Name: Préparation mitochondriale à partir de microglie pour l’analyse des glycanes (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-30T14:10:00.000+00:00
Duration: 6 min 40 s
Description: Découvrez l'isolation mitochondriale à partir de cellules microgliales BV-2 pour l'analyse des N-glycanes par spectrométrie de masse. Cette méthode avance la compréhension des interactions neuroimmunitaires et des troubles cérébraux.

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<ol><li>Dos Santos, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Similar+microglial+cell+densities+across+brain+structures+and+mammalian+species%3A+Implications+for+brain+tissue+function%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Similar microglial cell densities across brain structures and mammalian species: Implications for brain tissue function.</a> J Neurosci. 40 (24), 4622-4643 (2020).</li>
<li>Shao, F., Wang, X., Wu, H., Wu, Q., Zhang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+and+neuroinflammation%3A+Crucial+pathological+mechanisms+in+traumatic+brain+injury-induced+neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Aging+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Microglia and neuroinflammation: Crucial pathological mechanisms in traumatic brain injury-induced neurodegeneration.</a> Front Aging Neurosci. 14, 825086(2022).</li>
<li>Arcuri, C., Mecca, C., Bianchi, R., Giambanco, I., Donato, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pathophysiological+role+of+microglia+in+dynamic+surveillance%2C+phagocytosis+and+structural+remodeling+of+the+developing+cns%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Mol+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The pathophysiological role of microglia in dynamic surveillance, phagocytosis and structural remodeling of the developing cns.</a> Front Mol Neurosci. 10, 191(2017).</li>
<li>Cheng, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+glycolytic+reprogramming+controls+microglial+inflammatory+activation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Early glycolytic reprogramming controls microglial inflammatory activation.</a> J Neuroinflammation. 18 (1), 129(2021).</li>
<li>Cătălin, B., Cupido, A., Iancău, M., Albu, C. V., Kirchhoff, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia%3A+First+responders+in+the+central+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Rom+J+Morphol+Embryol%22%5BJournal%5D)">Microglia: First responders in the central nervous system.</a> Rom J Morphol Embryol. 54 (3), 467-472 (2013).</li>
<li>Cai, Y., Liu, J., Wang, B., Sun, M., Yang, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+in+the+neuroinflammatory+pathogenesis+of+alzheimer%27s+disease+and+related+therapeutic+targets%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Microglia in the neuroinflammatory pathogenesis of alzheimer's disease and related therapeutic targets.</a> Front Immunol. 13, 856376(2022).</li>
<li>Hickman, S., Izzy, S., Sen, P., Morsett, L., El Khoury, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+in+neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Microglia in neurodegeneration.</a> Nat Neurosci. 21 (10), 1359-1369 (2018).</li>
<li>Norat, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+dysfunction+in+neurological+disorders%3A+Exploring+mitochondrial+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22NPJ+Regen+Med%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial dysfunction in neurological disorders: Exploring mitochondrial transplantation.</a> NPJ Regen Med. 5 (1), 22(2020).</li>
<li>Picca, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-associated+glia+remodeling+and+mitochondrial+dysfunction+in+neurodegeneration%3A+Antioxidant+supplementation+as+a+possible+intervention%5BTitle%5D)+AND+%22Nutrients%22%5BJournal%5D)">Age-associated glia remodeling and mitochondrial dysfunction in neurodegeneration: Antioxidant supplementation as a possible intervention.</a> Nutrients. 14 (12), 2406(2022).</li>
<li>Mcavoy, K., Kawamata, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glial+mitochondrial+function+and+dysfunction+in+health+and+neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Glial mitochondrial function and dysfunction in health and neurodegeneration.</a> Mol Cell Neurosci. 101, 103417(2019).</li>
<li>Fairley, L. H., Wong, J. H., Barron, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+regulation+of+microglial+immunometabolism+in+alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial regulation of microglial immunometabolism in alzheimer's disease.</a> Front Immunol. 12, 624538(2021).</li>
<li>Starossom, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Galectin-1+deactivates+classically+activated+microglia+and+protects+from+inflammation-induced+neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Galectin-1 deactivates classically activated microglia and protects from inflammation-induced neurodegeneration.</a> Immunity. 37 (2), 249-263 (2012).</li>
<li>Puigdellívol, M., Allendorf, D. H., Brown, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sialylation+and+galectin-3+in+microglia-mediated+neuroinflammation+and+neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Sialylation and galectin-3 in microglia-mediated neuroinflammation and neurodegeneration.</a> Front Cell Neurosci. 14, 162(2020).</li>
<li>Gerlach, J. Q., Kilcoyne, M., Eaton, S., Bhavanandan, V., Joshi, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-carbohydrate-mediated+interaction+of+lectins+with+plant+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Exp+Med+Biol%22%5BJournal%5D)">Non-carbohydrate-mediated interaction of lectins with plant proteins.</a> Adv Exp Med Biol. 705, 257-269 (2011).</li>
<li>Cummings, R. D., Pierce, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+challenge+and+promise+of+glycomics%5BTitle%5D)+AND+%22Chem+Biol%22%5BJournal%5D)">The challenge and promise of glycomics.</a> Chem Biol. 21 (1), 1-15 (2014).</li>
<li>Robichaud, G., Barry, J. A., Muddiman, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IR-MALDESI+mass+spectrometry+imaging+of+biological+tissue+sections+using+ice+as+a+matrix%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Soc+Mass+Spectrom%22%5BJournal%5D)">IR-MALDESI mass spectrometry imaging of biological tissue sections using ice as a matrix.</a> J Am Soc Mass Spectrom. 25 (3), 319-328 (2014).</li>
<li>Barry, J. A., Groseclose, M. R., Robichaud, G., Castellino, S., Muddiman, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+drug+and+metabolite+detection+in+liver+tissue+by+uv-maldi+and+ir-maldesi+mass+spectrometry+imaging+coupled+to+ft-icr+ms%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mass+Spectrom%22%5BJournal%5D)">Assessing drug and metabolite detection in liver tissue by uv-maldi and ir-maldesi mass spectrometry imaging coupled to ft-icr ms.</a> Int J Mass Spectrom. 377, 448-155 (2015).</li>
<li>Pace, C. L., Muddiman, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+analysis+of+native+N-linked+glycans+by+IR-MALDESI%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Soc+Mass+Spectrom%22%5BJournal%5D)">Direct analysis of native N-linked glycans by IR-MALDESI.</a> J Am Soc Mass Spectrom. 31 (8), 1759-1762 (2020).</li>
<li>Palomino, T. V., Muddiman, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Predicting+sialic+acid+content+of+N-linked+glycans+using+the+isotopic+pattern+of+chlorine%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Soc+Mass+Spectrom%22%5BJournal%5D)">Predicting sialic acid content of N-linked glycans using the isotopic pattern of chlorine.</a> J Am Soc Mass Spectrom. 34 (7), 1392-1399 (2023).</li>
<li>Mariethoz, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glycomics%40expasy%3A+Bridging+the+gap%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Proteomics%22%5BJournal%5D)">Glycomics@expasy: Bridging the gap.</a> Mol Cell Proteomics. 17 (11), 2164-2176 (2018).</li>
<li>Varki, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Symbol+nomenclature+for+graphical+representations+of+glycans%5BTitle%5D)+AND+%22Glycobiology%22%5BJournal%5D)">Symbol nomenclature for graphical representations of glycans.</a> Glycobiology. 25 (12), 1323-1324 (2015).</li>
<li>Yu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+the+glycopattern+alterations+of+mitochondrial+proteins+in+cerebral+cortex+between+rat+alzheimer%27s+disease+and+the+cerebral+ischemia+model%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Comparison of the glycopattern alterations of mitochondrial proteins in cerebral cortex between rat alzheimer's disease and the cerebral ischemia model.</a> Sci Rep. 7 (1), 39948(2017).</li>
<li>Dixit, B., Vanhoozer, S., Anti, N. A., O'Connor, M. S., Boominathan, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+enrichment+of+mitochondria+from+mammalian+cell+cultures+using+digitonin%5BTitle%5D)+AND+%22MethodsX%22%5BJournal%5D)">Rapid enrichment of mitochondria from mammalian cell cultures using digitonin.</a> MethodsX. 8, 101197(2021).</li>
<li>Kalathil, A. A., et al. New pathway for cisplatin prodrug to utilize metabolic substrate to overcome cancer intrinsic resistance. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKalathil%2C+AA+%22central+science%22">central science</a>. 9, 1297-1312 (2023).</li>
<li>Hecht, E. S., McCord, J. P., Muddiman, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Definitive+screening+design+optimization+of+mass+spectrometry+parameters+for+sensitive+comparison+of+filter+and+solid+phase+extraction+purified%2C+inlight+plasma+N-glycans%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">Definitive screening design optimization of mass spectrometry parameters for sensitive comparison of filter and solid phase extraction purified, inlight plasma N-glycans.</a> Anal Chem. 87 (14), 7305-7312 (2015).</li>
<li>Hecht, E. S., McCord, J. P., Muddiman, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+quantitative+glycomics+and+proteomics+combined+purification+strategy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A quantitative glycomics and proteomics combined purification strategy.</a> J Vis Exp. (109), e53735(2016).</li>
<li>Fischler, D. A., Orlando, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((N-linked+glycan+release+efficiency%3A+A+quantitative+comparison+between+NaOCl+and+PNGase+F+release+protocols%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomol+Tech%22%5BJournal%5D)">N-linked glycan release efficiency: A quantitative comparison between NaOCl and PNGase F release protocols.</a> J Biomol Tech. 30 (4), 58-63 (2019).</li>
<li>Tu, A., Muddiman, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Internal+energy+deposition+in+infrared+matrix-assisted+laser+desorption+electrospray+ionization+with+and+without+the+use+of+ice+as+a+matrix%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Soc+Mass+Spectrom%22%5BJournal%5D)">Internal energy deposition in infrared matrix-assisted laser desorption electrospray ionization with and without the use of ice as a matrix.</a> J Am Soc Mass Spectrom. 30 (11), 2380-2391 (2019).</li>
<li>Barry, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mapping+antiretroviral+drugs+in+tissue+by+IR-MALDESI+MSI+coupled+to+the+Q+exactive+and+comparison+with+LC-MS%2FMS+SRM+assay%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Soc+Mass+Spectrom%22%5BJournal%5D)">Mapping antiretroviral drugs in tissue by IR-MALDESI MSI coupled to the Q exactive and comparison with LC-MS/MS SRM assay.</a> J Am Soc Mass Spectrom. 25 (12), 2038-2047 (2014).</li>
<li>Samal, J., Palomino, T. V., Chen, J., Muddiman, D. C., Segura, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+detection+of+charged+N-glycans+in+the+brain+by+infrared+matrix-assisted+laser+desorption+electrospray+ionization+mass+spectrometric+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">Enhanced detection of charged N-glycans in the brain by infrared matrix-assisted laser desorption electrospray ionization mass spectrometric imaging.</a> Anal Chem. 95 (29), 10913-10920 (2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Equipment</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Amersham 600 imager</td><td>Cytvia&nbsp ;</td><td>29194217</td><td>Imageur gel et membrane</td></tr><tr><td>Countess 3 compteur de cellules automatisé</td><td>Fisher Scientific</td><td>X003SZ1LY9</td><td></td></tr><tr><td>Dry Bath Stdrd 4 blck 100-120V</td><td>Thermofisher scientific&nbsp ;</td><td></td><td></td>88870003</tr><tr><td>i-Blot2 Dispositif de transfert de gel</td><td>Invitrogen</td><td>IB21001</td><td>Système de transfert Western blot</td></tr><tr><td>Microscope inversé Cell</td><td>Treat</td><td>04355223EA</td><td></td></tr><tr><td>Lecteur</td><td></td> de microplaques <td>82050-760</td><td></td></tr><tr><td>Mini réservoir de gel</td><td>Invitrogen</td><td>A25977</td><td></td></tr><tr><td>Bascule en plein air</td><td>Fisher Brand</td><td>88861025</td><td></td></tr><tr><td>Pipet garçon&nbsp ;</td><td>BioTek</td><td>229310</td><td></td></tr><tr><td>Mélangeur vortex</td><td>Integra- VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Réactifs d’isolement des mitochondries&nbsp ; </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mitochondrial Kit d’isolation</td><td>Thermofisher scientific&nbsp ;</td><td>89874</td><td></td></tr><tr><td>Inhibiteur de la phosphotase</td><td>Thermofisher scientific&nbsp ;</td><td></td><td></td>1861274</tr><tr><td>Inhibiteur de protéase</td><td>Thermofisher scientific&nbsp ;</td><td>Isolement des 1861281</td><td></td></tr><tr><td><>N-glycane et réactifs IR-MALDESI</acide ></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>acétique fort&nbsp ;</td><td>Fisher Scientific</td><td>A11350</td><td>50 % dans le solvant ESI</td></tr><tr><td>Acétonitrile&nbsp ;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>34851-4L</td><td>1 mM dans un solvant ESI</td></tr><tr><td>Bicarbonate d’ammonium&nbsp ;</td><td>Fisher Scientific</td><td>A643500</td><td>100 mM</td></tr><tr><td>Solution d’étalonnage</td><td>Thermofisher Scientific</td><td>A39239</td><td>Pierce FlexMix</td></tr><tr><td>Dithiothreitol&nbsp ;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>AC426380100</td><td>1 M</td></tr><tr><td>Iodoacétamide</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A322-10VL</td><td></td></tr><tr><td>Eau de qualité LC/MS</td><td>Thermofisher Scientific</td><td>047146.M6</td><td></td></tr><tr><td>PNGase F</td><td>Bulldog Bio</td><td>NZPP010</td><td>75000 U/mL, enzyme pour la libération de N-glycanes&nbsp ;</td></tr><tr><td>Consommables d’isolement <>N-glycane et IR-MALDESI </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Amicon Fisher</td><td>Scientific&nbsp ;</td><td>UFC501024</td><td>Spectromètre de masse MWCO 10 kDa</td></tr><tr><td></td><td>Orbitrap Exploris 240</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mid-IR Laser</td><td>JGM Associates, Burlington, MA, États-Unis</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Lame de micropuits en téflon</td><td>Prosolia, Indianapolis, IN, États-Unis<</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Logiciels d’analyse de N-glycanes>Logiciels d’analyse de N-glycanes</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>GlycoMod&nbsp ;</td><td>Expasy&nbsp ;</td><td></td><td>https://web.expasy.org/glycomod/</td></tr> <tr><td>GlyConnect</td><td>Expasy&nbsp ;</td><td></td><td>https://glyconnect.expasy.org/</td></tr><tr><td>Consommables d’isolement des protéines et de western blot&nbsp ; </td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Conseils de chargement de gel Basix ( 10 & micro ; L)&nbsp ;</td><td>Basix</td><td>13-611-102</td><td></td></tr><tr><td>Embouts de chargement de gel Basix ( 200 &micro ; L)&nbsp ;</td><td>Basix</td><td>13-611-116</td><td></td></tr><tr><td>Racleur de cellules</td><td>VWR labs</td><td>14-388-100</td><td></td></tr><tr><td>i-Blot NC piles régulières</td><td>Invitrogen</td><td>IB23001</td><td></td></tr><tr><td>i-Blot2 PVDF piles régulières</td><td>Invitrogen</td><td>IB24001</td><td></td></tr><tr><td>10&nbsp ; &micro ; L micropipette</td><td>Fisher Scientific</td><td>FBE00010</td><td></td></tr><tr><td>20 & micro ; L micropipette</td><td>Invitrogen</td><td>FBE00020</td><td></td></tr><tr><td>200&nbsp ; &micro ; Micropipette L&nbsp ;</td><td>Fisher Brand</td><td>FBE00200</td><td></td></tr><tr><td>1000 & micro ; L micropipette</td><td>de marque Fisher</td><td>FBE01000</td><td></td></tr><tr><td>10&nbsp ; &micro ; L pointes de pipette&nbsp ;</td><td>VWR labs</td><td>76322-528</td><td></td></tr><tr><td>20&nbsp ; &nbsp ; Pointes de pipette L</td><td>VWR labs</td><td>76322-134</td><td></td></tr><tr><td>200&nbsp ; &micro ; L pointes de pipette&nbsp ;</td><td>VWR labs</td><td>76322-150</td><td></td></tr><tr><td>1000&nbsp ; &nbsp ; L pointes de pipette</td><td>VWR labs</td><td>76322-154</td><td></td></tr><tr><td>Plaque à puits&nbsp ;</td><td></td> Réactifs d’isolement des protéines et de transfert Western <td>14-388-100</td><td></td></tr><tr><td> de marque Fisher Anticorps </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Actin ( Hôte : Lapin )</td><td>Cell Signaling Technologies</td><td>8457T</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Rabbit IgG HRP Linked&nbsp ;</td><td>Cell Signaling Technologies</td><td>7074S</td><td></td></tr><tr><td>Bolt 4-12 % Bis-Tris Plus</td><td>Invitrogen</td><td>NW04120BOX</td><td></td></tr><tr><td>Bovine Serum Albumin</td><td>Fisher bioréactifs</td><td>BP9700-100</td><td></td></tr><tr><td>Anticorps COXIV (Hôte : Lapin)</td><td>Cell Signaling Technologies</td><td>4844S</td><td></td></tr><tr><td>Anticorps GAPDH (Hôte : Lapin)</td><td>Cell Signaling Technologies</td><td>2118S</td><td></td></tr><tr><td>Kit de dosage des protéines MicroBCA</td><td>Thermofisher scientific&nbsp ;</td><td>23235</td><td></td></tr><tr><td>Nupage MOPS SDS Tampon de Runing [20x]</td><td>Thermofisher scientific&nbsp ;</td><td>NP0001</td><td></td></tr><tr><td>PAGE Règle échelle de protéines pré-colorée</td><td>Thermofisher scientific&nbsp ;</td><td>815-968-0747</td><td>Dilution = Utilisation 7&nbsp ; &micro ; L à charger sur le premier puits</td></tr><tr><td>Saline tamponnée au phosphate&nbsp ;</td><td>Aniara Diagnostics</td><td>A12-9423-5</td><td>Préparer 1x PBS à partir de 10x poudre&nbsp ;</td></tr><tr><td>Pierce ECL Western Blot Substrat</td><td>Thermofisher scientific&nbsp ;</td><td>32106</td><td>Kit substrat chimiluminescent</td></tr><tr><td>RIPA Buffer</td><td>Thermofisher scientific&nbsp ;</td><td>89901</td><td></td></tr><tr><td>Tampon d’échantillonnage</td><td>Novex</td><td>B0007</td><td>Le tampon d’échantillon bolt LDS est préparé dans un rapport de 3:1 entre l’échantillon et le tampon d’échantillon</td></tr><tr><td>Tween-20</td><td>MP Biomedicals</td><td>TWEEN201</td><td></td></tr><tr><td>Consommables de culture tissulaire&nbsp ; </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Countess Lames</td><td>Avantor</td><td>229411</td><td></td></tr><tr><td>tubes Eppendorf</td><td>Cell Treat</td><td>414004-265612-5884</td><td></td></tr><tr><td>Pipette aspirante 2 mL</td><td>Vista lab</td><td>5090-0010E</td><td></td></tr><tr><td>5 mL pipette sérologique&nbsp ;</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-678-11D</td><td></td></tr><tr><td>Pipette sérologique de 10 mL.</td><td>Pipette</td> sérologique Basix <td>13-678-11E</td><td></td></tr><tr><td>25 mL</td><td>Pipette sérologique Vista lab</td><td>FB012937</td><td></td></tr><tr><td>50 mL</td> Vista <td>lab</td><td>14955233</td><td></td></tr><tr><td>15 mL Tube conique</td><td>Avantor</td><td>229225A</td><td></td></tr><tr><td>Tube conique de 50 mL</td><td>Cell treat</td><td>4190-0050</td><td></td></tr><tr><td>T-75 cm2 Fiole de culture tissulaire</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td></td>FB012937</tr><tr><td>T-180 cm2 Fiole de culture tissulaire</td><td>Fisher Scientific</td><td>FB012939</td><td></td></tr><tr><td>Réactifs de culture tissulaire&nbsp ; </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>BV2 lignée cellulaire microgliale&nbsp ;</td><td>Bioarray créatif&nbsp ;</td><td>CSC-I2227Z</td><td>Microglie de souris immortalisée (BV2) dérivée de la microglie néonatale C57/BL6&nbsp ;</td></tr><tr><td>Enzymes de dissociation cellulaire&nbsp ;</td><td>Thermofisher scientific&nbsp ;</td><td>12563029</td><td>TrypLE&nbsp ;</td></tr><tr><td>Milieu Eagle modifié (DMEM) à faible teneur en glucose de Dulbecco&nbsp ;</td><td>Gibco</td><td>10567014</td><td></td></tr><tr><td>Sérum de bovin fœtal</td><td>Cytiva</td><td>SH30071.03HI</td><td></td></tr> Minimum <tr><td>Essential Medium (MEM) Acides aminés non essentiels Gibco</td><td></td><td>11140050</td><td></td></tr><tr><td>Penicillium Streptomycin</td><td>Cytivia</td><td>SV30010</td><td></td></tr><tr><td>Tampon phosphate salin</td><td>Corning</td><td>21-040-CV</td><td></td></tr><tr><td>Trypan Blue colorant 0,4 %</td><td>Invitrogen</td><td>Réf. T10282</td><td></td></tr></tbody></table>

préparation mitochondriale à partir de microglie pour l’analyse des glycanes

Mitochondrial Preparation from Microglia for Glycan Analysis

La figure 1 représente un schéma des étapes impliquées dans l’isolement des mitochondries de la lignée cellulaire microgliale BV2 pour l’analyse des glycanes par spectrométrie de masse. La reproductibilité de l’isolement des protéines mitochondriales entre différentes préparations mitochondriales à partir de la même densité de départ des cellules microgliales est représentée à la figure 2, qui ne montre aucune différence significative entre la concentration de p...

Préparation mitochondriale à partir de microglie pour l’analyse des glycanes

Understanding the glycosylation patterns of mitochondrial proteins in microglia is critical for determining their role in neurodegenerative diseases. ...

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Isoler les microglies primaire à partir de l'hétérogénéité cellulaire du cerveau est essentielle pour enquêter sur leur rôle dans les deux conditions physiologiques et pathologiques. Ce protocole décrit une isolation mécanique et technique mixte de culture cellulaire qui fournit un rendement élevé et de haute pureté, viables primaires pour les cellules...

Isolement primaire microglies de cultures mixtes de cellules gliales de tissus de cerveau de rat nouveau-né

Les microglies sont les macrophages résidents qui fournissent la première ligne de défense et de la surveillance immunitaire du système nerveux central. Les microARN sont des molécules régulatrices qui jouent un rôle important dans de nombreux processus physiologiques, y compris l'activation et la différenciation des macrophages. Dans cet article, nous décrivons la méthode de mesure des microARN dans la microglie.

Détection des microARN dans la microglie par PCR en temps réel dans le SNC normal et pendant neuroinflammation

La vidéo montre une technique permettant d’isoler la microglie du cortex d’un cerveau de souris adulte. Tout d’abord, le cortex subit une segmentation et une homogénéisation pour éliminer les neurones et autres cellules gliales, préservant ainsi la microglie. Ensuite, la suspension cellulaire est exposée à des microbilles magnétiques anti-myéline et à un champ magnétique, séparant efficacement les cellules microgliales et myéloïdes des débris de myéline et des cellules contenant de la myéline.

Isolement de la microglie du cortex d’un cerveau de souris adulte

Cette procédure illustre comment isoler du cerveau de souris adulte les membranes des mitochondries associées à l'urgence ou la SMMA et les glycosphingolipides-fractions enrichies en microdomaines de MMA propres et préparations mitochondriales.

Les mitochondries associées à membranes ER (SMMA) et glycosphingolipides microdomaines enrichis (GEM): Isolement à partir de cerveau de souris

Nous présentons des méthodes pour l'isolement / culture efficace et rapide de la microglie viable du cortex cérébral néonatal et la moelle épinière adulte. La dissection et le placage de la microglie corticale peuvent être accomplies dans les 90 minutes, avec la récolte des microglies subséquente aura lieu ~ 10 jours suivant la dissection initiale.

Microglia de culture du système nerveux central néonatale et de l&#39;adulte

Une des clés de réussite de l'enquête de la biologie de la microglie est la préservation de la microglie immunofunction ex vivo lors de l'isolement de tissu du SNC. Isoler la microglie par les résultats serrant rotatifs dans des cultures de cellules de grande pureté et immunofonctionnel évaluée par imagerie de fluorescence, immunocytochimie, et ELISA activation de la microglie suivante avec le lipopolysaccharide stimuli pro-inflammatoires (LPS) et Pam 3 CSK 4 (Pam).

Isolation des corticale microglie avec immunophénotype préservée et fonctionnalité De murins nouveau-nés

Ici, un protocole (MitoCeption) est présenté pour transférer les mitochondries, isolées à partir de cellules souches mésenchymateuses humaines (MSC), des cellules souches de glioblastome (CGC), dans le but d'étudier leurs effets biologiques sur le métabolisme et les fonctions CGC. Un protocole similaire peut être adapté pour transférer des mitochondries entre les autres types de cellules.

MitoCeption: Transfert humain isolé MSC mitochondries à glioblastome cellules souches

Fourni ici est un protocole pour étudier les interactions entre la forme indigène, préfibrillaire, et les fibrilles amyloïdes matures de différents peptides et protéines avec des mitochondries isolées de différents tissus et diverses zones du cerveau.

Interactions avec et perméabilisation des membranes des mitochondries cérébrales par amyloïde Fibrils

Nous fournissons un protocole pour l'isolement des microglies de différentes régions disséquées d'un hémisphère de cerveau de souris adulte, suivi de la préparation semi-automatisée de bibliothèque pour le séquençage profond d'ARN unicellulaire des transcriptomes pleine longueur. Cette méthode aidera à élucider l'hétérogénéité fonctionnelle des microglies dans la santé et la maladie.

Isolement des microglies spécifiques à la région de l'hémisphère cérébral d'une souris adulte pour le séquençage profond de l'ARN à une seule cellule

Cette étude présente une méthode d’analyse de la morphologie des mitochondries basée sur l’immunomarquage et l’analyse d’images dans le tissu cérébral de souris in situ. Il décrit également comment cela permet de détecter les changements dans la morphologie mitochondriale induits par l’agrégation des protéines dans les modèles de la maladie de Parkinson.

Examen histologique de la morphologie mitochondriale dans un modèle de maladie de Parkinson

Ce protocole décrit une méthode rentable pour réaliser un test de résistance à la glycolyse afin de quantifier la reprogrammation métabolique dans la microglie primaire de la souris. Après isolement et stimulation inflammatoire, le taux d’acidification extracellulaire (RARE) est mesuré à l’aide de réactifs fraîchement préparés et ajustés en pH, suivi d’une normalisation des protéines afin de permettre une évaluation précise et reproductible des déplacements glycolytiques.

Étude de la glycolyse dans la microglie primaire à l’aide d’un test de flux extracellulaire

Découvrez l'isolation mitochondriale à partir de cellules microgliales BV-2 pour l'analyse des N-glycanes par spectrométrie de masse. Cette méthode avance la compréhension des interactions neuroimmunitaires et des troubles cérébraux.

Préparation mitochondriale à partir de microglie pour l’analyse des glycanes

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