Name: Évaluation radiochimique de l’activité de l’enzyme glycogène synthase dans les tissus animaux (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-10-24T14:50:00.000+00:00
Duration: 2 min 30 s
Description: Apprenez à mesurer l'activité enzymatique de la glycogène synthase dans le muscle squelettique murin par détection de scintillation nucléaire. Cette méthode radiochimique permet d'étudier le métabolisme du glycogène et les maladies de stockage.

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<ol><li>Preiss, J., Walsh, D. A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPreiss%2C+J+%22Biology+of+Carbohydrates%22">Biology of Carbohydrates</a>. Ginsburg, V., Robbins, P. 1, John Wiley. 199-314 (1981).</li>
<li>Pederson, B. A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPederson%2C+BA+%22Enzymology+of+Complex+Alpha-Glucans%22">Enzymology of Complex Alpha-Glucans</a>. , CRC Press. 84-137 (2021).</li>
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<li>Leloir, L. F., Olavarria, J. M., Goldemberg, S. H., Carminatti, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biosynthesis+of+glycogen+from+uridine+diphosphate+glucose%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Biochem+Biophys%22%5BJournal%5D)">Biosynthesis of glycogen from uridine diphosphate glucose.</a> Arch Biochem Biophys. 81 (2), 508-520 (1959).</li>
<li>Schalin-Jantti, C., Harkonen, M., Groop, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impaired+activation+of+glycogen+synthase+in+people+at+increased+risk+for+developing+NIDDM%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Impaired activation of glycogen synthase in people at increased risk for developing NIDDM.</a> Diabetes. 41 (5), 598-604 (1992).</li>
<li>Huang, X., Hansson, M., Laurila, E., Ahren, B., Groop, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fat+feeding+impairs+glycogen+synthase+activity+in+mice+without+effects+on+its+gene+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Metabolism%22%5BJournal%5D)">Fat feeding impairs glycogen synthase activity in mice without effects on its gene expression.</a> Metabolism. 52 (5), 535-539 (2003).</li>
<li>Holt, B. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+CD71+Centyrin%3A+Gys1+siRNA+conjugate+reduces+glycogen+synthesis+and+glycogen+levels+in+a+mouse+model+of+Pompe+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">A novel CD71 Centyrin: Gys1 siRNA conjugate reduces glycogen synthesis and glycogen levels in a mouse model of Pompe disease.</a> Mol Ther. 33 (1), 235-248 (2025).</li>
<li>Prats, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phosphorylation-dependent+translocation+of+glycogen+synthase+to+a+novel+structure+during+glycogen+resynthesis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Phosphorylation-dependent translocation of glycogen synthase to a novel structure during glycogen resynthesis.</a> J Biol Chem. 280 (24), 23165-23172 (2005).</li>
<li>Perezleon, J. A., Osorio-Paz, I., Francois, L., Salceda, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunohistochemical+localization+of+glycogen+synthase+and+GSK3beta%3A+Control+of+glycogen+content+in+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Neurochem+Res%22%5BJournal%5D)">Immunohistochemical localization of glycogen synthase and GSK3beta: Control of glycogen content in retina.</a> Neurochem Res. 38 (5), 1063-1069 (2013).</li>
<li>Thomas, J. A., Schlender, K. K., Larner, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rapid+filter+paper+assay+for+UDP-glucose-glycogen+glucosyltransferase%2C+including+an+improved+biosynthesis+of+UDP-14C-glucose%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">A rapid filter paper assay for UDP-glucose-glycogen glucosyltransferase, including an improved biosynthesis of UDP-14C-glucose.</a> Analytical Biochemistry. 25 (1), 486-499 (1968).</li>
<li>Parker, G. J., Lund, K. C., Taylor, R. P., McClain, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insulin+resistance+of+glycogen+synthase+mediated+by+O-linked+N-acetylglucosamine%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Insulin resistance of glycogen synthase mediated by O-linked N-acetylglucosamine.</a> J Biol Chem. 278 (12), 10022-10027 (2003).</li>
<li>Niederwanger, A., Kranebitter, M., Ritsch, A., Patsch, J. R., Pedrini, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+gel+filtration+assay+to+determine+glycogen+synthase+activity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Chromatogr+B+Analyt+Technol+Biomed+Life+Sci%22%5BJournal%5D)">A gel filtration assay to determine glycogen synthase activity.</a> J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci. 820 (1), 143-145 (2005).</li>
<li>Suzuki, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insulin+control+of+glycogen+metabolism+in+knockout+mice+lacking+the+muscle-specific+protein+phosphatase+PP1G%2FRGL%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Insulin control of glycogen metabolism in knockout mice lacking the muscle-specific protein phosphatase PP1G/RGL.</a> Mol Cell Biol. 21 (8), 2683-2694 (2001).</li>
<li>Nagy, A., Gertsenstein, M., Vintersten, K., Behringer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quick+and+humane+sacrifice+of+a+mouse+by+cervical+dislocation%5BTitle%5D)+AND+%22CSH+Protoc%22%5BJournal%5D)">Quick and humane sacrifice of a mouse by cervical dislocation.</a> CSH Protoc. 2006 (1), prot4357(2006).</li>
<li>Gomes, F. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glycogen+storage+and+muscle+glucose+transporters+%28GLUT-4%29+of+mice+selectively+bred+for+high+voluntary+wheel+running%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Biol%22%5BJournal%5D)">Glycogen storage and muscle glucose transporters (GLUT-4) of mice selectively bred for high voluntary wheel running.</a> J Exp Biol. 212 (Pt 2), 238-248 (2009).</li>
<li>Greenberg, C. C., Jurczak, M. J., Danos, A. M., Brady, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glycogen+branches+out%3A+new+perspectives+on+the+role+of+glycogen+metabolism+in+the+integration+of+metabolic+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Endocrinol+Metab%22%5BJournal%5D)">Glycogen branches out: new perspectives on the role of glycogen metabolism in the integration of metabolic pathways.</a> Am J Physiol Endocrinol Metab. 291 (1), E1-E8 (2006).</li>
<li>Bradford, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rapid+and+sensitive+method+for+the+quantitation+of+microgram+quantities+of+protein+utilizing+the+principle+of+protein-dye+binding%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Biochem%22%5BJournal%5D)">A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding.</a> Anal Biochem. 72, 248-254 (1976).</li>
<li>Gilboe, D. P., Larson, K. L., Nuttall, F. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radioactive+method+for+the+assay+of+glycogen+phosphorylases%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Biochem%22%5BJournal%5D)">Radioactive method for the assay of glycogen phosphorylases.</a> Anal Biochem. 47 (1), 20-27 (1972).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>[14C] Uridine 5-diphospho-glucose</td><td>Produits chimiques radiomarqués américains</td><td>ARC 0154</td><td></td></tr><tr><td>31 Article de chromatographie ETCHR</td><td>Whatman</td><td>3031 915</td><td></td></tr><tr><td>Hydrate d’hydrochlorure de benzamidine</td><td>Sigma</td><td>B6506</td><td></td></tr><tr><td>Bêta mercaptoéthanol</td><td>Sigma</td><td>M3148</td><td></td></tr><tr><td>Bain sec</td><td>Torey Pines Scientific</td><td>SC25</td><td></td></tr><tr><td>Éthanol (200 proof)</td><td>PharmcoAaper</td><td>111000200</td><td></td></tr><tr><td>Acide éthylène glycol tétraacétique (EGTA)</td><td>Sigma</td><td>E4378</td><td></td></tr><tr><td>Acide éthylédiamine tétraacétique (EDTA)</td><td>Sigma</td><td>E5134</td><td></td></tr><tr><td>Glucose-6-phosphate sel de sodium</td><td>Sigma</td><td>G7879</td><td></td></tr><tr><td>Glycogène provenant du foie de lapin (Type III)</td><td>Sigma</td><td>G8876</td><td></td></tr><tr><td>Microplate, fond plat, 96 puits</td><td>Greiner</td><td>655101</td><td></td></tr><tr><td>Microplaque, PCR, puits à 96</td><td>DOT Scientific</td><td>951-PCR</td><td></td></tr><tr><td>Compteur à scintillation polyvalent</td><td>Beckman Coulter</td><td>LS 6500</td><td></td></tr><tr><td>Dihydrate de fluorure de potassium</td><td>Sigma</td><td>221872</td><td></td></tr><tr><td>Cocktail inhibiteur de protéase</td><td>GoldBio</td><td>GB-108-2</td><td></td></tr><tr><td>Cocktail de scintillation</td><td>Produits de recherche International</td><td>111195</td><td></td></tr><tr><td>Fioles à scintillation</td><td>Produits de recherche International</td><td>125509</td><td></td></tr><tr><td>Fluorure de sodium</td><td>Sigma</td><td>S7920</td><td></td></tr><tr><td>Déchireur tissulaire</td><td>Produits Biospec</td><td>Modèle 398</td><td></td></tr><tr><td>Tosyllysine Chlorométhyl Cétone (TLCK)</td><td>Sigma</td><td>T7254</td><td></td></tr><tr><td>Base de Trizma (99,9 %)</td><td>Sigma</td><td>T1503</td><td></td></tr><tr><td>Chlorhydrate de Trizma</td><td>Sigma</td><td>T3253</td><td></td></tr><tr><td>Uridine 5-diphospo-glucose</td><td>Sigma</td><td>U-4625</td><td></td></tr></tbody></table>

Évaluation radiochimique de l’activité de l’enzyme glycogène synthase dans les tissus animaux

Radiochemical Assessment of Glycogen Synthase Enzyme Activity in Animal Tissue

Glycogen is an important metabolite to many eukaryotic cells, integral to energy storage and quick energy release. The building of the molecule is ...

radiochemical-assessment-glycogen-synthase-enzyme-activity-animal

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Cette vidéo décrit un test spectrophotométrique pour l’estimation de l’activité de la glycogène synthase. La méthode repose sur la réduction de l’absorbance du NADH avec le temps et indique l’activité de la glycogène synthase.

Dosage spectrophotométrique pour déterminer l’activité de la glycogène synthase

Dans cette vidéo, nous décrivons un test spectrophotométrique qualitatif pour déterminer l’étendue de la ramification dans un échantillon de glycogène avec une structure non caractérisée. La comparaison des maxima d’absorbance de l’échantillon non caractérisé avec celle des polysaccharides avec des structures ramifiées connues indique la présence de ramifications dans l’échantillon non caractérisé.

Test de ramification du glycogène pour mesurer le degré de ramification du glycogène

Nous décrivons ici une méthode biochimique précis, reproductible et pratique pour le titrage de glycogène in vitro. Cette technique utilise la trousse de dosage Abcam glycogène et est basé sur l'hydrolyse successive du glycogène en glucose et glucose titrage par fluorescence.

Titration biochimique de glycogène<em&gt; In vitro</em

La coloration périodique à l’acide de Schiff est une technique qui permet de visualiser la teneur en polysaccharides des tissus. Cet article présente le protocole de coloration périodique à l’acide de Schiff adapté pour une utilisation sur des cellules mononucléées du sang périphérique purifiées à partir de sang veineux humain. Ces échantillons sont enrichis pour les lymphocytes et autres globules blancs du système immunitaire.

Détection glycogène dans les cellules mononucléaires du sang périphérique avec l&#39;acide périodique Schiff coloration

Ici, nous présentons un dosage fiable et facile pour mesurer la teneur en glycogène dans les cellules cyanobactériennes. La procédure implique des précipitations, une dépolymérisation sélectionnable et la détection de résidus de glucose. Cette méthode est appropriée pour les souches de type sauvage et génétiquement modifiées et peut faciliter l'ingénierie métabolique des cyanobactéries.

Détermination du contenu en glycogène dans les cyanobactéries

Une régulation intacte de l’absorption du glucose musculaire est importante pour maintenir l’homéostasie du glucose dans tout le corps. Ce protocole présente une évaluation de l’absorption de glucose stimulée par l’insuline et la contraction dans les muscles squelettiques matures isolés et incubés lors de la délimitation de l’impact de diverses interventions physiologiques sur le métabolisme du glucose dans tout le corps.

Mesure de l’absorption de glucose stimulée par l’insuline et la contraction dans le muscle squelettique mature isolé et incubé de souris

Des techniques pour mesurer l’activité des enzymes clés du métabolisme du glycogène sont présentées, à l’aide d’un spectrophotomètre simple fonctionnant dans la plage visible.

Méthodes spectrophotométriques pour l’étude du métabolisme du glycogène eucaryote

Une concentration optimale de saccharose a été déterminée pour l’extraction du glycogène hépatique à l’aide d’une centrifugation à gradient de densité de saccharose. L’ajout d’une étape d’ébullition de 10 minutes pour inhiber les enzymes dégradant le glycogène s’est avéré bénéfique.

L’extraction des molécules de glycogène hépatique pour la détermination de la structure du glycogène

Une procédure de post-fixation modifiée augmente le contraste des particules de glycogène dans les tissus. Cet article fournit un protocole étape par étape décrivant comment manipuler le tissu, effectuer l’imagerie et utiliser des méthodes stéréologiques pour obtenir des données impartiales et quantitatives sur la distribution du glycogène subcellulaire spécifique au type de fibre dans le muscle squelettique.

Quantification de la distribution subcellulaire du glycogène dans les fibres musculaires squelettiques à l’aide de la microscopie électronique à transmission

Comme les mitochondries sont seulement un petit pourcentage de la cellule végétale, ils doivent être purifiés pour une série d’études. Les mitochondries peuvent être isolés dans divers organes de la plante par homogénéisation, suivie par centrifugation en gradient de différentiel et densité afin d’obtenir une fraction mitochondriale hautement purifiée.

Isolement et mesures respiratoire des mitochondries d’Arabidopsis thaliana

Apprenez à mesurer l'activité enzymatique de la glycogène synthase dans le muscle squelettique murin par détection de scintillation nucléaire. Cette méthode radiochimique permet d'étudier le métabolisme du glycogène et les maladies de stockage.

Évaluation radiochimique de l’activité de l’enzyme glycogène synthase dans les tissus animaux

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