Name: Fabrication reproductible de SPOT en tant que plate-forme de culture à haut débit basée sur un échafaudage (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-07-29T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 22 s
Description: Découvrez la fabrication de la plateforme SPOT pour des cultures d'organoides à haut débit avec échafaudage. Ce protocole améliore le criblage de médicaments et la modélisation de maladies.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Antoni, D., Burckel, H., Josset, E., Noel, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-Dimensional+Cell+Culture%3A+A+Breakthrough+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Three-Dimensional Cell Culture: A Breakthrough in vivo.</a> Int J Mol Sci. 16 (3), 5517-5527 (2015).</li>
<li>Pampaloni, F., Reynaud, E. G., Stelzer, E. H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+third+dimension+bridges+the+gap+between+cell+culture+and+live+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">The third dimension bridges the gap between cell culture and live tissue.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 8 (10), 839-845 (2007).</li>
<li>Zhao, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Methods+Primers%22%5BJournal%5D)">Organoids.</a> Nat Rev Methods Primers. 2 (1), 1-21 (2022).</li>
<li>Done, A. J., Birkeland, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organoids+as+a+tool+in+drug+discovery+and+patient-specific+therapy+for+head+and+neck+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22CR+Med%22%5BJournal%5D)">Organoids as a tool in drug discovery and patient-specific therapy for head and neck cancer.</a> CR Med. 4 (6), 101087(2023).</li>
<li>Drost, J., Clevers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organoids+in+cancer+research%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Organoids in cancer research.</a> Nat Rev Cancer. 18 (7), 407-418 (2018).</li>
<li>Schuster, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+microfluidic+platform+for+dynamic+and+combinatorial+drug+screening+of+tumor+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Automated microfluidic platform for dynamic and combinatorial drug screening of tumor organoids.</a> Nat Commun. 11 (1), 5271(2020).</li>
<li>Bozal, S. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+an+automated+3D+high+content+cell+screening+platform+for+organoid+phenotyping%5BTitle%5D)+AND+%22SLAS+Disc%22%5BJournal%5D)">Development of an automated 3D high content cell screening platform for organoid phenotyping.</a> SLAS Disc. 29 (7), 100182(2024).</li>
<li>Seiler, S. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modular+automated+microfluidic+cell+culture+platform+reduces+glycolytic+stress+in+cerebral+cortex+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Modular automated microfluidic cell culture platform reduces glycolytic stress in cerebral cortex organoids.</a> Sci Rep. 12 (1), 20173(2022).</li>
<li>Costa, E. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((3D+tumor+spheroids%3A+an+overview+on+the+tools+and+techniques+used+for+their+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol+Adv%22%5BJournal%5D)">3D tumor spheroids: an overview on the tools and techniques used for their analysis.</a> Biotechnol Adv. 34 (8), 1427-1441 (2016).</li>
<li>Pinho, D., Santos, D., Vila, A., Carvalho, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+Colorectal+Cancer+Organoids+in+Microfluidic-Based+System%5BTitle%5D)+AND+%22Micromachines%22%5BJournal%5D)">Establishment of Colorectal Cancer Organoids in Microfluidic-Based System.</a> Micromachines. 12 (5), 497(2021).</li>
<li>Töpfer, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bovine+colon+organoids%3A+From+3D+bioprinting+to+cryopreserved+multi-well+screening+platforms%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol+in+Vitro%22%5BJournal%5D)">Bovine colon organoids: From 3D bioprinting to cryopreserved multi-well screening platforms.</a> Toxicol in Vitro. 61, 104606(2019).</li>
<li>Tong, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Towards+a+defined+ECM+and+small+molecule+based+monolayer+culture+system+for+the+expansion+of+mouse+and+human+intestinal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Towards a defined ECM and small molecule based monolayer culture system for the expansion of mouse and human intestinal stem cells.</a> Biomaterials. 154, 60-73 (2018).</li>
<li>Krebs, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Carrageenan-Based+Crowding+and+Confinement+Combination+Approach+to+Increase+Collagen+Deposition+for+In+Vitro+Tissue+Development%5BTitle%5D)+AND+%22Gels%22%5BJournal%5D)">Carrageenan-Based Crowding and Confinement Combination Approach to Increase Collagen Deposition for In Vitro Tissue Development.</a> Gels. 9 (9), 705(2023).</li>
<li>Li, N. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+off-the-shelf+multi-well+scaffold-supported+platform+for+tumour+organoid-based+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">An off-the-shelf multi-well scaffold-supported platform for tumour organoid-based tissues.</a> Biomaterials. 291, 121883(2022).</li>
<li>Phan, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+high-throughput+approach+identifies+actionable+drug+sensitivities+in+patient-derived+tumor+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Commun+Biol%22%5BJournal%5D)">A simple high-throughput approach identifies actionable drug sensitivities in patient-derived tumor organoids.</a> Commun Biol. 2 (1), 78(2019).</li>
<li>Hofer, M., Lutolf, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mater%22%5BJournal%5D)">Engineering organoids.</a> Nat Rev Mater. 6 (5), 402-420 (2021).</li>
<li>Landon-Brace, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Engineered+Patient-Derived+Tumor+Organoid+Model+That+Can+Be+Disassembled+to+Study+Cellular+Responses+in+a+Graded+3D+Microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Func+Mater%22%5BJournal%5D)">An Engineered Patient-Derived Tumor Organoid Model That Can Be Disassembled to Study Cellular Responses in a Graded 3D Microenvironment.</a> Adv Func Mater. 31 (41), 2105349(2021).</li>
<li>Cao, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Automation+Workflow+for+High-Throughput+Manufacturing+and+Analysis+of+Scaffold-Supported+3D+Tissue+Arrays%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Healthcare+Mater%22%5BJournal%5D)">An Automation Workflow for High-Throughput Manufacturing and Analysis of Scaffold-Supported 3D Tissue Arrays.</a> Adv Healthcare Mater. 12 (19), 2202422(2023).</li>
<li>Rodenhizer, D., Dean, T., Xu, B., Cojocari, D., McGuigan, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+three-dimensional+engineered+heterogeneous+tumor+model+for+assessing+cellular+environment+and+response%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">A three-dimensional engineered heterogeneous tumor model for assessing cellular environment and response.</a> Nat Protoc. 13 (9), 1917-1957 (2018).</li>
<li>Young, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+TRACER+3D+Co-Culture+tumour+model+for+head+and+neck+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">A TRACER 3D Co-Culture tumour model for head and neck cancer.</a> Biomaterials. 164, 54-69 (2018).</li>
<li>Dean, T., Li, N. T., Cadavid, J. L., Ailles, L., McGuigan, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+TRACER+culture+invasion+assay+to+probe+the+impact+of+cancer+associated+fibroblasts+on+head+and+neck+squamous+cell+carcinoma+cell+invasiveness%5BTitle%5D)+AND+%22Biomater+Sci%22%5BJournal%5D)">A TRACER culture invasion assay to probe the impact of cancer associated fibroblasts on head and neck squamous cell carcinoma cell invasiveness.</a> Biomater Sci. 8 (11), 3078-3094 (2020).</li>
<li>Du, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+miniaturized+3D+organoid+culture+platform+for+ultra-high-throughput+screening%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Development of a miniaturized 3D organoid culture platform for ultra-high-throughput screening.</a> J Mol Cell Biol. 12 (8), 630-643 (2020).</li>
<li>Shing, C. B. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aShing%2C+CB+%22Automating+the+Generation+of+a+High-Throughput+Three-+Dimensional+Human+Adipocyte+Model%22">Automating the Generation of a High-Throughput Three- Dimensional Human Adipocyte Model</a>. , University of Toronto. (2009).</li>
</ol>

Malgré les progrès de la recherche biomédicale, la mise au point de tests in vitro pertinents sur le plan physiologique reste un défi. Un test idéal doit s’adapter à un large éventail de types de cellules, de formulations de traitement, de délais, d’instruments commerciaux et de lectures analytiques pour répondre aux besoins des chercheurs de diverses disciplines. Cependant, en raison du manque d’outils adaptés, les chercheurs s’appuient souvent sur des modèles simplistes, tels que les monocouches 2D de lignées cellulaires immortalisées, qui ne parviennent pas à récapituler la complexité et la pertinence clinique, en particulier dans la recherche sur lecancer1,2. Pour y remédier, les biobanques tumorales à grande échelle et la collaboration des cliniciens ont conduit au développement de modèles in vitro haute fidélité tels que les organoïdes tumoraux dérivés de patients (APO), qui conservent des profils génétiques et thérapeutiques plus spécifiques au patient par rapport aux lignées cellulaires 3,4,5. Parallèlement, les progrès en matière d’automatisation des laboratoires et de découverte de médicaments exigent des plateformes qui s’intègrent de manière transparente dans les flux de travail à haut débit. Bien que les plateformes existantes abordent soit la fidélité biologique, soit l’évolutivité, peu d’entre elles ont été en mesure de résoudre les deux défis simultanément 6,7,8. Le développement de modèles automatisés à haut débit qui reproduisent les principales caractéristiques des maladies est crucial pour faire progresser la recherche biomédicale et accélérer la génération de données pour les applications translationnelles.
De nombreux modèles émergents visent à relever les défis associés à la culture de types de cellules spécialisés, tels que les AOP, à haut débit (Figure 1). Les plates-formes standard, où les organoïdes sont mélangés à de l’hydrogel dans des plaques de 96 ou 384 puits, présentent plusieurs limites : (i) un volume élevé de gel cellulaire entraîne un accès inégal aux nutriments, (ii) la courbure du ménisque crée des artefacts d’imagerie et des gradients cellulaires, (iii) l’ensemencement d’hydrogel manque d’uniformité entre les lots et le personnel, (iv) incompatibilité avec la fabrication automatisée et la microscopie automatisée, et (v) l’utilisation d’une matrice extracellulaire (ECM) qui est généralement un échantillon de risque mou et fragile destruction à des densités tissulaires physiologiques ou incorporation de types de cellules contractiles 1,9. À l’heure actuelle, la majorité des études PDO sur plaque sont menées soit par ensemencement manuel du gel cellulaire dans la plaque10,11, soit par une méthode de recouvrement de gel, où l’hydrogel est dilué avec un milieu moins visqueux, et les cellules sont centrifugées au fond du puits pour les placer dans le plan optique approprié12,13. Les deux approches ne parviennent pas à fournir un soutien mécanique à la culture à long terme. D’après nos observations précédentes (données non publiées), l’hydrogel commercial mélangé à des cellules dans des plaques de puits standard se contracte à partir des surfaces du puits pour 9 puits sur 12 sur 12 sur 12 jours, tandis que la méthode de recouvrement de gel manque d’interactions physiologiques cellule-matrice. De plus, les cultures résultantes ne peuvent pas être maintenues pendant de longues périodes en raison de l’espace limité à l’intérieur du puits et sont incompatibles avec les tests qui nécessitent un rapport réactif/cellule-milieu élevé 14,15,16. Ces obstacles pratiques entravent l’adoption de modèles 3D et limitent la reproductibilité expérimentale sur le terrain.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68405/68405fig1.jpg"> 
Figure 1 : Évaluation des modèles de culture en fonction de l’évolutivité et de la pertinence biologique. Le positionnement relatif de divers systèmes de culture in vitro et in vivo en fonction de l’évolutivité (axe y), défini par le débit de plaques, et de la pertinence biologique (axe x), mettant en évidence les compromis entre le potentiel de débit et la fidélité physiologique. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68405/68405fig1large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
Motivés par ces défis, la porosité élevée et le renforcement mécanique d’un échafaudage mince en cellulose ont été mis à profit pour développer la plate-forme SPOT (Scaffold-supported Platform for Organoid-based Tissues), disponible en formats 96 et 384 puits. SPOT intègre un échafaudage pré-structuré en polymère à l’aide d’une méthode d’infiltration17 précédemment développée qui correspond à la disposition de la plaque, permettant un placement précis des gouttelettes de gel cellulaire et fournissant un support structurel pour la phase hydrogel (Figure 2A). La mèche capillaire dans l’échafaudage guide la solution cellule-gel, formant un réseau de biocomposites à force mécanique (Figure 2B). En raison de la structure poreuse de l’échafaudage, le cellule-gel s’infiltre et forme une fine couche (environ 70 μm d’épaisseur), nécessitant dix fois moins de cellule-gel pour couvrir le fond du puits14. La compatibilité de SPOT avec l’ensemencement d’adénocarcinome canalaire pancréatique (PDAC) a également été démontrée par l’évaluation de leur croissance à l’aide de tests métaboliques et de mesures basées sur l’image. Depuis sa mise au point, SPOT a fait preuve d’une grande polyvalence et d’une grande facilité d’utilisation pour les chercheurs qui pratiquent la culture d’organoïdes. De plus, la conception de SPOT permet une évolutivité conviviale, avec des volumes de réactifs réduits et des capacités d’imagerie améliorées grâce à sa géométrie de microgel plate et sans ménisque, garantissant une pénétration uniforme de la lumière et une imagerie précise à haut contenu14 (Figure 2C,D). SPOT soutient également la co-culture avec d’autres types de cellules pertinentes, tels que les fibroblastes, pour mieux récapituler le microenvironnement tumoral18.
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68405/68405fig2.jpg"> 
Figure 2 : Vue d’ensemble de l’appareil 96-SPOT et du flux de travail d’analyse d’images. (A) Représentation schématique de la fabrication des plaques SPOT : l’appareil est assemblé en assemblant une plaque commerciale sans fond (en haut), un échafaudage à motif PMMA (en bleu) et un film de polycarbonate (en bas) à l’aide de couches d’adhésif polyacrylique double face (en jaune). (B) Ensemencement des cellules dans le puits de l’échafaudage : les cellules sont suspendues dans un hydrogel non polymérisé (en rose) et pipetées dans chaque puits où elles s’infiltrent dans l’échafaudage. On laisse ensuite l’hydrogel se gélifier pour encapsuler les cellules dans l’hydrogel soutenu par un échafaudage. (C) Microscopie : le microtissu résultant peut être imagé à l’aide de la microscopie automatisée à grand champ. (D) Analyse basée sur l’image : Les images acquises de cellules fluorescentes (vertes) en suspension dans du gel peuvent être analysées à l’aide de pipelines d’analyse d’images standard. Image représentative de microscopie à épifluorescence de cellules KP4 exprimant la GFP dans un puits 96-SPOT. La barre d’échelle est de 500 μm. Ce chiffre a été modifié au lieu de14. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68405/68405fig2large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
Un autre avantage de SPOT est que le système peut être intégré à un manipulateur de liquides open source, ce qui facilite la fabrication automatisée et reproductible de cultures PDO. Cette avancée réduit la variabilité des utilisateurs et prend en charge des conceptions expérimentales complexes, y compris le criblage de médicaments à haut débit et les approches de médecine personnalisée18. Il a également été démontré précédemment que SPOT est compatible avec la caractérisation multiplexée des phénotypes cellulaires dans des environnements tumoraux hétérogènes et la récupération des cellules à la demande de SPOT par digestion18. Ces caractéristiques positionnent SPOT comme un outil polyvalent pour les applications de criblage, où des données longitudinales à haute résolution sont essentielles pour évaluer l’efficacité des médicaments et le comportement cellulaire dans des conditions physiologiquement pertinentes14,18. En combinant ces innovations techniques, SPOT s’attaque aux limites critiques des systèmes de culture 3D traditionnels.
Ce protocole fournit un guide complet pour la fabrication de composants SPOT, l’assemblage de plaques et les méthodes d’ensemencement pour des cultures d’organoïdes 3D robustes et reproductibles. Il comprend des instructions détaillées pour l’ensemencement manuel des plaques à l’aide d’une micropipette et des flux de travail d’ensemencement automatisés avec un manipulateur de liquides, qui prend en charge les formats 96 et 384 puits. De plus, ce protocole décrit les mesures essentielles de contrôle de la qualité, telles que la vérification de la distribution uniforme du gel et de l’intégrité de l’échafaudage, afin de maintenir des normes expérimentales élevées. Des stratégies de dépannage sont également fournies pour résoudre les problèmes courants, tels que l’infiltration incomplète de gel, l’évaporation pendant l’ensemencement et le détachement de l’échafaudage, fournissant aux chercheurs des solutions pratiques pour optimiser leurs flux de travail et obtenir des résultats fiables.
SPOT est conçu pour combler les lacunes auxquelles sont confrontés les tests organoïdes traditionnels, y compris les défis liés à la réalisation de tests et de changements de supports tout en préservant l’intégrité du gel 10,11,12,13. L’objectif global de cette méthode est de fabriquer une plate-forme soutenue par un échafaudage qui soutient la culture d’organoïdes sur une période de 12 jours. De plus, cette méthode couvre également la génération de réseaux de tissus dans SPOT par le biais d’un ensemencement manuel ou assisté par un manipulateur de liquides pour permettre aux utilisateurs d’effectuer toute perturbation en aval, y compris les tests de médicament IC50 et le criblage de petites molécules.

<table><tbody><tr><td>Tubes PCR de 0,2 ml (bandelettes de 8)&nbsp ;</td><td>Sarstedt</td><td>72.985.002</td><td></td></tr><tr><td>Tube à centrifuger de 1,5 ml</td><td>FroggaBio</td><td>LMCT1.7B</td><td></td></tr><tr><td>1000-&mu ; L pointes de pipette</td><td>Éclipse</td><td>4-1019-260-000</td><td></td></tr><tr><td>Pipettes sérologiques de 10 mL</td><td>FroggaBio</td><td>394010</td><td></td></tr><tr><td>Seringue de 10 ml</td><td>BD, Canada</td><td>302995</td><td></td></tr><tr><td>10x Support essentiel minimal (MEM 10x)</td><td>Gibco</td><td>11430030</td><td></td></tr><tr><td>Plat de 150 mm</td><td>Corning</td><td>430599</td><td></td></tr><tr><td>Embouts de distribution de calibre 16 avec connexion Luer lock</td><td>McMaster-Carr, Illinois, États-Unis</td><td>Référence 6699A2</td><td></td></tr><tr><td>20 et micro ; Racks de filtres L</td><td>Les Opentrons</td><td>999-00099</td><td></td></tr><tr><td>200 et micro ; Racks de filtres L</td><td>Les Opentrons</td><td>999-00081</td><td></td></tr><tr><td>200-&mu ; L pointes de pipette</td><td>Éclipse</td><td>4-1030-260-000</td><td></td></tr><tr><td>Embouts de distribution de calibre 20 avec connexion Luer lock</td><td>McMaster-Carr, Illinois, États-Unis</td><td>Référence 6699A4</td><td></td></tr><tr><td>Plaque de puits sans fond de 384 puits (noire)</td><td>Greiner</td><td>82051-544</td><td></td></tr><tr><td>Seringue de 3 ml&nbsp ;</td><td>BD, Canada</td><td>309657</td><td></td></tr><tr><td>Tube à centrifuger conique en polypropylène de 50 mL</td><td>VWR</td><td>CA21008-940</td><td></td></tr><tr><td>Tube à centrifuger conique en polypropylène de 50 mL</td><td>VWR</td><td>CA21008-940</td><td></td></tr><tr><td>Plaque de puits sans fond de 96 puits (noire)</td><td>Greiner</td><td>82050-714</td><td></td></tr><tr><td>Acétone</td><td>Fisher Scientific</td><td>Réf. A18-1</td><td></td></tr><tr><td>Balance analytique</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Extension AxiDraw pour Inkscape (https://wiki.evilmadscientist.com/Axidraw_Software_Installation)</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>API Python AxiDraw (https://axidraw.com/doc/py_api/#installation)&nbsp ;</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>AxiDraw V3 Machine à écrire et à dessiner personnelle haute performance</td><td>Evil Mad Scientists, États-Unis</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Collagène bovin (PureCol 3 mg/ml)</td><td>BioMatrice avancée</td><td>5005</td><td></td></tr><tr><td>Lignée cellulaire de votre choix</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Chevalet à clip (inclus dans l’emballage AxiDraw V3)</td><td>Evil Mad Scientists, États-Unis</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Milieux de culture de choix</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Ruban de protection contre la saleté</td><td>3M</td><td>6851 PN36851</td><td></td></tr><tr><td>Ruban adhésif polyacrylique double face (800 mm x 1200 mm)</td><td>Recherche sur les adhésifs, ARcare</td><td>Référence 90106NB</td><td></td></tr><tr><td>Sérum fœtal bovin (FBS)</td><td>Gibco</td><td>12483-020</td><td></td></tr><tr><td>Filtres à thé Finum XL&nbsp ;</td><td>Riensch & Held GmbH & Co. KG, Hambourg, Allemagne</td><td>420.69.00</td><td></td></tr><tr><td>Bouchons plats pour tubes PCR de 0,2 ml (bandes de 8)</td><td>Sarstedt</td><td>65.989.002</td><td></td></tr><tr><td>Pinces à ressort en plastique robustes</td><td>POINT DE RÉFÉRENCE</td><td>1024-554</td><td></td></tr><tr><td>Module HEPA &ndash ; Modèle 110-130V 60Hz</td><td>Les Opentrons</td><td>999-00109</td><td></td></tr><tr><td>Sac de glace (congelé, 1400 mm x 1800 mm)</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Logiciel Inkscape</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Découpeuse laser</td><td>Système laser universel</td><td>VLS3.75</td><td></td></tr><tr><td>Tube miniature en éthyl-acétate de vinyle (EVA) de 0,07 pouce de diamètre extérieur</td><td>McMaster-Carr, Illinois, États-Unis</td><td>1883T3</td><td></td></tr><tr><td>Pipette électronique multicanaux P20 (Gen2)</td><td>Les Opentrons</td><td>999-00005</td><td></td></tr><tr><td>Pipette électronique multicanaux P300 (Gen2)</td><td>Les Opentrons</td><td>999-00006</td><td></td></tr><tr><td>Vernis à ongles</td><td>Sally Hansen</td><td>Réf. SBS-006861</td><td>En option, pour la pigmentation de l’encre PMMA</td></tr><tr><td>Opentrons OT-2</td><td>Les Opentrons</td><td>999-00111</td><td></td></tr><tr><td>Pipette P1000</td><td>Gilson</td><td>FA10006M</td><td></td></tr><tr><td>Pipette 8 canaux P200</td><td>Gilson</td><td>F144072</td><td></td></tr><tr><td>Pipette P200</td><td>Gilson</td><td>FA10005M</td><td></td></tr><tr><td>Essuie-tout</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Société Bemis, Inc.</td><td>52859-079</td><td></td></tr><tr><td>Papier sulfurisé&nbsp ; &nbsp ;</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Pipettes Pasteur</td><td>VWR</td><td>14672-380</td><td></td></tr><tr><td>Pénicilline-streptomycine (P/S)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Réf. P4333</td><td></td></tr><tr><td>Poly(méthacrylate de méthyle) (PMMA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>182230</td><td></td></tr><tr><td>Film polycarbonate (760 mm x 1300 mm)</td><td>McMaster-Carr</td><td>Référence 85585K102</td><td></td></tr><tr><td>Polydiméthylsiloxane monomère et réticulant (PDMS, 1500 mm x 2700 mm)</td><td>Adhésifs Ellsworth</td><td>4019862</td><td></td></tr><tr><td>Couteau de précision</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Support acrylique rigide (taille ajustée au fond de la plaque de puits)</td><td>McMaster-Carr</td><td>Référence 8560K239</td><td></td></tr><tr><td>Support en carton rigide</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Règle</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Ciseaux&nbsp ;</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Bicarbonate de sodium (0,8 M dans l’eau distillée)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S6014</td><td></td></tr><tr><td>Plateau de température avec blocs en aluminium (Gen2)</td><td>Les Opentrons</td><td>999-00097</td><td></td></tr><tr><td>Roue de traçage&nbsp ;</td><td>HEEPDD (Amazon)</td><td>B07YQWB284</td><td></td></tr><tr><td>Ruban adhésif transparent&nbsp ;</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Trypan bleu</td><td>Gibco</td><td>15250-061</td><td></td></tr><tr><td>Trypsine</td><td>Gibco</td><td>25200-056</td><td></td></tr><tr><td>Brucelles</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Mélangeur vortex&nbsp ;</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr></tbody></table>

fabrication reproductible de spot en tant que plate-forme de culture à haut débit basée sur un échafaudage

Reproducible Manufacturing of SPOT as a High-throughput Scaffold-based Culture Platform

Le motif PMMA de l’échafaudage en papier sert de barrière physique pour empêcher l’échange de contenu entre les puits. Cette conception est essentielle pour garantir que les puits adjacents restent isolés chimiquement et biologiquement, empêchant la diffusion involontaire de fluides, de médicaments, de facteurs sécrétés ou même de cellules14. L’incorporation de PMMA permet une compartimentation précise, ce qui fait de SPOT une plate-forme fiable pour le criblage à haut débit et les études de co-cu...

Fabrication reproductible de SPOT en tant que plate-forme de culture à haut débit basée sur un échafaudage

Patient-derived organoids (PDOs) are becoming increasingly used in the field of cancer research to model tumors. They combine the benefits of in vivo and ...

reproducible-manufacturing-spot-as-high-throughput-scaffold-based

Research

Recherche

JoVE Journal

Bioengineering

Bioingénierie

Dans le passé, de nombreux systèmes de culture in vitro - cultures en monocouche principalement - ont souvent souffert de l'inconvénient que différenciées des cellules primaires ont une relativement courte durée de vie et de-différenciées au cours de la culture. En conséquence, la plupart de leurs organes des fonctions spécifiques ont été perdus rapidement. Ainsi, afin de reproduire de meilleures conditions pour ces cellules in vitro, des modifications et des adaptations ont été apportées aux...

Interview: bioréacteurs et de surfaçage-Modified-3D Echafaudages pour la recherche de cellules souches

Un haut-débit, plate-forme automatisée de développement des cellules de fabrication pour produire des protéines thérapeutiques est décrite. La mise en œuvre de la BD FACS Aria trieur de cellules, CloneSelect Imager et TECAN Freedom EVO système de manipulation de liquides a démontré la capacité de traitement significativement augmenté dans le développement de la lignée cellulaire avec une qualité améliorée de lignée cellulaire et la reproductibilité élevée.

Une plate-forme à haut débit automatisé pour le développement de lignées cellulaires de fabrication des protéines thérapeutiques

Les protocoles décrits permettent aux laboratoires d’effectuer une culture de cellules souches évolutives et adhérentes à haut débit avec un minimum de main-d’œuvre, d’expérience et de coût d’investissement en équipement à l’aide d’un robot de manipulation de liquides programmable et de plaques à 96 puits.  Les iPSC passées plus de 20 fois sur ce système ont maintenu la pluripotence, les caryotypes normaux et se sont différenciées en cardiomyocytes.

Scalable plaque de 96 puits Basé iPSC Culture et production en utilisant un système robotique Liquid Handling

Cet article décrit la méthodologie détaillée pour préparer un tableau microenvironnement cellulaire artificiel multiplexés (MACME) pour le haut débit manipulation physique et chimique cues imitant en vivo microenvironnements cellulaires et à identifier l’environnement cellulaire optimal pour les cellules souches pluripotentes humaines (hPSCs) avec le profilage de cellule unique.

Fabrication d’un réseau multiplexé microenvironnement cellulaire artificiel

Ce protocole sert de didacticiel complet pour le mélange standardisé et reproductible de matériaux visqueux avec une nouvelle technologie d’automatisation open source. Des instructions détaillées sont fournies sur le fonctionnement d’un poste de travail open source nouvellement développé, l’utilisation d’un concepteur de protocole open source et la validation et la vérification pour identifier les mélanges reproductibles.

Une plate-forme technologique open source pour fabriquer des modèles de culture 3D basés sur l’hydrogel de manière automatisée et standardisée

Les tissus cardiaques tridimensionnels issus de la bio-ingénierie à l’aide de cardiomyocytes dérivés de cellules souches sont apparus comme des modèles prometteurs pour l’étude in vitro du myocarde humain sain et malade, tout en récapitulant les aspects clés de la niche cardiaque native. Ce manuscrit décrit un protocole de fabrication et d’analyse de tissus cardiaques artificiels à haut contenu générés à partir de cardiomyocytes induits pluripotents dérivés de cellules souches humaines.

Conception d’un bioréacteur pour améliorer l’acquisition de données et modéliser le débit des tissus cardiaques modifiés

Cet article présente un protocole de fabrication pour un nouveau type de substrat de culture avec des centaines de microconteneurs par mm2, dans lequel les organoïdes peuvent être cultivés et observés à l’aide de la microscopie à haute résolution. Les protocoles d’ensemencement cellulaire et d’immunomarquage sont également détaillés.

Une plateforme à haut débit pour la culture et l’imagerie 3D d’organoïdes

Nous présentons ici un protocole pour un système automatisé de culture cellulaire. Ce système de culture automatisé réduit la main-d’œuvre et profite aux utilisateurs, y compris les chercheurs qui ne sont pas familiers avec la manipulation des cellules souches pluripotentes induites (iPS), de l’entretien des cellules iPS à la différenciation en différents types de cellules.

Système de culture automatisé pour le maintien et la différenciation de cellules souches pluripotentes induites par l’homme

Ce protocole présente un flux de travail standard de criblage à haut débit pour les micro-organismes industriels. Il consiste à construire une bibliothèque de mutants via la mutagenèse ARTP, à effectuer un dépistage de gouttelettes positif avec microfluidique automatisée, puis à vérifier les résultats. La fiabilité du flux de travail a été validée en criblant des souches à haut rendement de B. coagulans .

Criblage à haut débit des mutants de Bacillus coagulans hyperproducteur d’acide L-lactique utilisant une plateforme microfluidique automatisée à gouttelettes

Traditionnel, en deux dimensions techniques de culture cellulaire entraînent souvent des caractéristiques modifiées par rapport aux marqueurs de différenciation, de cytokines et de facteurs de croissance. Culture cellulaire en trois dimensions dans le système de culture cellulaire en rotation (CRCT) rétablit l'expression de plusieurs de ces facteurs comme montré ici avec une lignée de cellules trophoblastiques extravilleux.

Rotation systèmes de culture cellulaire de la culture de cellules humaines: les cellules du trophoblaste humain comme modèle

Découvrez la fabrication de la plateforme SPOT pour des cultures d'organoides à haut débit avec échafaudage. Ce protocole améliore le criblage de médicaments et la modélisation de maladies.

Fabrication reproductible de SPOT en tant que plate-forme de culture à haut débit basée sur un échafaudage

Explorer plus de vidéos