Name: Production et utilisation de moules d’agarose personnalisables pour la culture de follicules ovariens de souris sans échafaudage (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-10-24T13:10:00.000+00:00
Duration: 9 min 50 s
Description: Découvrez une méthode de culture de follicules ovariens de souris sans échafaudage utilisant des moules d'agarose personnalisables imprimés en 3D. Cette technique améliore la croissance folliculaire et les taux d'ovulation.

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<table><tbody><tr><td><Résistant>Matériaux et Produits Chimiques</Résistant></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>&nbsp ; Tubes centrifugeuses en polystyrène de 50 mL</td><td>Globe Scientific</td><td>941-11017-CS</td><td></td></tr><tr><td>Tubes microcentrifuges de 1,5 mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>MCT-150</td><td>Pour congeler et stocker des médias</td></tr><tr><td>Antenne 100 mm, non traitée</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-757-100D&nbsp ;</td><td>Pour fabriquer et stocker des micromoules d’agarose</td></tr><tr><td>100 % éthanol</td><td>Mercedes Scientific</td><td>1200</td><td>Traitement tissulaire</td></tr><tr><td>1000 & micro ; L&nbsp ; Pointes de pipette, faible rétention</td><td>MIDSCI</td><td>PR-1000BK</td><td>Conseils culturels &nbsp ;</td></tr><tr><td>200 & micro ; L&nbsp ; Pointes de pipette, faible rétention</td><td>MIDSCI</td><td>PR-200BK</td><td>Conseils culturels &nbsp ;</td></tr><tr><td>Plaque à 24 puits</td><td>Corning</td><td>353047</td><td>Culture</td></tr><tr><td>Antennes de 35 mm</td><td>Faucon</td><td>351008</td><td>Isoler les ovaires et incuber dans des milieux enyzmatiques</td></tr><tr><td>95 % d’éthanol</td><td>Mercedes Scientific</td><td>1210</td><td>Traitement tissulaire</td></tr><tr><td>Agarose</td><td>Hoefer</td><td>GR140</td><td>Micromoules</td></tr><tr><td>Huile minérale BioXtra, huile légère, adaptée à la culture cellulaire d’embryons de souris</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M5310-500ML</td><td>Utilisé comme agent biocompatible de démoulage</td></tr><tr><td>Albumine sérique bovine &nbsp ;</td><td>MP Biomédicals</td><td>103700</td><td>Supports de croissance</td></tr><tr><td>Plumeuse, 10 oz., pack de 6</td><td>Office Depot&nbsp ;</td><td>110284</td><td>Air comprimé</td></tr><tr><td>Résine V4 transparente 1 L</td><td>Formlabs, Inc</td><td>RS-F2-GPCL-04</td><td>Impression 3D de la résine</td></tr><tr><td>Bécher en plastique réutilisable Corning à faible forme de 100 mL, polypropylène, gradué</td><td>Corning</td><td>1000P-100</td><td>Bécher pour mélanger des composants en silicone & nbsp ;</td></tr><tr><td>DNAse I</td><td>Qiagen</td><td>79254</td><td>Médias enzymatiques</td></tr><tr><td>Ecoflex 00-45 Presque dégagé</td><td>Smooth-On, Inc</td><td>B09M8Y9PTV</td><td>Matériau silicone</td></tr><tr><td>F-12 + GlutaMAX</td><td>Gibco</td><td>31765-035</td><td>Supports de croissance</td></tr><tr><td>Fœtine bovine fœtale</td><td>Sigma</td><td>F-3385</td><td>Supports de croissance</td></tr><tr><td>Sérum fœtal bovin (FBS)</td><td>Sérum de pic</td><td>PS-FB2</td><td>Médias de dissection, médias enzymatiques, &nbsp ; Supports de maintenance & Médias de maturation</td></tr><tr><td>Fisherbrand&nbsp ; Sachets de stérilisation</td><td>Fisher Scientific</td><td>01-812-50&nbsp ;</td><td>Sachets de stérilisation</td></tr><tr><td>Hormone folliculostimulante (FSH)</td><td>EMD Serono, Inc.</td><td>Gonal-F Rx seulement&nbsp ;</td><td>Médias de croissance & Médias de maturation</td></tr><tr><td>Gibco & nbsp ; DPBS, calcium, magnésium</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-040-182&nbsp ;</td><td>Le sérum tamponné phosphate de Dulbecco</td></tr><tr><td>Gonadotrophine chorionique humaine (hCG)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>C1063-1VL</td><td>Médias de maturation</td></tr><tr><td>Insuline-transférrine-sélénium (ITS)</td><td>ThermoFisher</td><td>41400045</td><td>Supports de croissance</td></tr><tr><td>Sondes moléculaires Invitrogen Rhodamine Phalloïdine</td><td>Fisher Scientific</td><td>R415</td><td>Tache cytosquelettique d’œuf</td></tr><tr><td>Plats de FIV</td><td>Thermo Scientific</td><td>150260</td><td>Isoler, sélectionner et pré-équilibrer les follicules</td></tr><tr><td>Leibovit’z 15 (L15)</td><td>Gibco</td><td>11415-064</td><td>Dissection Media & Médias enzymatiques</td></tr><tr><td>Libérase</td><td>Sigma Aldrich</td><td>5401119001</td><td>Médias enzymatiques</td></tr><tr><td>MEM ? + GlutaMAX</td><td>Gibco</td><td>32561-037</td><td>Supports de maintenance, &nbsp ; Médias de croissance & Médias de maturation</td></tr><tr><td>Facteur de croissance épidermique de la souris (EGF)</td><td>BD Biosciences</td><td>354010</td><td>Médias de maturation</td></tr><tr><td>Dessiccateur Nalgene Transparent en Polycarbonate Classic Design</td><td>Thermo Scientific</td><td>5311-0250</td><td>Dessiccateur sous vide &nbsp ;</td></tr><tr><td>Paraffine</td><td>Fisher Scientific</td><td>83-30</td><td>Traitement des tissus & Intégration</td></tr><tr><td>Pénicilline-streptomycine</td><td>Gibco</td><td>15140-122</td><td>Médias de dissection, milieux enzymatiques et Supports de maintenance</td></tr><tr><td>Embouts de strip-teaseuse</td><td>Origio</td><td>MXL3-200</td><td>Culture</td></tr><tr><td>Média de montage antifade VECTASHIELD PLUS avec DAPI</td><td>Laboratoires Vector</td><td>H-2000</td><td>Coloration du noyau d’œuf</td></tr><tr><td>Xylène</td><td>Mercedes Scientific</td><td>9840</td><td>Traitement tissulaire</td></tr><tr><td>&alpha ;-Tubuline (11H10) Rabbit mAb (conjugué Alexa Fluor 488)</td><td>Technologie de signalisation cellulaire</td><td>5063S</td><td>Coloration à la tubuline d’œuf</td></tr><tr><td><Fort>Équipement</Solide></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Construire la plateforme 2</td><td>Formlabs, Inc</td><td>BP-F3-02-01&nbsp ;</td><td>Composant imprimante 3D</td></tr><tr><td>Dino-Lite Edge AF4915ZTL, USB 2.0</td><td>Dino-Lite</td><td>AF4915ZTL</td><td>Imageur pour la configuration en accéléré</td></tr><tr><td>Formulaire 3 Réservoir de résine V2.1 & nbsp ;</td><td>Formlabs, Inc</td><td>RT-F3-02-01</td><td>Composant imprimante 3D</td></tr><tr><td>Imprimante 3D Formulaire 3B+</td><td>Formlabs, Inc</td><td>F3B-P-IMPRIMANTE</td><td>Imprimante 3D stéréolithographie (SLA) de Formlabs</td></tr><tr><td>Forme cure &nbsp ;</td><td>Formlabs, Inc</td><td>FH-CU-01</td><td>Plateforme de durcissement &nbsp ;</td></tr><tr><td>Lavage de coffrage</td><td>Formlabs, Inc</td><td>FH-WA-01</td><td>Plateforme de lavage</td></tr><tr><td>Vaporisateur avec vaporisateur à pompe</td><td>VWR</td><td>0309-3005</td><td>Appliquer un agent de démoulage</td></tr><tr><td>Capsule de focuseur/concentrateur de lumière pour la série Edge (à l’exception des modèles T5, T8)</td><td>Dino-Lite</td><td>N3C-R</td><td>Composant d’imagerie pour la configuration en timelapse</td></tr><tr><td>Ensemble de support de montage combinant le rack RK-10 et l’extension de bras RK-10-EX</td><td>Dino-Lite</td><td>RK-10A</td><td>Composant d’imagerie pour la configuration en timelapse</td></tr><tr><td>Incorporateur de tissu</td><td>Leica</td><td>HistoCore Arcadia</td><td>Intégrer des micromoules</td></tr><tr><td>Processeur tissulaire</td><td>Leica</td><td>TP1020</td><td>Pour traiter les micromoules</td></tr><tr><td>Incubateur secouant 211DS (Secoueur orbital)</td><td>Labnet International</td><td>I-5211-DS</td><td>Incuber les ovaires dans des milieux enzymatiques pour la libération des follicules</td></tr><tr><td>Software&nbsp ; </fort></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Autodesk Fusion</td><td>Autodesk, Inc</td><td></td><td>Logiciel de conception assistée par ordinateur (CAO). Autodesk offre un accès éducatif gratuit via le programme Autodesk Education.</td></tr><tr><td>DinoCapture 3.0 version 1.1.1.3&nbsp ;</td><td>Dino-Lite</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ImageJ</td><td>Instituts nationaux de la santé</td><td></td><td>Analyser les images OCT et mesurer les follicules</td></tr><tr><td>Préforme</td><td>Formlabs, Inc</td><td></td><td>Logiciel gratuit de préparation à l’impression conçu pour fonctionner avec les imprimantes stéréolithographie (SLA) de Formlabs.</td></tr></tbody></table>

production et utilisation de moules d’agarose personnalisables pour la culture de follicules ovariens de souris sans échafaudage

Production and Use of Customizable Agarose Molds for Scaffold-Free Mouse Ovarian Follicle Culture

Production et utilisation de moules d’agarose personnalisables pour la culture de follicules ovariens de souris sans échafaudage

The ovarian follicle is the functional unit of the ovary that produces hormones and gametes needed to sustain female reproductive function and health. The ...

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Research

Recherche

JoVE Journal

Developmental Biology

Biologie du développement

Une nouvelle méthode pour l'encapsulation dans un follicule ovarien 3D fibrine alginate réseau interpénétré est décrite. Ce système combine un soutien structurel à la dégradation protéolytique de soutenir le développement des follicules immatures pour produire des ovocytes matures. Cette méthode peut être appliquée à des agrégats de cellules de culture pour maintenir des contacts cellule-cellule, sans limiter l'expansion.

Une méthode pour l&#39;encapsulation follicule ovarien et de la Culture dans un protéolytiquement dégradable 3 Système dimensionnelle

Culture de cellules normales dans leurs trois dimensions contexte représente une méthode alternative pour étudier les événements précoces nécessaires pour la transformation cellulaire et la tumorigenèse. Cette méthode est utilisée pour cultiver des cellules ovariennes normales et l'oviducte pour étudier les événements précoces de la formation de cancer de l'ovaire.

Les hydrogels d&#39;alginate de culture d&#39;organe en trois dimensions des ovaires et des trompes

Ce protocole décrit la culture primaire / co-culture de tissu ovarien de la souris, en utilisant des ovaires de souris nouveau-nées et des follicules ovariens provenant de souris individuelles prépubères. Les techniques de culture de soutenir le développement d'une manière hautement physiologique, ce qui permet étude de l'effet d'agents extrinsèques sur l'ovaire, et des interactions entre les follicules ovariens.

Culture et co-culture de souris ovaires et follicules ovariens

Ce protocole décrit une plate-forme de fabrication d’anneaux de tissu auto-assemblés dans des tailles variables à l’aide d’un moule en plastique personnalisé imprimés 3D. PDMS négatifs sont guéris dans le moule 3D-imprimés ; puis agarose est coulé dans les négatifs PDMS durcis. Les cellules sont ensemencées dans les puits d’agarose qui en résulte, où ils agrègent des anneaux de tissu.

Fabrication de puits d’Agarose personnalisé pour l’ensemencement de la cellule et l’anneau de tissu auto-assemblage à l’aide de moules 3D-imprimé

Présenté ici sont deux protocoles pour l’encapsulation des ovocytes porcins dans les conditions de culture 3D. Dans le premier, les complexes cumulus-oocytes (COC) sont encapsulés dans des perles de fibrine-alginate. Dans la seconde, ils sont enfermés avec des particules de poudre d’éthylène fluoré (microbioréacteurs). Les deux systèmes assurent des conditions optimales pour maintenir leur organisation 3D.

Hydrogels d’Alginate et microbioréacteurs hydrophobes protéolytically dégradés pour l’encapsulation des oocytes porcins

Ici, quatre méthodes pour générer des organoïdes testiculaires à partir des cellules testiculaires murines néonatales primaires sont décrites, c’est-à-dire la matrice extracellulaire (ECM) et les environnements de culture 2D et 3D exempts d’ECM. Ces techniques ont de multiples applications de recherche et sont particulièrement utiles pour étudier le développement testiculaire et la physiologie in vitro.

Extra Cellular Matrix-Based and Extra Cellular Matrix-Free Generation of Murine Testicular Organoids

Le protocole actuel décrit une technique permettant de produire des sphéroïdes tissulaires à grande échelle de manière rentable à l’aide d’un dispositif imprimé en 3D semblable à un tampon.

Génération de sphéroïdes tissulaires à l’aide d’un dispositif imprimé en 3D semblable à un tampon

Ce protocole décrit un nouveau modèle de culture tridimensionnel (3D) utilisant un hydrogel d’hyaluronane lié à la tyramine pour encapsuler et cultiver des follicules préantraux à partir de l’ovaire de souris. Nous détaillons également deux approches de la cryoconservation des follicules ovariens par vitrification.

Application d’un nouvel hydrogel d’hyaluronane pour la culture tridimensionnelle de follicules et méthodologie pour la cryoconservation de follicules ovariens de souris

Cette étude présente une méthodologie rentable et efficace pour générer des structures cellulaires 3D à l’aide d’un système basé sur des tampons pour créer des micropuits dans des moules d’agarose. Le système favorise la formation de sphéroïdes/organoïdes uniformes, améliorant ainsi les interactions cellulaires. Cette approche réduit la variabilité expérimentale et soutient les applications dans les tests de médicaments et l’ingénierie tissulaire.

Génération de sphéroïdes/organoïdes tridimensionnels à partir de cultures cellulaires bidimensionnelles à l’aide d’un nouveau dispositif de tamponnage

Nous décrivons des méthodes pour isoler les cellules somatiques ovariennes de souris à partir d’une fraction enrichie en strome de l’ovaire et pour générer des organoïdes somatiques ovariens de souris en utilisant une approche sans échafaudage.

Sonder le microenvironnement ovarien : méthodes d’isolement, culture 2D et culture organoïde des cellules somatiques ovariennes de souris

Découvrez une méthode de culture de follicules ovariens de souris sans échafaudage utilisant des moules d'agarose personnalisables imprimés en 3D. Cette technique améliore la croissance folliculaire et les taux d'ovulation.

Production et utilisation de moules d’agarose personnalisables pour la culture de follicules ovariens de souris sans échafaudage (Vidéo) | JoVE Journal

Production et utilisation de moules d’agarose personnalisables pour la culture de follicules ovariens de souris sans échafaudage

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