Lymphadenectomie rénale bilatérale murine

Nous étudions le trafic des cellules immunitaires du ganglion lymphatique rénal vers le rein et de l’antigène rénal vers le ganglion lymphatique drainant. Notre approche chirurgicale offre l’avantage unique de pouvoir perturber sélectivement les ganglions lymphatiques rénaux tout en laissant tous les autres ganglions intacts dans un modèle de survie à long terme bien toléré. Maintenant que ce modèle a été développé, nous pouvons explorer les contributions des réponses des ganglions lymphatiques rénaux et immunitaires, ainsi que la manière dont l’ablation de ces ganglions contribue à une lésion rénale liée au système immunitaire.

Pour commencer, placez l’animal anesthésié sur la table d’opération et appliquez une pommade. Utilisez du ruban adhésif pour fixer le bras gauche de l’animal dans une direction supérieure et la queue dans une direction inférieure afin de créer une posture détendue mais allongée. Rase le pelage et désinfecte la zone chirurgicale trois fois.

Après avoir confirmé la profondeur de l’anesthésie à l’aide d’une pincée d’orteil, effectuer une incision oblique d’un centimètre à travers la peau juste sous la rate, soit environ un centimètre en dessous de la dernière côte. À l’aide d’une dissection contondante, séparez la peau de la paroi abdominale et thoracique et identifiez la rate à l’intérieur de l’abdomen. Ensuite, effectuer une incision d’un centimètre à travers la musculature de la paroi abdominale, juste en dessous de la rate, pour pénétrer dans la cavité péritonéale.

Identifiez le rein gauche comme un organe lisse situé le long de la paroi abdominale postérieure, juste sous la rate. À l’aide de deux pinces angulaires, disséquez de manière directe derrière le rein gauche pour accéder au rétropéritoine et réfléchissez doucement le rein gauche dans une direction antéromédiane. Localisez le coussinet de tissu adipeux entourant le ganglion lymphatique rénal gauche, qui se trouve derrière le rein et au-dessus des vaisseaux rénaux.

Identifier et éviter la glande surrénale située en haut, l’aorte en arrière, et la cisterne chyli par voie antéromédiane. À l’aide de pinces à pointe fine, disséquez brusquement autour de la capsule ganglionnaire pour la séparer des vaisseaux adjacents tout en assurant une contre-tension douce avec des pinces inclinées. Utilisez des pinces droites à extrémité fine pour rétracter le ganglion lymphatique en haut.

Ensuite, utilisez des ciseaux à pointe fine pour découper nettement les attaches postéromédianes. Examinez la zone pour confirmer l’hémostasie. Ensuite, remettez le rein dans sa position anatomique normale.

Fermez la paroi abdominale puis la peau avec une suture en polypropylène monofilament 6-0 en point de couture courante. Appliquez de la colle chirurgicale stérile pour sceller la plaie. En option, pour une meilleure identification des ganglions lymphatiques rénaux, injectez 10 à 20 microlitres de colorant bleu Evans stérile filtré à 5 % dans PBS dans les deux coussinets postérieurs avant la lymphadénectomie rénale.

Dans les cinq minutes suivant l’injection, le contraste atteint les ganglions lymphatiques rénaux via le drainage le long du tractus lymphatique iliaque. Repositionnez l’animal en position décubitus latérale gauche, le côté gauche tourné vers le bas. Utilisez du ruban adhésif pour fixer le bras droit de l’animal dans une direction supérieure et la queue dans une direction inférieure afin de maintenir une posture détendue mais allongée.

Maintenant, faites une incision cutanée oblique d’un centimètre juste sous la dernière côte, qui sera positionnée légèrement plus haut que du côté gauche. À l’aide d’une dissection contondante, séparez la peau de la paroi abdominale et thoracique. Ensuite, réalisez une incision d’un centimètre à travers la musculature de la paroi abdominale pour accéder à la cavité péritonéale.

Identifiez le rein droit, un organe lisse situé le long de la paroi abdominale postérieure et juste sous le foie. À l’aide de deux pinces angulaires, disséquez de manière directe derrière le rein droit pour accéder à l’espace rétropéritonéal et réfléchir le rein droit dans une direction antéromédiane. Identifiez le coussinet adipeux entourant le ganglion lymphatique rénal droit, situé derrière le rein et au-dessus des vaisseaux rénaux.

Identifiez et évitez la glande surrénalienne située au-dessus du ganglion lymphatique. Maintenant, à l’aide de pinces à pointe fine, disséquez de manière directe autour de la capsule du ganglion pour la séparer des vaisseaux voisins tout en appliquant une contretraction douce avec des pinces inclinées. Ensuite, avec une pince droite à pointe fine, tirez les ganglions vers le haut et coupez brusquement les attaches postéromédiales avec des ciseaux à pointe fine.

Inspectez la zone pour vérifier l’hémostasie. Enfin, remettez le rein droit dans sa position anatomique. Fermez la paroi abdominale et la peau en deux couches à l’aide d’une suture en polypropylène monofilament 6-0 selon un motif de course et appliquez une colle chirurgicale stérile sur le site de l’incision.

La cytométrie en flux a confirmé l’extraction réussie des ganglions lymphatiques dans les cinq échantillons de lymphadenectomie rénale gauche et cinq échantillons droits, chacun montrant plus de 50 % de cellules vivantes positives au CD45, contre moins de 2 % dans les témoins viscéraux adipos. La quantification des cellules CD45 positives a montré une différence très significative entre les échantillons de lymphadénectomie rénale gauche et droite comparés au tissu viscéral adipeux, sans différence significative entre les côtés gauche et droit.