Évaluation de l’athérosclérose dans l’aorte de souris injectées par AAV8-PCSK9 par coloration au rouge d’huile O

Résumé

Ce protocole décrit une méthode étape par étape pour disséquer, perfuser, colorer, imager et quantifier les lésions athéroscléreuses en face dans les aortes de souris à l’aide de la coloration Oil Red O.

Résumé

Les modèles murins sont depuis longtemps des outils fondamentaux dans l’étude de l’athérosclérose, fournissant des informations essentielles sur les mécanismes moléculaires et cellulaires sous-jacents à la formation de la plaque, au métabolisme des lipides et à l’inflammation cardiovasculaire. Au-delà des souris Apoe^-/- ou Ldlr^-/-, l’injection d’AAV8-PCSK9^D377Y chez des souris normales C57BL/6J avec une alimentation concomitante de type occidental apparaît comme un modèle couramment utilisé pour la recherche translationnelle sur l’athérosclérose. La coloration au rouge d’huile O est une technique fondamentale pour visualiser l’accumulation de lipides neutres dans les tissus vasculaires. Sa simplicité, sa rentabilité et sa grande sensibilité pour détecter les lésions chargées de lipides en font la référence pour l’évaluation de la charge de la plaque d’athérosclérose dans les études précliniques. Dans cette étude, nous fournissons un protocole détaillé et reproductible pour la dissection, la perfusion, l’ouverture longitudinale, la coloration au rouge d’huile, l’imagerie et la quantification semi-automatisée de la charge athéroscléreuse dans l’aorte en face, sans avoir besoin de broches ou d’étapes de montage complexes. Nos résultats démontrent que la combinaison de l’injection d’AAV8-PCSK9^D377Y et de l’alimentation de type occidental induit efficacement la formation de lésions athéroscléreuses significatives chez la souris, et que la coloration en face à l’Oil Red O est une technique fiable et efficace pour évaluer le dépôt de lipides et la charge en plaque. De plus, bien que ce protocole soit optimisé pour le modèle induit par AAV8-PCSK9 chez les souris C57BL/6J, il peut être facilement adapté pour être utilisé dans d’autres modèles et espèces, tels que les souris Apoe^-/- , les souris Ldlr^-/- et les hamsters syriens dorés Ldlr^-/- .

Introduction

L’athérosclérose, caractérisée par le dépôt de lipides et l’inflammation dans l’intima artériel, représente le fondement pathologique de la maladie coronarienne et d’un large éventail de maladies cardiovasculaires (MCV), y compris l’infarctus du myocarde et l’accident vasculaire cérébral 1,2,3,4. Les MCV restent la principale cause de morbidité et de mortalité dans le monde, représentant un lourd fardeau sanitaire et économique à l’échelle mondiale ^3,5

Protocole

Toutes les procédures sur les animaux ont été effectuées conformément aux directives décrites dans le NIH et ont été approuvées par le Comité d’éthique animale de l’Université des sciences et technologies de Chine (Approbation éthique n°. USTCACUC27120124102).

REMARQUE : Toutes les procédures impliquant AAV8-PCSK9 doivent être effectuées dans une enceinte de sécurité biologique certifiée de classe II dans des conditions de niveau de biosécurité 2 (BSL-2). Le personnel doit porter un équipement de protection individuelle (EPI) approprié, y compris une blouse de laboratoire, des gants jetables et des lunettes....

Résultats

Pour évaluer l’étendue du dépôt de lipides dans la paroi aortique, une coloration au rouge d’huile O a été réalisée sur des aortes isolées de souris mâles C57BL/6J injectées avec AAV8-PCSK9^D377Y et nourries avec un régime occidental pendant 12 semaines, avec des souris témoins du même âge. Après une perfusion systémique avec PBS et une dissection soigneuse, l’ensemble de l’aorte a été soigneusement disséqué longitudinalement et coloré avec Oil Red O pour visualiser les lésions athéroscléreuses chargées de lipi.......

Discussion

La méthode de coloration à l’huile rouge O décrite dans cette étude offre une approche robuste, reproductible et rapide pour évaluer la charge des lésions athéroscléreuses dans l’ensemble de l’aorte. Dans cette étude, nous avons spécifiquement sélectionné l’arc aortique et l’aorte thoracique comme régions d’intérêt pour l’analyse de la plaque, plutôt que l’aorte entière. Cette décision a été guidée par la nature du modèle AAV8-PCSK9^{D377Y 20}, qui produit.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
souris C57BL/6J	GemPharmatech  ;	N° N000013
4 % de paraformaldéhyde	Beyotime	P0099	Pour fixer les tissus
AAV8-PCSK9D377Y particules virales  ;	Wzbio	pAV208001	Pour induire l’athérosclérose
Fine Forceps	Fine Science Tools	No. 11254-20	Pour la dissection de l’aorte
ImageJ	NIH	1.47
Isopropanol	Sangon biotech	A600918	Pour nettoyer l’excès d’huile rouge
Oil Red O 0,5 % Solution dans l’isopropanol	Poly Scientific R& D Corp	S1849-32OZ	Pour la coloration au rouge d’huile
O Saline tamponnée	au phosphate Servicebio	G4202	Pour la perfusion et le nettoyage de l’aorte
Ciseaux à ressort	Outils de science fine	n° 15003-08	Pour la dissection de l’aorte
Microscope stéréoscopique	Mshot	MZ62	Pour la dissection et l’imagerie de l’aorte
Régime occidental.	Recherche Régime	alimentaire D12108C	Pour induire l’athérosclérose