Name: Tomographie par microscopie électronique à transmission à balayage en virologie : imagerie 3D d’échantillons congelés à haute pression et substitués par congélation (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-08-06T12:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 17 s
Description: Découvrez la tomographie STEM en virologie pour l'imagerie 3D de cellules infectées par des virus. Cette méthode combine congélation à haute pression et substitution par congélation pour visualiser les altérations ultrastructurales.

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<ol><li>Laue, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chapter+1+electron+microscopy+of+viruses%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Chapter 1 electron microscopy of viruses.</a> Methods Cell Biol. 96, 1-20 (2010).</li>
<li>Goldsmith, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+culture+and+electron+microscopy+for+identifying+viruses+in+diseases+of+unknown+cause%5BTitle%5D)+AND+%22Emerg+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Cell culture and electron microscopy for identifying viruses in diseases of unknown cause.</a> Emerg Infect Dis. 19 (6), 864-869 (2013).</li>
<li>Guo, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+electron+microscopy+in+virus+diagnosis+and+advanced+therapeutic+approaches%5BTitle%5D)+AND+%22J+Histotechnol%22%5BJournal%5D)">Application of electron microscopy in virus diagnosis and advanced therapeutic approaches.</a> J Histotechnol. 47 (1), 1-4 (2024).</li>
<li>Schauflinger, M., Villinger, C., Mertens, T., Walther, P., von Einem, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+human+cytomegalovirus+secondary+envelopment+by+advanced+electron+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Analysis of human cytomegalovirus secondary envelopment by advanced electron microscopy.</a> Cell Microbiol. 15 (2), 305-314 (2013).</li>
<li>Abdellatif, M. E. A., Sinzger, C., Walther, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigating+HCMV+entry+into+host+cells+by+STEM+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22J+Struct+Biol%22%5BJournal%5D)">Investigating HCMV entry into host cells by STEM tomography.</a> J Struct Biol. 204 (3), 406-419 (2018).</li>
<li>Wieland, J., Frey, S., Rupp, U., Essbauer, S., Groß, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zika+virus+replication+in+glioblastoma+cells%3A+electron+microscopic+tomography+shows+3D+arrangement+of+endoplasmic+reticulum%2C+replication+organelles%2C+and+viral+ribonucleoproteins%5BTitle%5D)+AND+%22Histochem+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Zika virus replication in glioblastoma cells: electron microscopic tomography shows 3D arrangement of endoplasmic reticulum, replication organelles, and viral ribonucleoproteins.</a> Histochem Cell Biol. 156 (6), 527-538 (2021).</li>
<li>Bergner, T., Zech, F., Hirschenberger, M., Stenger, S., Sparrer, K. M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Near-native+visualization+of+SARS-CoV-2+induced+membrane+remodeling+and+virion+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Viruses%22%5BJournal%5D)">Near-native visualization of SARS-CoV-2 induced membrane remodeling and virion morphogenesis.</a> Viruses. 14 (12), 2786(2022).</li>
<li>Romero-Brey, I., Bartenschlager, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Viral+infection+at+high+magnification%3A+3D+electron+microscopy+methods+to+analyze+the+architecture+of+infected+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Viruses%22%5BJournal%5D)">Viral infection at high magnification: 3D electron microscopy methods to analyze the architecture of infected cells.</a> Viruses. 7 (12), 6316-6345 (2015).</li>
<li>Baena, V., Conrad, R., Friday, P., Fitzgerald, E., Kim, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FIB-SEM+as+a+volume+electron+microscopy+approach+to+study+cellular+architectures+in+SARS-CoV-2+and+other+viral+infections%3A+a+practical+primer+for+a+virologist%5BTitle%5D)+AND+%22Viruses%22%5BJournal%5D)">FIB-SEM as a volume electron microscopy approach to study cellular architectures in SARS-CoV-2 and other viral infections: a practical primer for a virologist.</a> Viruses. 13 (4), 611(2021).</li>
<li>Villinger, C., Schauflinger, M., Gregorius, H., Kranz, C., Höhn, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electron+microscopy%2C+methods+and+protocols%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Electron microscopy, methods and protocols.</a> Methods Mol Biol. 1117, 617-638 (2013).</li>
<li>Hohmann-Marriott, M. F., Sousa, A. A., Azari, A., Glushakova, S., Zhang, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanoscale+3D+cellular+imaging+by+axial+scanning+transmission+electron+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Nanoscale 3D cellular imaging by axial scanning transmission electron tomography.</a> Nat Methods. 6 (10), 729-731 (2009).</li>
<li>Walther, P., Bauer, A., Wenske, N., Catanese, A., Garrido, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((STEM+tomography+of+high-pressure+frozen+and+freeze-substituted+cells%3A+a+comparison+of+image+stacks+obtained+at+200+kV+or+300+kV%5BTitle%5D)+AND+%22Histochem+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">STEM tomography of high-pressure frozen and freeze-substituted cells: a comparison of image stacks obtained at 200 kV or 300 kV.</a> Histochem Cell Biol. 150 (5), 545-556 (2018).</li>
<li>Rachel, R., Walther, P., Maaßen, C., Daberkow, I., Matsuoka, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dual-axis+STEM+tomography+at+200+kV%3A+setup%2C+performance%2C+limitations%5BTitle%5D)+AND+%22J+Struct+Biol%22%5BJournal%5D)">Dual-axis STEM tomography at 200 kV: setup, performance, limitations.</a> J Struct Biol. 211 (3), 107551(2020).</li>
<li>Mielanczyk, L., Matysiak, N., Michalski, M., Buldak, R., Wojnicz, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Closer+to+the+native+state.+Critical+evaluation+of+cryo-techniques+for+transmission+electron+microscopy%3A+preparation+of+biological+samples%5BTitle%5D)+AND+%22Folia+Histochem+Cytobiol%22%5BJournal%5D)">Closer to the native state. Critical evaluation of cryo-techniques for transmission electron microscopy: preparation of biological samples.</a> Folia Histochem Cytobiol. 52 (1), 1-17 (2014).</li>
<li>Walther, P., Schmid, E., Höhn, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+imaging+techniques%2C+methods+and+protocols%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Cell imaging techniques, methods and protocols.</a> Methods Mol Biol. 931, 525-535 (2012).</li>
<li>Steyer, A. M., Ruhwedel, T., Möbius, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biological+sample+preparation+by+high-pressure+freezing%2C+microwave-assisted+contrast+enhancement%2C+and+minimal+resin+embedding+for+volume+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Biological sample preparation by high-pressure freezing, microwave-assisted contrast enhancement, and minimal resin embedding for volume imaging.</a> J Vis Exp. (145), e59156(2019).</li>
<li>Read, C., Walther, P., von Einem, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+cytomegaloviruses%2C+methods+and+protocols%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Human cytomegaloviruses, methods and protocols.</a> Methods Mol Biol. 2244, 265-289 (2021).</li>
<li>Romero-Brey, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influenza+virus%2C+methods+and+protocols%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Influenza virus, methods and protocols.</a> Methods Mol Biol. 1836, 213-236 (2018).</li>
<li>Elbaum, M., Seifer, S., Houben, L., Wolf, S. G., Rez, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toward+compositional+contrast+by+cryo-STEM%5BTitle%5D)+AND+%22Acc+Chem+Res%22%5BJournal%5D)">Toward compositional contrast by cryo-STEM.</a> Acc Chem Res. 54 (19), 3621-3631 (2021).</li>
<li>Kirchweger, P., Mullick, D., Wolf, S. G., Elbaum, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualization+of+organelles+in+situ+by+cryo-STEM+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Visualization of organelles in situ by cryo-STEM tomography.</a> J Vis Exp. (196), (2023).</li>
<li>McDonald, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chapter+28+%26%2334%3Btips+and+tricks%26%2334%3B+for+high-pressure+freezing+of+model+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Chapter 28 &#34;tips and tricks&#34; for high-pressure freezing of model systems.</a> Methods Cell Biol. 96, 671-693 (2010).</li>
<li>Sosinsky, G. E., Crum, J., Jones, Y. Z., Lanman, J., Smarr, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+combination+of+chemical+fixation+procedures+with+high-pressure+freezing+and+freeze+substitution+preserves+highly+labile+tissue+ultrastructure+for+electron+tomography+applications%5BTitle%5D)+AND+%22J+Struct+Biol%22%5BJournal%5D)">The combination of chemical fixation procedures with high-pressure freezing and freeze substitution preserves highly labile tissue ultrastructure for electron tomography applications.</a> J Struct Biol. 161 (3), 359-371 (2008).</li>
<li>Kremer, J. R., Mastronarde, D. N., McIntosh, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Computer+visualization+of+three-dimensional+image+data+using+IMOD%5BTitle%5D)+AND+%22J+Struct+Biol%22%5BJournal%5D)">Computer visualization of three-dimensional image data using IMOD.</a> J Struct Biol. 116 (1), 71-76 (1996).</li>
<li>Rauch-Wirth, L., Schuetz, D., Groß, R., Rode, S., Glocker, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transduction+enhancing+EF-C+peptide+nanofibrils+are+endocytosed+by+macropinocytosis+and+subsequently+degraded%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Transduction enhancing EF-C peptide nanofibrils are endocytosed by macropinocytosis and subsequently degraded.</a> Biomaterials. , 317(2025).</li>
<li>Tonnemacher, S., Folly-Klan, M., Gazi, A. D., Schaefer, S., Pénard, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vaccinia+virus+H7-protein+is+required+for+the+organization+of+the+viral+scaffold+protein+into+hexamers%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Vaccinia virus H7-protein is required for the organization of the viral scaffold protein into hexamers.</a> Sci Rep. 12 (1), 13007(2022).</li>
<li>Villinger, C., Gregorius, H., Kranz, C., Hoehn, K., Münzberg, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FIB%2FSEM+tomography+with+TEM-like+resolution+for+3D+imaging+of+high-pressure+frozen+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Histochem+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">FIB/SEM tomography with TEM-like resolution for 3D imaging of high-pressure frozen cells.</a> Histochem Cell Biol. 138 (4), 549-556 (2012).</li>
<li>Hackstadt, T., Chiramel, A. I., Hoyt, F. H., Williamson, B. N., Dooley, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disruption+of+the+Golgi+apparatus+and+contribution+of+the+endoplasmic+reticulum+to+the+SARS-CoV-2+replication+complex%5BTitle%5D)+AND+%22Viruses%22%5BJournal%5D)">Disruption of the Golgi apparatus and contribution of the endoplasmic reticulum to the SARS-CoV-2 replication complex.</a> Viruses. 13 (9), 1798(2021).</li>
<li>Horstmann, H., Körber, C., Sätzler, K., Aydin, D., Kuner, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serial+section+scanning+electron+microscopy+%28S3EM%29+on+silicon+wafers+for+ultra-structural+volume+imaging+of+cells+and+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Serial section scanning electron microscopy (S3EM) on silicon wafers for ultra-structural volume imaging of cells and tissues.</a> PLoS ONE. 7 (4), e35172(2012).</li>
<li>Lewczuk, B., Szyryńska, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Field-emission+scanning+electron+microscope+as+a+tool+for+large-area+and+large-volume+ultrastructural+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Animals%22%5BJournal%5D)">Field-emission scanning electron microscope as a tool for large-area and large-volume ultrastructural studies.</a> Animals. 11 (12), 3390(2021).</li>
<li>Höög, J. L., Schwartz, C., Noon, A. T., O'Toole, E. T., Mastronarde, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organization+of+interphase+microtubules+in+fission+yeast+analyzed+by+electron+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Cell%22%5BJournal%5D)">Organization of interphase microtubules in fission yeast analyzed by electron tomography.</a> Dev Cell. 12 (3), 349-361 (2007).</li>
<li>Jiang, Y., Lin, H., Fu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((3D+mitochondrial+ultrastructure+of+Drosophila+indirect+flight+muscle+revealed+by+serial-section+electron+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">3D mitochondrial ultrastructure of Drosophila indirect flight muscle revealed by serial-section electron tomography.</a> J Vis Exp. (130), e56567(2017).</li>
<li>Snijder, E. J., Limpens, R. W. A. L., de Wilde, A. H., de Jong, A. W. M., Zevenhoven-Dobbe, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+unifying+structural+and+functional+model+of+the+coronavirus+replication+organelle%3A+tracking+down+RNA+synthesis%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+Biol%22%5BJournal%5D)">A unifying structural and functional model of the coronavirus replication organelle: tracking down RNA synthesis.</a> PloS Biol. 18 (6), e3000715(2020).</li>
<li>Welsch, S., Miller, S., Romero-Brey, I., Merz, A., Bleck, C. K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Composition+and+three-dimensional+architecture+of+the+dengue+virus+replication+and+assembly+sites%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Host+Microbe%22%5BJournal%5D)">Composition and three-dimensional architecture of the dengue virus replication and assembly sites.</a> Cell Host Microbe. 5 (4), 365-375 (2009).</li>
<li>Cortese, M., Goellner, S., Acosta, E. G., Neufeldt, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrastructural+characterization+of+Zika+virus+replication+factories%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Ultrastructural characterization of Zika virus replication factories.</a> Cell Rep. 18 (9), 2113-2123 (2017).</li>
<li>Milrot, E., Lazar, S., Schuster, O., Makdasi, E., Schmaya, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insights+from+the+infection+cycle+of+VSV-%CE%94G-spike+virus%5BTitle%5D)+AND+%22Viruses%22%5BJournal%5D)">Insights from the infection cycle of VSV-ΔG-spike virus.</a> Viruses. 14 (12), 2828(2022).</li>
<li>Schauflinger, M., Bergner, T., Neusser, G., Kranz, C., Read, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potassium+permanganate+is+an+excellent+alternative+to+osmium+tetroxide+in+freeze-substitution%5BTitle%5D)+AND+%22Histochem+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Potassium permanganate is an excellent alternative to osmium tetroxide in freeze-substitution.</a> Histochem Cell Biol. 157 (4), 481-489 (2022).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1-Hexadécène</td><td>Merck KGaA</td><td>8220640500</td><td></td></tr><tr><td>Grille de 200 en cuivre avec barres parallèles</td><td>Plano GmbH</td><td>G2014C</td><td></td></tr><tr><td>37 & deg ; Chambre de séchage en C</td><td>Binder GmbH</td><td>9010-0323</td><td></td></tr><tr><td>Acétone</td><td>VWR international GmbH</td><td>20066330</td><td></td></tr><tr><td>DDSA</td><td>Sciences de la microscopie électronique</td><td>13710</td><td></td></tr><tr><td>Couteau en diamant</td><td>Diatome Ltd</td><td>https://www.diatomeknives.com/ultra-35</td><td></td></tr><tr><td>DMP-30</td><td>Sciences de la microscopie électronique</td><td>13600</td><td></td></tr><tr><td>Résine Embed-812</td><td>Sciences de la microscopie électronique</td><td>14900</td><td></td></tr><tr><td>Outils EM</td><td>TVIPS GmbH</td><td>Logiciels TVIPS : EM-Tools ; https://www.tvips.com/imaging-software/em-tools/</td><td></td></tr><tr><td>Éthanol à 100 %</td><td>Merck KGaA</td><td>1.00983.2511</td><td></td></tr><tr><td>Papier filtre</td><td>VWR international GmbH</td><td>516-0812</td><td></td></tr><tr><td>Flaschen mit Schnappdeckelglas 11 mL</td><td>VWR international GmbH</td><td>548-0625</td><td></td></tr><tr><td>Formvar</td><td>Sciences de la microscopie électronique</td><td>15830-25</td><td></td></tr><tr><td>Unité de substitution par gel Leica EM AFS2</td><td>Leica Microsystems GmbH</td><td>https://www.leica-microsystems.com/products/sample-preparation-for-electron-microscopy/p/leica-em-afs2/</td><td></td></tr><tr><td>Glod Sol 25 nm</td><td>Réactifs et réactifs d’or AURION Immuno Accessoires</td><td>425.011</td><td></td></tr><tr><td>Bois de pin doré et oslash ; 2000 & MU m</td><td>Science Services GmbH</td><td>GA2000-Au</td><td></td></tr><tr><td>Graiticules Buchstaben-Netzchen Kupfer</td><td>Plano GmbH</td><td>NH6C</td><td></td></tr><tr><td>Plaque chauffante</td><td>MEDAX GmbH & Comté KG</td><td>12501</td><td></td></tr><tr><td>Système de vaporisation à haut vide BAF 300</td><td>BAL-TEC AG</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Congélateur haute pression Wohlwend HPF Compact 01</td><td>Bureau d’ingénierie M. Wohlwend GmbH</td><td>https://www.wohlwend-hpf.ch/index.html</td><td></td></tr><tr><td>Réservoir d’azote liquide</td><td>H.Erben GmbH</td><td>94500</td><td></td></tr><tr><td>Azote (liquide)</td><td>VWR international GmbH</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>NMA</td><td>Sciences de la microscopie électronique</td><td>19000</td><td></td></tr><tr><td>Tétraoxyde d’osmium</td><td>ChemPur Feinchemikalien und Forschungsbedarf GmbH</td><td>006051</td><td></td></tr><tr><td>Four à 120 °F ; C</td><td>Binder GmbH</td><td>9010-0194</td><td></td></tr><tr><td>PELCO easi-Glow</td><td>Ted Pella, Inc.</td><td>91000</td><td></td></tr><tr><td>Poly-L-Lysine 0,1 % en valeur égale. Solution</td><td>Ted Pella, Inc.</td><td>18026</td><td></td></tr><tr><td>Tubes à verrouillage de coffre-fort 0,5 mL</td><td>Eppendorf SE</td><td>0030 121.023</td><td></td></tr><tr><td>Contenants d’échantillons (capsules Beem)</td><td>Plano GmbH</td><td>G360-1</td><td></td></tr><tr><td>Disque en saphir dia. 3 x 0,16 mm</td><td>Bureau d’ingénierie M. Wohlwend GmbH</td><td>500</td><td></td></tr><tr><td>Ultramicrotome Leica EM UC7</td><td>Leica Microsystems GmbH</td><td>https://www.leica-microsystems.com/de/produkte/em-probenvorbereitung/p/leica-em-uc7/</td><td></td></tr><tr><td>Acétate d’uranyle</td><td>Riedel de Ha&euml ; n AG</td><td>31697</td><td></td></tr><tr><td>Chambre à lumière UV</td><td>Dinies</td><td>ELG100S</td><td></td></tr></tbody></table>

tomographie par microscopie électronique à transmission à balayage en virologie : imagerie 3d d’échantillons congelés à haute pression et substitués par congélation

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Electron microscopy (EM) and especially three-dimensional (3D) EM techniques have become established methods in structural virology. Investigation of ...

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Le protocole décrit une approche à haut débit pour déterminer les structures des protéines membranaires par cryo-tomographie électronique et traitement d'images 3D. Il couvre les détails de la préparation des échantillons, collecte, traitement et interprétation des données, et se termine par la production d'une cible représentant de l'approche, le VIH-1 glycoprotéine d'enveloppe. Ces procédures de calcul sont conçues d'une façon qui permet aux chercheurs et aux étudiants de travailler à...

Détermination des structures moléculaires des glycoprotéines d&#39;enveloppe du VIH en utilisant microscopie cryo-électronique et automatisée Sous-tomogramme moyenne

Nous décrivons une méthode de microscopie corrélative qui combine la microscopie à haute vitesse 3D de cellules vivantes fluorescent lumière et de haute résolution tomographie cryo-électronique. Nous démontrons la capacité de la méthode corrélative par imagerie dynamique, les petites VIH-1 particules en interaction avec des cellules HeLa d'accueil.

Microscopie corrélative pour l&#39;analyse structurale 3D des interactions dynamiques

Nous présentons un protocole sur la façon de recueillir et électronique de processus cryo-tomographie de mitochondries entières. La technique donne un aperçu détaillé de la structure, la fonction et l'organisation de grands complexes de protéines membranaires en membranes biologiques indigènes.

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Préparation d’échantillons pour la microscopie à force atomique à virion unique et l’imagerie par fluorescence à super-résolution

Ce rapport décrit un protocole de préparation d’échantillons et des conditions d’imagerie spécifiques pour effectuer la tomographie électronique à transmission à balayage d’échantillons biologiques épais.

Préparation et observation d&#39;échantillons biologiques épais par tomographie électronique à transmission à balayage

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Ici, un protocole décrivant les étapes de préparation des échantillons et de collecte de données requises en cryomodensitométrie à rayons X mous (SXT) pour imager l’ultrastructure de cellules entières cryo-préservées à une résolution de 25 nm demi-pas, est présenté.

Une description cartographique 3D de la cellule par cryo tomographie par rayons X mous

Nous présentons un protocole pour la préparation de lamelles d’échantillons biologiques congelés par micro-usinage par faisceau d’ions cryo-focalisé pour des études structurelles à haute résolution de macromolécules in situ avec cryo-tomographie électronique. Le protocole présenté fournit des lignes directrices pour la préparation de lamelles de haute qualité avec une reproductibilité élevée pour la caractérisation structurelle des macromolécules à l’intérieur des Saccharomyces cerevisiae.

Préparation et micro-usinage Cryo-FIB de Saccharomyces cerevisiae pour la cryo-tomographie électronique

Ici, des protocoles sont décrits pour préparer des assemblages de virus adaptés à l’analyse liquide-EM et cryo-EM à l’échelle nanométrique en utilisant la microscopie électronique à transmission.

Faire progresser l’imagerie haute résolution des assemblages de virus dans le liquide et la glace

La tomographie cryo-STEM permet de visualiser les organites de cellules intactes sans enrobage, sectionnement ou autres préparations invasives. La résolution 3D obtenue est actuellement de l’ordre de quelques nanomètres, avec un champ de vision de plusieurs micromètres et une épaisseur accessible de l’ordre de 1 μm.

Visualisation d’organites in situ par tomographie cryo-STEM

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Tomographie par microscopie électronique à transmission à balayage en virologie : imagerie 3D d’échantillons congelés à haute pression et substitués par congélation

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