Name: In vitro Culture de lymphocytes T de canard spécifiques au H5N1 et détection des réponses immunitaires à l’aide d’une méthode de coloration des cytokines intracellulaires (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-30T14:50:00.000+00:00
Duration: 6 min 57 s
Description: Découvrez la culture de lymphocytes T spécifiques au H5N1 chez le canard et la détection de l'IFN-γ par coloration des cytokines intracellulaires. Cette méthode permet d'étudier les réponses immunitaires aviaires.

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</ol>

<table><tbody><tr><td>1,5 mL MICRO-Tubes à centrifuger</td><td>Biosharp</td><td>Cat#BS-15-M</td><td></td></tr><tr><td>15 mL Tubes à centrifuger</td><td>Labselect</td><td>Cat#CT-002-15A</td><td></td></tr><tr><td>2-mercaptoéthanol (55 mM)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Cat#M6250-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Plaque de culture tissulaire 48 puits (non traitée, fond plat)</td><td>Biofil</td><td>Cat#TCP000048</td><td></td></tr><tr><td>50 mL Tubes à centrifuger</td><td>Labselect</td><td>Cat#CT-002-50A</td><td></td></tr><tr><td>Plaques qPCR 96 puits sans jupe</td><td>Labselect</td><td>Cat#PP-96-NS-0100</td><td></td></tr><tr><td>BD Cytofix/Cytoperm kit</td><td>BD Bioscience</td><td>Cat#BD 554714</td><td></td></tr><tr><td>Brefeldin A (BFA)</td><td>BD Bioscience</td><td>Cat#347688</td><td></td></tr><tr><td>Culture cellulaire CO2 incubateur</td><td>Thermo Fisher</td><td>Heracell 150i GP</td><td></td></tr><tr><td>Centrifugeuse</td><td>Eppendorf</td><td>5810R</td><td></td></tr><tr><td>CFSE-labeling kit Abcam</td><td></td><td>Cat#ab113853</td><td></td></tr><tr><td>ChamQ SYBR qPCR Master Mix</td><td>Vazyme</td><td>Cat#Q341-02</td><td></td></tr><tr><td>Kit d’isolement des lymphocytes du sang périphérique de canard</td><td>Tbdscience</td><td>Cat#LTS1090D</td><td></td></tr><tr><td>Evo M-MLV RT Premix</td><td>Accurate Biotechnology</td><td>Cat#AG11706</td><td></td></tr><tr><td>Isolement total de l’ARN FastPure Cell/Tissue Kit V2</td><td>Vazyme</td><td>Cat#RC112-01</td><td></td></tr><tr><td>Sérum de veau fœtal</td><td>Gibco</td><td>Cat#10437-028</td><td></td></tr><tr><td>Cytomètre en flux</td><td>Beckman Coulter</td><td>BA43347</td><td></td></tr><tr><td>Flow Tube</td><td>Beyotime</td><td>Cat#FFC005</td><td></td></tr><tr><td>FlowJo v10.8.1</td><td>Tree Star</td><td>https://www.flowjo.com</td><td></td></tr><tr><td>Goat Anti-Mouse 488, dilution 1:50</td><td>Abbkine</td><td>Cat#A23210</td><td></td></tr><tr><td>Chèvre Anti-souris IgG2b, FITC, dilution 1:50</td><td>Southern Biotech</td><td>Cat#1091-31</td><td></td></tr><tr><td>Chèvre Anti-souris IgG3, PE, dilution 1:250</td><td>Southern Biotech&nbsp ;</td><td>Cat#1100-09S</td><td></td></tr><tr><td>GraphPad prisme 8.0.2</td><td>Logiciel GraphPad</td><td>https://www.graphpad-prism.cn</td><td></td></tr><tr><td>H5N1 Souche AIV DK383</td><td>Laboratoire Mixte National et Régional d’Ingénierie pour la Prévention et le Contrôle des Zoonoses</td><td>A/Duck/Guangdong/383/2008</td><td></td></tr><tr><td>L-glutamine (200 mM)</td><td>Gibco</td><td>Cat#25030081</td><td></td></tr><tr><td>Microscope</td><td>Motic</td><td>AE2000</td><td></td></tr><tr><td>Souris Anti-Duck CD4, dilution 1:50</td><td>Bio-Rad</td><td>Cat#MCA2478</td><td></td></tr><tr><td>Souris Anti-Duck CD8&alpha ;, dilution 1:50</td><td>GeneTex&nbsp ;</td><td>Cat#GTX41834</td><td></td></tr><tr><td>Souris Anti-Canard IFN-&gamma ; mAb, dilution 1:10</td><td>Préparé dans notre laboratoire&nbsp ;</td><td></td><td></td>NA</tr><tr><td>NanoDrop One Spectrophotomètre</td><td>Thermo Fisher</td><td>AZY1603209</td><td></td></tr><tr><td>NEAA (non essentiel</td><td>Gibco</td><td>Cat#11140-050</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Gibco</td><td>Cat#10010023</td><td></td></tr><tr><td>PCR Thermal Cycler</td><td>Biometra Biometra</td><td>Tone 96G</td><td></td></tr><tr><td>Pénicilline-streptomycine solution</td><td>Gibco</td><td>Cat#15070063</td><td></td></tr><tr><td>Système de PCR en temps réel</td><td>Applied Biosystems</td><td>ABI7500 l’IL-2</td><td></td></tr><tr><td>humaine recombinante (10 &mu ; g)</td><td>USCNK</td><td>Cat#RPA111Ga01</td><td></td></tr><tr><td>Tampon de lyse des globules rouges</td><td>Tbdscience</td><td>Cat#NH4CL2009</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640</td><td>Gibco</td><td>Cat#11875-119</td><td></td></tr><tr><td>Pyruvate de sodium (100 mM)</td><td>Gibco</td><td>Cat#11360-070</td><td></td></tr><tr><td>Trypan Blue</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Cat#93595</td><td></td></tr><tr><td>Canards colverts de deux semaines (Sheldrake)</td><td>une ferme de canards en Guangzhou</td>, <td>NA</td><td></td></tr></tbody></table>

in vitro culture de lymphocytes t de canard spécifiques au h5n1 et détection des réponses immunitaires à l’aide d’une méthode de coloration des cytokines intracellulaires

In Vitro Culture for H5N1-Specific Duck T Cells and Detection of Immune Responses Using Intracellular Cytokine Staining Method

Ce protocole a été développé sur la base d’une étude antérieure sur la détection des réponses effectrices des lymphocytes T spécifiques à l’antigène chez les canards20. La première étape de l’expérience consiste à cultiver in vitro des lymphocytes T spécifiques du virus, qui servent de base aux études ultérieures sur la réponse effectrice. Initialement, les APC ont été incubés et co-cultivés avec des cellules effectrices. Les observations morphologiques ont révélé qu’après prolifération, ...

In vitro Culture de lymphocytes T de canard spécifiques au H5N1 et détection des réponses immunitaires à l’aide d’une méthode de coloration des cytokines intracellulaires

The in vitro culture of T cells is a critical method for studying immune responses, viral infections, and potential therapeutic strategies. However, no ...

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Immunology and Infection

Immunologie et infection

Nous avons développé un test in vitro pour étudier le rôle des voies immunorégulatoires dans la régulation de la sécrétion de cytokines par les cellules T CD4 spécifiques du VIH.

Essai in vitro pour évaluer l&#39;impact de IMMUNOREGULATEURS voies sur T CD4 cellulaire effecteur Fonction spécifique au VIH

Contrairement aux particules du VIH-1 sans cellules, les cellules T CD4 + infectées sont effectivement détectés par des cellules dendritiques plasmacytoïdes (pDC). Ce manuscrit décrit une méthode où les cellules périphériques mononucléaires du sang (PBMC) ou des pDC isolées sont co-cultivées avec le VIH-1 des cellules T infectées par détection d'évaluer innée par les pDC évaluée par la libération de l'IFN de type I.

L&#39;évaluation de l&#39;Innate détection du VIH-1 CD4 infectés<sup&gt; +</sup&gt; Cellules T par les cellules dendritiques plasmacytoïdes Utilisation d&#39;un<em&gt; Ex vivo</em&gt; Système de co-culture.

La capacité de surveiller les réponses des cellules T en détail in vivo est importante pour le développement de la compréhension de la réponse immunitaire. Nous décrivons ici l'utilisation de réseaux de cibles fluorescentes (ALE) dans un test in vivo de cellules T en évaluant&gt; 250 paramètres simultanément par cytométrie de flux.

L&#39;utilisation des tableaux cibles fluorescentes pour l&#39;évaluation des réponses des cellules T<em&gt; In vivo</em

in vitro des lymphocytes T et une coloration intracellulaire des cytokines – ont été utilisées pour mesurer la capacité de présentation de l jove_content’antigène des cellules dendritiques et les réponses des lymphocytes T spécifiques de l&gt;'antigène à une infection mutante par le virus du Nil occidental chez la souris.

Analyse in vitro de la réponse immunitaire cellulaire Myd88 médiation au virus du Nil occidental souche mutante Infection

Il y a un manque général de connaissances sur le fonctionnement des vaccins. Ici, nous proposons l’utilisation combinée de la génétique inverse et de souris chimériques de la moelle osseuse pour mieux comprendre les réponses immunitaires précoces de l’hôte aux vaccins, en mettant l’accent sur les cellules dendritiques et l’immunité des lymphocytes T.

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Virus de l’influenza (IAVs) sont des agents pathogènes respiratoires humains importants. Pour comprendre le pouvoir pathogène de IAVs et d’effectuer des essais précliniques de nouveau vaccin approches, modèles animaux imitant la physiologie humaine sont nécessaires. Nous décrivons ici les techniques pour évaluer l’IAV pathogenèse, humorale et l’efficacité du vaccin en utilisant un modèle de souris de l’infection.

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Le développement du test ELISpot interféron-gamma pour cobaye PBMC permet la caractérisation des lymphocytes T dans ce modèle très pertinent pour l’étude des maladies infectieuses. Nous avons appliqué le test permettant de mesurer les lymphocytes T associés intradermique de vaccins à ADN.

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Nous décrivons ici un protocole pour l’emballage des pseudovirus et la mesure de l’activité neutralisante des anticorps.

Préparation de virus pseudo-typés H5 de la grippe aviaire avec procédé de transfection de phosphate de calcium et mesure de l’activité neutralisante des anticorps

Découvrez la culture de lymphocytes T spécifiques au H5N1 chez le canard et la détection de l'IFN-γ par coloration des cytokines intracellulaires. Cette méthode permet d'étudier les réponses immunitaires aviaires.

In vitro Culture de lymphocytes T de canard spécifiques au H5N1 et détection des réponses immunitaires à l’aide d’une méthode de coloration des cytokines intracellulaires (Vidéo) | JoVE Journal

In vitro Culture de lymphocytes T de canard spécifiques au H5N1 et détection des réponses immunitaires à l’aide d’une méthode de coloration des cytokines intracellulaires

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