Name: Amplification et reconnaissance de microARN par hybridation in situ d’acides nucléiques verrouillés en tant que nouvelle méthode de détection et de quantification (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-10-07T12:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 6 s
Description: Découvrez une méthode d'hybridation in situ pour détecter et quantifier simultanément les microARN et les protéines dans les tissus FFPE. Cette approche préserve l'intégrité tissulaire tout en permettant l'observation spatiale des interactions moléculaires dans le microenvironnement tumoral.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Smolarz, B., Nowak, A. Z., Romanowicz, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Breast+cancer-epidemiology%2C+classification%2C+pathogenesis+and+treatment+%28review+of+literature%29%5BTitle%5D)+AND+%22Cancers%22%5BJournal%5D)">Breast cancer-epidemiology, classification, pathogenesis and treatment (review of literature).</a> Cancers. 14 (10), 2569(2022).</li>
<li>Davis-Dusenbery, B. N., Hata, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microrna+in+cancer%3A+The+involvement+of+aberrant+microrna+biogenesis+regulatory+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Cancer%22%5BJournal%5D)">Microrna in cancer: The involvement of aberrant microrna biogenesis regulatory pathways.</a> Genes Cancer. 1 (11), 1100-1114 (2010).</li>
<li>Peng, Y., Croce, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+microRNAs+in+human+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Signal+Transduct+Targeted+Ther%22%5BJournal%5D)">The role of microRNAs in human cancer.</a> Signal Transduct Targeted Ther. 1 (1), 15004(2016).</li>
<li>Shi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mirnas+and+cancer%3A+Key+link+in+diagnosis+and+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Genes%22%5BJournal%5D)">Mirnas and cancer: Key link in diagnosis and therapy.</a> Genes. 12 (8), 1289(2021).</li>
<li>Juźwik, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MicroRNA+dysregulation+in+neurodegenerative+diseases%3A+A+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">MicroRNA dysregulation in neurodegenerative diseases: A systematic review.</a> Prog Neurobiol. 182, 101664(2019).</li>
<li>Pauley, K. M., Cha, S., Chan, E. K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microrna+in+autoimmunity+and+autoimmune+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22J+Autoimmun%22%5BJournal%5D)">Microrna in autoimmunity and autoimmune diseases.</a> J Autoimmun. 32 (3-4), 189-194 (2009).</li>
<li>Lee, Y. S., Dutta, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Micrornas+in+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Rev+Pathol+Mech+Dis%22%5BJournal%5D)">Micrornas in cancer.</a> Ann Rev Pathol Mech Dis. 4 (1), 199-227 (2009).</li>
<li>Thomson, D. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+the+gene+regulatory+properties+of+argonaute-bound+small+rnas+of+diverse+genomic+origin%5BTitle%5D)+AND+%22Nuc+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">Assessing the gene regulatory properties of argonaute-bound small rnas of diverse genomic origin.</a> Nuc Acids Res. 43 (1), 470-481 (2015).</li>
<li>Kim, Y. K., Han, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nobel-winning+microRNA%2C+the+microRNAestro+of+gene+silencing%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cells%22%5BJournal%5D)">Nobel-winning microRNA, the microRNAestro of gene silencing.</a> Mol Cells. 47 (11), 100123(2024).</li>
<li>Lai, X., Eberhardt, M., Schmitz, U., Vera, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systems+biology-based+investigation+of+cooperating+microRNAs+as+monotherapy+or+adjuvant+therapy+in+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nuc+Acid+Res%22%5BJournal%5D)">Systems biology-based investigation of cooperating microRNAs as monotherapy or adjuvant therapy in cancer.</a> Nuc Acid Res. 47 (15), 7753-7766 (2019).</li>
<li>Garzon, R., Marcucci, G., Croce, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+micrornas+in+cancer%3A+Rationale%2C+strategies+and+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Drug+Disc%22%5BJournal%5D)">Targeting micrornas in cancer: Rationale, strategies and challenges.</a> Nat Rev Drug Disc. 9 (10), 775-789 (2010).</li>
<li>Jiao, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MicroRNA%3A+The+impact+on+cancer+stemness+and+therapeutic+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">MicroRNA: The impact on cancer stemness and therapeutic resistance.</a> Cells. 9 (1), 8(2019).</li>
<li>Lin, B., Jiang, J., Jia, J., Zhou, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advances+in+exosomal+miRNA+biosensing+for+liquid+biopsy%5BTitle%5D)+AND+%22Molecules%22%5BJournal%5D)">Recent advances in exosomal miRNA biosensing for liquid biopsy.</a> Molecules. 27 (21), 7145(2022).</li>
<li>Farrell, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+identification+of+circulating+miRNAs+in+bovine+serum+and+their+potential+as+novel+biomarkers+of+early+Mycobacterium+avium+subsp.+paratuberculosis+infection%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">The identification of circulating miRNAs in bovine serum and their potential as novel biomarkers of early Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis infection.</a> PLoS One. 10 (7), e0134310(2015).</li>
<li>Aparicio-Puerta, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Srnabench+and+srnatoolbox+2022+update%3A+Accurate+mirna+and+sncrna+profiling+for+model+and+non-model+organisms%5BTitle%5D)+AND+%22Nuc+Acid+Res%22%5BJournal%5D)">Srnabench and srnatoolbox 2022 update: Accurate mirna and sncrna profiling for model and non-model organisms.</a> Nuc Acid Res. 50 (W1), W710-W717 (2022).</li>
<li>Friedländer, M. R., Mackowiak, S. D., Li, N., Chen, W., Rajewsky, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mirdeep2+accurately+identifies+known+and+hundreds+of+novel+microRNA+genes+in+seven+animal+clades%5BTitle%5D)+AND+%22Nuc+Acid+Res%22%5BJournal%5D)">Mirdeep2 accurately identifies known and hundreds of novel microRNA genes in seven animal clades.</a> Nuc Acid Res. 40 (1), 37-52 (2012).</li>
<li>Chou, C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mirtarbase+2016%3A+Updates+to+the+experimentally+validated+miRNA-target+interactions+database%5BTitle%5D)+AND+%22Nuc+Acid+Res%22%5BJournal%5D)">Mirtarbase 2016: Updates to the experimentally validated miRNA-target interactions database.</a> Nuc Acid Res. 44 (D1), D239-D247 (2016).</li>
<li>Porichis, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-throughput+detection+of+miRNAs+and+gene-specific+mRNA+at+the+single-cell+level+by+flow+cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">High-throughput detection of miRNAs and gene-specific mRNA at the single-cell level by flow cytometry.</a> Nat Commun. 5 (1), 5641(2014).</li>
<li>Eichert, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+crystal+structure+of+an+%27all+locked%27+nucleic+acid+duplex%5BTitle%5D)+AND+%22Nuc+Acid+Res%22%5BJournal%5D)">The crystal structure of an 'all locked' nucleic acid duplex.</a> Nuc Acid Res. 38 (19), 6729-6736 (2010).</li>
<li>Viratham Pulsawatdi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+robust+multiplex+immunofluorescence+and+digital+pathology+workflow+for+the+characterisation+of+the+tumour+immune+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Oncol%22%5BJournal%5D)">A robust multiplex immunofluorescence and digital pathology workflow for the characterisation of the tumour immune microenvironment.</a> Mol Oncol. 14 (10), 2384-2402 (2020).</li>
<li>Janati-Idrissi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Looking+for+a+needle+in+a+haystack%3A+De+novo+phenotypic+target+identification+reveals+hippo+pathway-mediated+mir-202+regulation+of+egg+production%5BTitle%5D)+AND+%22Nuc+Acid+Res%22%5BJournal%5D)">Looking for a needle in a haystack: De novo phenotypic target identification reveals hippo pathway-mediated mir-202 regulation of egg production.</a> Nuc Acid Res. 52 (2), 738-754 (2024).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>10x solution saline tamponnée TRIS (TBS) pH 7,6&nbsp ;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>&nbsp ; J62662&nbsp ; K7</td><td>Pour les lavages intermittents entre les étapes</td></tr><tr><td>1x diluant/blocage d’anticorps opale & nbsp ;</td><td>Akoya Biosciences</td><td>ARD1001EA</td><td>Solution bloquant les protéines</td></tr><tr><td>Diluant d’amplification d’automatisation 1x Plus</td><td>Akoya Biosciences & nbsp ;</td><td>FP1609</td><td>Utilisé pour diluer les fluorophores d’opale</td></tr><tr><td>20x Concentré&nbsp ; Tampon de citrate de sodium salé (SSC)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S6639-1L</td><td>Pour les lavages de miARN après hybridation par sonde</td></tr><tr><td>4',6-diamidino-2-phénylindole (DAPI)&nbsp ;</td><td>Thermo Fisher Scientific/Invitrogen</td><td>EN62248 / 62248</td><td>Pour la coloration nucléaire</td></tr><tr><td>Système d’hybridation ACD HybEZ II</td><td>ACD Biotechne</td><td>321711</td><td>Four utilisé pour réguler la température pendant le protocole miRNAscope</td></tr><tr><td>Anti-CD8 (D8A8Y), Rabbit mAb</td><td>Technologies de signalisation cellulaire</td><td>85336S</td><td>Exemple d’anticorps primaire utilisé pour optimiser ce protocole</td></tr><tr><td>Anti-digoxigénine (souris) conjugué HRP</td><td>Revvity Health Sciences Inc</td><td>NEF832001EA</td><td>Réactif secondaire utilisé pour la détection des miARN</td></tr><tr><td>Anti-EpCAM (E6V8Y), Rabbit mAb</td><td>Technologies de signalisation cellulaire</td><td>93790</td><td>Exemple d’anticorps primaire utilisé pour optimiser ce protocole</td></tr><tr><td>Poudre de réactif de blocage</td><td>Akoya Biosciences & nbsp ;</td><td>FP1012</td><td>Solution bloquante des miARN</td></tr><tr><td>Alcool éthylique 100 % (200 degrés)</td><td>Pharmco</td><td>111000200</td><td>Pour la déparaffinisation</td></tr><tr><td>Tampon EZ-AR1</td><td>BioGeneX</td><td>HK521-XAK</td><td>Utilisé pour la récupération d’antigènes de sections de tissu FFPE à l’étape protéique</td></tr><tr><td>Tampon d’élégance EZ-AR1</td><td>BioGeneX</td><td>HK546-XAK</td><td>Utilisé pour la récupération antigénique de sections de tissu FFPE à l’étape de la sonde du miARN</td></tr><tr><td>Système IR EZ-Retriever</td><td>BioGeneX</td><td>MW015-IR</td><td>Micro-ondes utilisé pour la récupération antigénique de sections de tissu FFPE</td></tr><tr><td>Solution de peroxyde d’hydrogène 30 % & nbsp ;</td><td>Sigma-Aldrich & nbsp ;</td><td>HX0640-5&nbsp ;</td><td>Pour la préparation des tissus. Aide à bloquer l’activité endogène de la peroxydase et à produire des produits très colorés</td></tr><tr><td>sonde miARN miR-181c-3p</td><td>Qiagen</td><td>339112</td><td>Exemple de sonde miARN utilisée pour optimiser ce protocole</td></tr><tr><td>Ensemble tampon miRCURY LNA miARN ISH (FFPE)</td><td>Qiagen</td><td>339450&nbsp ;</td><td>Utilisé pour diluer la sonde de miARN</td></tr><tr><td>Opal 620</td><td>Akoya Biosciences & nbsp ;</td><td>FP1495001KT</td><td>Fluorophore pour identifier l’anticorps primaire</td></tr><tr><td>Opal 690&nbsp ;</td><td>Akoya Biosciences & nbsp ;</td><td>FP1497001KT</td><td>Fluorophore pour identifier l’anticorps primaire</td></tr><tr><td>Opal Anti-Ms + Rb HRP</td><td>Akoya Biosciences</td><td>ARH1001EA</td><td>Anticorps secondaire utilisé comme agent de détection</td></tr><tr><td>Pierce 16 % de formaldéhyde (v/v), sans méthanol</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>28908</td><td>Produire 3,7 % de PFA pour la préparation tissulaire</td></tr><tr><td>Antifondu en diamant ProLong</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>P36970</td><td>Supports de montage</td></tr><tr><td>ARNscope Protéase Plus</td><td>ACD Biotechne</td><td>322331</td><td>Perméabiliser les coupes tissulaires & nbsp ; en digérant partiellement les protéines et en digérant exposer les molécules de miARN cibles</td></tr><tr><td>Eau sans ARN & nbsp ;</td><td>Corning&nbsp ;</td><td>46-000-CM&nbsp ;</td><td>Nettoyer et préparer tout le matériel, et à utiliser comme diluant si nécessaire... &nbsp ;</td></tr><tr><td>Préadolescent 20</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P1379-25ML</td><td>Pour créer TBS-T</td></tr><tr><td>Amplification du signal tyramide plus cyanine 3</td><td>Akoya Biosciences & nbsp ;</td><td>NEL744001KT</td><td>Fluorophore pour identifier les miARN</td></tr><tr><td>Sondes U6 et MiARN brouillées</td><td>Qiagen</td><td>339459</td><td>Sondes de contrôle optionnelles</td></tr><tr><td>Grade histologique des xylènes</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>UN1307</td><td>Pour la déparaffinisation</td></tr></tbody></table>

amplification et reconnaissance de microarn par hybridation in situ d’acides nucléiques verrouillés en tant que nouvelle méthode de détection et de quantification

MicroRNA Amplification and Recognition through Locked-nucleic-acid In situ Hybridization as a Novel Detection and Quantification Method

Amplification et reconnaissance de microARN par hybridation in situ d’acides nucléiques verrouillés en tant que nouvelle méthode de détection et de quantification

When using traditional probe-based in situ hybridization (ISH) imaging detection methods, microRNAs (miRNAs) are difficult to capture due to their size, ...

microrna-amplification-recognition-through-locked-nucleic-acid-situ

Research

Recherche

JoVE Journal

Cancer Research

Recherche sur le cancer

Nous décrivons ici une inversion optimisé multiplexe transcriptase PCR quantitative (qRT-PCR) en combinaison avec le protocole d'une plateforme microfluidique comme un coût et le temps moyen efficace de dépistage à haut débit pour microARN (miARN) les niveaux d'expression, surtout quand on travaille avec des quantités limitées de l'échantillon.

Haute profilage de microARN Débit: Multiplex Optimisé qRT-PCR à l&#39;échelle nanolitres sur l&#39;IFC de Fluidigm ArrayTM dynamique

Un roman à haut débit méthode est décrite qui permet la détection et la quantification relative de petit ARN et d'expression d'ARNm à partir des cellules bactériennes simples en utilisant des sondes d'acides nucléiques verrouillés et cytométrie en flux par...

Verrouillé flux Nucleic Acid cytométrie de fluorescence In situ</emHybridation> (LNA flux FISH): une méthode d&#39;bactérienne détection de l&#39;ARN petits

Cette vidéo décrit une stratégie d’hybridation séquentielle qui consiste à hybrider des sondes d’ARNm avec des ARNm cibles spécifiques. Après l’hybridation de la sonde, l’amplification du signal est effectuée pour améliorer la résolution via la réduction du rapport signal/bruit pendant l’ARN-CISH des échantillons histologiques.

Hybridation de sonde et amplification de signal dans l’hybridation in situ de l’ARN : une technique de détection de séquences d’ARN spécifiques dans des coupes de tissus

Le but de cette publication est de visualiser et de discuter des étapes opérationnelles d'un protocole Northern Blot améliorée sur l'ARN extrait de Drosophila melanogaster embryons, des cellules et des tissus. Ce protocole est particulièrement utile pour la détection efficace de petites espèces d'ARN.

Amélioration de la détection du Nord Blot des petits ARN espèces en Drosophila melanogaster

Les microARN (miARN) sont une classe de molécules régulatrices largement conservée. Nous décrivons ici une méthode de clonage de miARN qui repose sur deux étapes de ligature puissantes suivies d’un séquençage à haut débit. Notre méthode permet une quantification précise des miARN à l’échelle du génome.

La ligature très efficace de petites molécules d&#39;ARN pour microARN quantification par séquençage à haut débit

MicroARN qui circulent ont récemment émergé comme biomarqueurs prometteurs et novateurs en vue de divers cancers et d'autres maladies. Le but de cet article est de discuter de trois plateformes de PCR différents basés sonde en temps réel et les méthodes qui sont disponibles pour quantifier et déterminer l'abondance des microARN circulation.

PCR en temps réel basée sur une sonde Approches de mesure quantitative des microARN

Ici, nous présentons un protocole pour détecter l’expression de miARN dans des échantillons de patientes atteintes d’un cancer du sein en utilisant l’hybridation in situ de miARN.

Analyse clinicopathologique de miRNA expression dans le cancer du sein à l&#39;aide de tissus miRNA<em&gt; In Situ</em&gt; hybridation

Ce rapport décrit une méthode rapide et fiable pour la validation de cibles ARNm des miARN cellulaire. La méthode utilise biotinylé synthétique basé sur Locked Nucleic Acid LNA miRNA imite pour capturer les cibles ARNm. Par la suite, streptavidine des billes magnétiques travaillent à menu déroulant la cible ADN messagère pour la quantification par qPCR polymerase chain reaction.

Axée sur la biotine Pulldown dosage à Validate ARNm cibles cellulaires miARN

Pour compter reproductible les numéros des ARNm dans les ovocytes, in situ en fluorescence seule molécule RNA hybridation (RNA-poisson) a été optimisée pour les cellules non adhérentes. Ovocytes ont été recueillis, hybridaient avec des sondes spécifiques de transcription et quantifiées à l’aide d’un logiciel de quantification d’image.

Utilisation d’unique molécule fluorescente hybridation In Situ (FISH-SM) afin de quantifier et Localize ARNm dans les ovocytes murin

Cette méthode démontre l’utilisation de la technique d’hybridation nordique pour détecter les miARN à partir de l’extrait total d’ARN.

Analyse des taches d’ARN pour la détection et la quantification des microARN végétaux

Les nanomachines basées sur DNAzyme peuvent être utilisées pour la détection hautement sélective et sensible des acides nucléiques. Cet article décrit un protocole détaillé pour la conception de nanomachines basées sur DNAzyme avec un cœur de 10 à 23 à l’aide de logiciels libres et leur application dans la détection d’un fragment de virus d’Epstein-Barr à titre d’exemple.

Nanomachines à base de DNAzyme 10-23 pour la reconnaissance des acides nucléiques

Découvrez une méthode d'hybridation in situ pour détecter et quantifier simultanément les microARN et les protéines dans les tissus FFPE. Cette approche préserve l'intégrité tissulaire tout en permettant l'observation spatiale des interactions moléculaires dans le microenvironnement tumoral.

Amplification et reconnaissance de microARN par hybridation in situ d’acides nucléiques verrouillés en tant que nouvelle méthode de détection et de quantification (Vidéo) | JoVE Journal

Amplification et reconnaissance de microARN par hybridation in situ d’acides nucléiques verrouillés en tant que nouvelle méthode de détection et de quantification

Explorer plus de vidéos