractile properties of cultured glomerular mesangial cells.</a> Am J Physiol. 249 (4 Pt 2), F457-F463 (1985).</li>
<li>Adam, M., Potter, A. S., Potter, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Psychrophilic+proteases+dramatically+reduce+single-cell+rna-seq+artifacts%3A+A+molecular+atlas+of+kidney+development%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Psychrophilic proteases dramatically reduce single-cell rna-seq artifacts: A molecular atlas of kidney development.</a> Development. 144 (19), 3625-3632 (2017).</li>
<li>Sadovnic, M. J., Brand-Elnaggar, J., Bolton, W. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+characterization+of+chicken+mesangial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nephron%22%5BJournal%5D)">Isolation and characterization of chicken mesangial cells.</a> Nephron. 58 (1), 75-84 (1991).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>100 et micro ; m Filtre cellulaire</td><td>Biosharp</td><td>BS-100-CS</td><td></td></tr><tr><td>Boîte de Pétri 100 mm</td><td>Sorfa</td><td>230301</td><td></td></tr><tr><td>15 mL Tube à centrifuger</td><td>Sorfa</td><td>411000</td><td></td></tr><tr><td>Plat de culture cellulaire à fond de verre de 15 mm</td><td>Sorfa</td><td>201200</td><td></td></tr><tr><td>180 kDa Plus Marqueur protéique précoloré</td><td>Vazyme</td><td>MP201-01</td><td></td></tr><tr><td>2 mM L-glutamine</td><td>BasalMedia</td><td>S210JV</td><td></td></tr><tr><td>4 % Paraformaldéhyde</td><td>Biosharp</td><td>BL539A</td><td></td></tr><tr><td>40 & micro ; m Passoire cellulaire</td><td>Biosharp</td><td>BS-40-XBS</td><td></td></tr><tr><td>50 mL Tube à centrifuger</td><td>Sorfa</td><td>41000</td><td></td></tr><tr><td>60 mm Boîte de Pétri</td><td>Sorfa</td><td>230201</td><td></td></tr><tr><td>75 % d’alcool</td><td>Knowles</td><td>64-17-5</td><td></td></tr><tr><td>Plaques de culture cellulaire à 96 puits, traités TC Servicebio</td><td></td><td>CCP-96H</td><td></td></tr><tr><td>Antibiotiques (10 &mu ; g/mL de ceftriaxone plus 100 &mu ; g/mL gentamicine)</td><td>NCM</td><td>C100C5</td><td></td></tr><tr><td>BCA (acide bicchoninique) Kit de dosage des protéines</td><td>CWBIO</td><td>CW0014S</td><td></td></tr><tr><td>Cell Counting Kit-8</td><td>Oriscience</td><td>CB101</td><td></td></tr><tr><td>Microscope confocal</td><td>FV-3000</td><td>Olympus</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Sigma</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Sigma</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>Earle’s Solution saline équilibrée (1x EBSS)&nbsp ;</td><td>Beyotime</td><td>&nbsp ; C0213</td><td></td></tr><tr><td>Sérum fœtal bovin (FBS)</td><td>Excell</td><td>FSP500</td><td></td></tr><tr><td>Analyseur de cellules à fluorescence</td><td>Mira FL&nbsp ;</td><td>Countstar</td><td></td></tr><tr><td>Fluoromount</td><td>media Southern Biotech</td><td>0100-01</td><td></td></tr><tr><td>Insuline, Transferrin, Solution de sélénium 100x (ITS -G)</td><td>Gibco</td><td>41400045</td><td></td></tr><tr><td>Microscope à fluorescence inversée</td><td>Olympus</td><td>IX83</td><td></td></tr><tr><td>Tampon de lyse</td><td>Adilab</td><td>PP1101</td><td></td></tr><tr><td>Kit de préparation PAGE en une étape (10 %)</td><td>Oriscience</td><td>PB102</td><td></td></tr><tr><td>Kit de préparation PAGE en une étape (7,5 %)</td><td>Oriscience</td><td>PB101</td><td></td></tr><tr><td>PE anti-souris CD140b Anticorps</td><td>Biolegend</td><td>323605</td><td></td></tr><tr><td>Phosphate Tamponné Saline (PBS)</td><td>Servicebio</td><td>G4202</td><td></td></tr><tr><td>Pilon en plastique</td><td>Biofil</td><td>&nbsp ; CC-4090</td><td></td></tr><tr><td>Inhibiteur de protéinase Cocktail</td><td>Roche</td><td>4693159001</td><td></td></tr><tr><td>Membrane PVDF</td><td>Vazyme</td><td>E802-01</td><td></td></tr><tr><td>Insuline humaine recombinante</td><td>Solarbio</td><td>11061-68-0</td><td></td></tr><tr><td>Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 Medium</td><td>Corning</td><td>10-040-CV</td><td></td></tr><tr><td>SDS-PAGE Tampon de chargement d’échantillon (5x)</td><td>Servicebio</td><td>G2013</td><td></td></tr><tr><td>Spécialement personnalisé Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 Medium (D-valine au lieu de L-valine)</td><td>Procell</td><td>WH3923U222</td><td></td></tr><tr><td>TBS (Tris Buffered Saline)&nbsp ;</td><td>Servicebio</td><td>G0001-2L</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Biosharp</td><td>BS084</td><td></td></tr><tr><td>Trypsine-EDTA (0.25 %)</td><td>Gibco</td><td>25200072</td><td></td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>Biosharp</td><td>BS100</td><td></td></tr><tr><td>Type I Collagénase</td><td>Solarbio</td><td>&nbsp ; Réf. CB140</td><td></td></tr></tbody></table>

optimisation de l’isolement et de la purification des cellules mésangiales glomérulaires murines

Optimizing Isolation and Purification of Murine Glomerular Mesangial Cells

Cette étude a développé un protocole optimisé pour l’isolement des MC murins et la culture cellulaire ex vivo. A notre connaissance, il n’existe pas de méthode standard pour valider les MC primaires ex vivo. Selon les publications précédentes, les MC sont caractérisés par l’expression de l’αSMA, de la vimentine et de la fibronectine 3,14,15. L’analyse par transfert Western a été utilisée pour détecter les nivea...

Optimisation de l’isolement et de la purification des cellules mésangiales glomérulaires murines

Mesangial cells (MCs) are stromal cells located in the middle space of the glomerulus, with pivotal functions in glomerular homeostasis. Methods for ...

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Recherche

JoVE Journal

Biology

Biologie

Dans ce rapport, nous décrivons une méthode pour l'isolement et la culture de la niche de cellules progénitrices du rein d'embryon de souris qui peuvent être utilisées pour étudier les voies de signalisation réglementant cellules souches / progénitrices du rein en développement. Ces cellules cultivées sont très accessibles à de petites molécules et le traitement de protéines recombinantes, et surtout aussi à la transduction virale, ce qui permet une manipulation efficace des voies candidat.

Isolement et culture de cellules de la zone néphrogénique du rein d&#39;embryon de souris

Cette vidéo décrit la méthode pour isoler les glomérules intacts des reins de souris. Les glomérules encapsulés et décapsulés ainsi obtenus peuvent en outre être utilisés pour la culture d’excroissances de cellules épithéliales pariétales à partir du rein murin.

Isolement des glomérules : une technique pour obtenir des glomérules intacts à partir d’un rein murin

Dans cette vidéo, nous montrons les étapes d’isolement et de purification des cellules épithéliales tubulaires rénales pour un large éventail d’études de biologie moléculaire et de culture cellulaire.

Isolement de cellules rénales murines : une technique pour isoler et générer une culture primaire de cellules épithéliales tubulaires rénales

Des techniques fiables et efficaces pour l’isolement des cellules immunitaires rénales sont nécessaires pour les applications en aval. Cela nécessite le marquage par anticorps de surface d’un petit nombre de cellules immunitaires rénales. Nous décrivons ici une méthode concise d’isolement des cellules immunitaires rénales qui semble atteindre cet objectif.

Extraction d&#39;efficacité fiable et haute du rein cellules immunitaires

Un protocole pour l’isolement des microglies primaire du cerveau murin est présenté. Cette technique contribue à faire avancer la compréhension actuelle des maladies neurologiques. Centrifugation en gradient de densité et de la séparation magnétique sont combinés pour produire une récolte suffisante d’un échantillon très pur. En outre, nous exposent les étapes pour la caractérisation des cellules microgliales.

La caractérisation et l’isolement des microglies primaire de souris par Centrifugation en Gradient de densité

Le principal objectif du présent protocole est d’isoler efficacement les cultures viables glomérules primaire avec des contaminants minimales pour une utilisation dans un large éventail d’applications en aval. Les glomérules isolés conservent des relations structurelles entre les types de cellules composant et peuvent être cultivées ex vivo pendant une courte période.

Une méthode efficace de tamisage pour isoler Intact glomérules du rein de Rat adulte

Nous présentons ici un protocole pour l’étiquetage des murins in vivo des protéines de surface de cellules glomérulaire avec de la biotine. Ce protocole contient des informations sur la façon de perfuse les reins de souris, isoler les glomérules et effectuer d’immunoprécipitation endogène de la protéine d’intérêt.

Isolement des glomérules et In Vivo , marquage des protéines de Surface de cellules glomérulaire

Nous avons optimisé un protocole pour isoler et purifier les péritéytes cardiaques murines pour la recherche fondamentale et l'étude de leur biologie et de leur potentiel thérapeutique.

Isolement et purification des périphytes cardiaques murines

Cet article décrit une méthode pour cultiver et analyser les excroissances épithéliales parétalaires glomertales des excroissances de globuleruli encapsulées isolées du rein de souris. Cette méthode peut être utilisée pour étudier les voies impliquées dans la prolifération et la migration des cellules épithéliales pariétales.

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L’article décrit la méthode d’isolement des cellules endothéliales glomérulaires immortalisées conditionnellement des reins de souris transgéniques exprimant le virus simien thermolabile 40 et les mitochondries photo-activables, PhAMexcisée. Nous décrivons la procédure d’isolement des glomérules à partir de reins entiers à l’aide de billes, d’étapes de digestion, d’ensemencement et de culture de GECs-CD31 positifs.

Isolement de cellules endothéliales glomérulaires de souris immortalisées conditionnellement avec des mitochondries fluorescentes

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Optimisation de l’isolement et de la purification des cellules mésangiales glomérulaires murines

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