Name: Flux de travail standardisé SDS-PAGE pour le profilage personnalisé de la corona protéique dans la détection précoce du cancer (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-12-19T12:50:00.000+00:00
Duration: 10 min 2 s
Description: Découvrez un protocole SDS-PAGE standardisé pour le profilage de la corona protéique sur nanoparticules, permettant un diagnostic précoce du cancer du pancréas. Cette méthode simple et reproductible offre une alternative économique aux techniques protéomiques complexes.

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<li>Renzi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structuring+lipid+nanoparticles%2C+DNA%2C+and+protein+corona+into+stealth+bionanoarchitectures+for+in+vivo+gene+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Structuring lipid nanoparticles, DNA, and protein corona into stealth bionanoarchitectures for in vivo gene delivery.</a> Nat Commun. 15 (1), 9119(2024).</li>
<li>Van Dorpe, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrating+automated+liquid+handling+in+the+separation+workflow+of+extracellular+vesicles+enhances+specificity+and+reproducibility%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nanobiotechnology%22%5BJournal%5D)">Integrating automated liquid handling in the separation workflow of extracellular vesicles enhances specificity and reproducibility.</a> J Nanobiotechnology. 21 (1), 157(2023).</li>
<li>Quagliarini, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influence+of+protein+corona+on+graphene+oxide%3A+Implications+for+biomedical+theranostics%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nanobiotechnology%22%5BJournal%5D)">The influence of protein corona on graphene oxide: Implications for biomedical theranostics.</a> J Nanobiotechnology. 21 (1), 267(2023).</li>
<li>Jiříčková, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthesis+and+applications+of+graphene+oxide%5BTitle%5D)+AND+%22Materials%22%5BJournal%5D)">Synthesis and applications of graphene oxide.</a> Materials. 15 (3), 920(2022).</li>
<li>Saorin, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+redefined+protocol+for+protein+corona+analysis+on+graphene+oxide%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Nanosci+Au%22%5BJournal%5D)">A redefined protocol for protein corona analysis on graphene oxide.</a> ACS Nanosci Au. , (2025).</li>
<li>Digiacomo, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanoparticle-protein+corona+enhances+accuracy+of+Ca-19.9-based+pancreatic+cancer+classification%5BTitle%5D)+AND+%22Nanoscale%22%5BJournal%5D)">Nanoparticle-protein corona enhances accuracy of Ca-19.9-based pancreatic cancer classification.</a> Nanoscale. 17 (12), 7066-7075 (2025).</li>
<li>Caputo, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+the+accuracy+of+pancreatic+cancer+clinical+staging+by+exploitation+of+nanoparticle-blood+interactions%3A+A+pilot+study%5BTitle%5D)+AND+%22Pancreatology%22%5BJournal%5D)">Improving the accuracy of pancreatic cancer clinical staging by exploitation of nanoparticle-blood interactions: A pilot study.</a> Pancreatology. 18 (6), 661-665 (2018).</li>
<li>Quagliarini, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+decade+of+the+liposome-protein+corona%3A+Lessons+learned+and+future+breakthroughs+in+theranostics%5BTitle%5D)+AND+%22Nano+Today%22%5BJournal%5D)">A decade of the liposome-protein corona: Lessons learned and future breakthroughs in theranostics.</a> Nano Today. 47, 101657(2022).</li>
<li>Wu, S. Y., An, S. S. A., Hulme, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+applications+of+graphene+oxide+in+nanomedicine%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Nanomedicine%22%5BJournal%5D)">Current applications of graphene oxide in nanomedicine.</a> Int J Nanomedicine. 10 Suppl 1, 9-24 (2015).</li>
<li>Caputo, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplexed+detection+of+pancreatic+cancer+by+combining+a+nanoparticle-enabled+blood+test+and+plasma+levels+of+acute-phase+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Cancers%22%5BJournal%5D)">Multiplexed detection of pancreatic cancer by combining a nanoparticle-enabled blood test and plasma levels of acute-phase proteins.</a> Cancers. 14 (19), 4658(2022).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>TUBE de liaison protéique de 1,5 ML</td><td>eppendorf</td><td>22431081</td><td></td></tr><tr><td>10x Tris/Glycine/SDS</td><td>Biorad</td><td>1610732</td><td></td></tr><tr><td>Centrifugeuse</td><td>Labortechnik</td><td>Z 216 MK Hermle</td><td>Utilisé à 18 620 RCF pendant 20 minutes à 4 °C ; C</td></tr><tr><td>Système d’imagerie ChemiDoc</td><td>Bio-Rad</td><td>12003153</td><td>Utilisé pour l’acquisition d’images sur gel</td></tr><tr><td>Chloroforme</td><td>Sigma Aldrich</td><td>C2432-1L</td><td>Solvant pour DOTAP</td></tr><tr><td>Corning 1-200 & micro ; Embouts de pipette en vrac L Universal Fit</td><td>Corning</td><td>4845</td><td></td></tr><tr><td>Gélices préfabriqués Criterion TGX sans taches</td><td>Biorad</td><td>5678095</td><td></td></tr><tr><td>Eau distillée 6 x 1L</td><td>Thermo Fisher</td><td>15230001</td><td></td></tr><tr><td>DOTAP (1,2-dioléoyl-3-triméthylammonium-propane)</td><td>Lipides polaires avanti</td><td>890890P-200mg</td><td>Utilisé pour préparer des liposomes cationiques ; dissous dans le chloroforme, évaporé, hydraté et extrudé</td></tr><tr><td>Alimentation Enduro 300V &nbsp ;</td><td>Labnet&nbsp ;</td><td>E0303-230V</td><td></td></tr><tr><td>Lecteur de microplaques GloMax Discover</td><td>Promega</td><td>GM3000</td><td></td></tr><tr><td>Nanoparticules d’or (stabilisées au citrate)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>742031-25ML</td><td>Utilisé comme nanomatériau ; Utilisé sans purification supplémentaire</td></tr><tr><td>Gel de polyacrylamide dégradé (4 et ndash ; 20 % TGX)</td><td>Bio-Rad</td><td>5678095</td><td>Utilisé pour SDS et ndash ; PAGE</td></tr><tr><td>Instrument de subvention &nbsp ; Thermoshaker HC24N (24 microtubes de 1,5 mL)</td><td>Fisher scientifique</td><td>PHMT-PSC24N</td><td></td></tr><tr><td>Solution d’oxyde de graphène (GO)</td><td>Graphène</td><td>GO-4-1000</td><td>Utilisé comme nanomatériau ; dilué à 0,25 mg/mL et sonique</td></tr><tr><td>Plasma humain (HP)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P9523-5ML</td><td>Utilisé pour l’incubation de nanoparticules</td></tr><tr><td>Logiciel ImageLab</td><td>Bio-Rad. Version 6.1.0.07</td><td>/</td><td>Utilisé pour exporter une image gel sous forme de fichiers tiff</td></tr><tr><td>Tampon de chargement de Laemmli 2x</td><td>Biorad</td><td>1610737</td><td>Utilisé pour la resuspensione des granulés</td></tr><tr><td>MATLAB</td><td>MathWorks. Version R2022a</td><td>/</td><td>Utilisé pour le traitement d’images, l’analyse de données et le calcul de profils</td></tr><tr><td>Mini-extrudeur</td><td>Lipides polaires avanti</td><td>610020</td><td>Utilisé pour la préparation des liposomes</td></tr><tr><td>Agent réducteur d’échantillons NuPAGE (10X)</td><td>Thermo Scientific</td><td>NP004</td><td></td></tr><tr><td>Tampon de solution de phosphate</td><td>Corning&nbsp ;</td><td>21-031-cm</td><td>Utilisation pour les échantillons DOTAP-HP</td></tr><tr><td>Kit de test protéique Pierce BCA, 1 kit (1 L)</td><td>ThermoFisher</td><td>23225</td><td></td></tr><tr><td>Pointes de pipette claires 0,5-10ul</td><td>Axygène</td><td>T-300-STK</td><td></td></tr><tr><td>PIPETMAN L P10L, 0,5-10 & micro ; L, Éjecteur métallique</td><td>Gilson</td><td>FA10002M</td><td></td></tr><tr><td>PIPETMAN P20, 2-20 & micro ; L, Éjecteur métallique</td><td>Gilson</td><td>F144056M</td><td></td></tr><tr><td>PIPETMAN P200, 20-200 & micro ; L, Éjecteur métallique</td><td>Gilson</td><td>F144058M</td><td></td></tr><tr><td>Système automatisé de pipetage PIPETMAX</td><td>Gilson</td><td>GSYS0021</td><td>Utilisé pour la manipulation automatisée des échantillons</td></tr><tr><td>Filtre en polycarbonate (0,1 & micro ; m)</td><td>Lipides polaires avanti</td><td>610005-1EA</td><td>Utilisation pour l’extrusion de liposomes</td></tr><tr><td>Protéines Precision Plus Protein All Blue Prestained</td><td>Biorad</td><td>1610373</td><td></td></tr><tr><td>Standards Precision Plus Protéine Non colorée &nbsp ;</td><td>Biorad</td><td>1610363EDU</td><td></td></tr><tr><td>Sonicateur à cellules vibra VC505</td><td>Sonics and Materials inc.</td><td>VC505</td><td></td></tr><tr><td>ZetaSizer</td><td>Malvern</td><td>ZS90</td><td>Utilisé pour la diffusion dynamique de la lumière (DLS) et la microélectrophorèse (ME)</td></tr></tbody></table>

flux de travail standardisé sds-page pour le profilage personnalisé de la corona protéique dans la détection précoce du cancer

Standardized SDS-PAGE Workflow for Personalized Protein Corona Profiling in Early Cancer Detection

Flux de travail standardisé SDS-PAGE pour le profilage personnalisé de la corona protéique dans la détection précoce du cancer

The formation of a personalized protein corona (PC) on nanoparticles (NPs) upon exposure to biological fluids has emerged as a promising, minimally ...

standardized-sds-page-workflow-for-personalized-protein-corona

Research

Recherche

JoVE Journal

Cancer Research

Recherche sur le cancer

Nous avons décrit une procédure pour la désagrégation du cancer colorectal (CCR) pour produire des cellules viables unique, qui sont ensuite saisies sur biopuces d'anticorps reconnaissant les antigènes de surface sur mesure (CRC DotScan micropuce). Les sous-populations de cellules lié à la puce peut être profilée par multiplexage de fluorescence à l'aide d'anticorps monoclonaux marqués avec des colorants fluorescents.

Colorectal Cancer Cell Surface Protein profilage utilisant une biopuces d&#39;anticorps et de multiplexage par fluorescence

APPR permet l'expression de la protéine de centaines d'échantillons, imprimés sur des lames de nitrocellulose pour être interrogé simultanément, en utilisant des anticorps marqués par fluorescence. Cette technique a été appliquée pour étudier l'effet de l'hétérogénéité traitement de la toxicomanie au sein de cellules de carcinome rénal clair.

L&#39;utilisation des puces à protéines de phase inversée (RPPA) Variation à explorer l&#39;expression des protéines dans les cancers à cellules rénales individuels

Des analyses approfondies des protéomes de cellules cancéreuses facilitent l’identification de nouvelles cibles médicamenteuses et de biomarqueurs diagnostiques. Nous décrivons un flux de travail expérimental pour l’analyse quantitative des (phospho-)protéomes dans des sous-populations de cellules cancéreuses dérivées de tumeurs liquides et solides. Ceci est réalisé en combinant des stratégies d’enrichissement cellulaire avec la spectrométrie de masse quantitative basée sur Super-SILAC.

Spectrométrie de masse quantitative de profilage Protéomes Cancer-cellulaires dérivées de liquide et de tumeurs solides

Le but de cette vidéo est de montrer comment effectuer une extraction d'ADN automatisée à partir des lignes de formol paraffine (FFPE) référence standards cellulaires et gouttelettes numérique PCR (ddPCR) analyse pour détecter des mutations rares dans un cadre clinique. Détecter des mutations dans des échantillons FFPE démontre l'utilité clinique de ddPCR dans les échantillons FFPE.

Employant numérique Droplet PCR pour détecter des mutations BRAF V600E dans de paraffine standard de référence lignées cellulaires fixés au formol

L’utilisation d’une approche basée sur l’ARN pour déterminer les profils immunitaires quantitatifs des tissus tumoraux solides et tirer parti des cohortes cliniques pour la découverte de biomarqueurs immuno-oncologie est décrite au moyen d’un protocole moléculaire et informatique.

Modélisation immunitaire prédictive des tumeurs solides

Ici, nous décrivons un protocole de réglage fin des régions d’intérêt (ROI) pour les technologies Spatial Omics afin de mieux caractériser le microenvironnement tumoral et d’identifier des populations cellulaires spécifiques. Pour les tests protéomiques, des protocoles personnalisés automatisés peuvent guider la sélection du retour sur investissement, tandis que les tests transcriptomiques peuvent être affinés en utilisant des retours sur investissement aussi petits que 50 μm.

Profilage spatial de l’expression des protéines et de l’ARN dans les tissus : une approche pour affiner la microdissection virtuelle

La dysrégulation protéomique joue un rôle important dans la propagation des gliomes infiltrant de manière diffuse, mais plusieurs protéines pertinentes restent non identifiées. Le traitement spatial numérique (DSP) offre une approche efficace et à haut débit pour caractériser l’expression différentielle des protéines candidates qui peuvent contribuer à l’invasion et à la migration des gliomes infiltrants.

Profilage spatial numérique pour la caractérisation du microenvironnement dans le gliome à infiltration diffuse de type adulte

Ici, nous établissons une méthode protéomique basée sur la spectrométrie de masse en utilisant des régions d’intérêt isolées dans des coupes de tissus fixées au formol et incluses dans la paraffine. Ce protocole est utilisé pour analyser le protéome de zones tissulaires spécifiques dans des coupes de tissus archivées fixées au formol et incluses dans la paraffine.

Une approche simplifiée pour la protéomique basée sur la spectrométrie de masse à l’aide de régions tissulaires sélectionnées

Ici, nous présentons un protocole permettant la capture et l’identification d’interactions protéine-protéine spécifiques à une maladie à partir de cellules et de tissus natifs à l’aide de sondes chimiques et de spectrométrie de masse. Les ensembles de données d’interaction qui en résultent sont analysés par le biais d’une plate-forme Web dédiée pour révéler les dysfonctionnements dynamiques du réseau et les altérations des voies liées à la maladie.

Cartographie des interactions protéine-protéine dysfonctionnelles dans la maladie

Ce protocole a été conçu pour former un algorithme d’apprentissage automatique à utiliser une combinaison de paramètres d’imagerie dérivés de l’imagerie par résonance magnétique (IRM) et de la tomographie par émission de positrons/tomographie calculée (PET/CT) dans un modèle de rat de métastases osseuses du cancer du sein pour détecter la maladie métastatique précoce et prédire la progression ultérieure des macrométastases.

Algorithmes d’apprentissage automatique pour la détection précoce des métastases osseuses dans un modèle de rat expérimental

Découvrez un protocole SDS-PAGE standardisé pour le profilage de la corona protéique sur nanoparticules, permettant un diagnostic précoce du cancer du pancréas. Cette méthode simple et reproductible offre une alternative économique aux techniques protéomiques complexes.

Flux de travail standardisé SDS-PAGE pour le profilage personnalisé de la corona protéique dans la détection précoce du cancer

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