Cartographie spatiale améliorée des couches de muscles gastriques de souris à l’aide d’une technique modifiée du Swiss roll

Nos recherches visent à améliorer la façon dont nous préparons et analysons l’estomac doux pour l’imagerie. Nous avons adapté la technique Swiss Roll initialement développée pour l’intestin murin afin que toutes les principales régions gastriques, y compris le fundus, le corpus et l’antrum, puissent être intégrées ensemble dans une seule section cryogénique. Cela nous permet de visualiser la structure de l’estomac et la composition cellulaire côte à côte tout en maintenant une orientation spatiale précise et une qualité d’image élevée.

L’estomac est un organe complexe avec des tissus délicats. De petites erreurs peuvent endommager les cellules ou déformer leur arrangement, ce qui rend l’imagerie haute résolution et la coloration immunologique incohérentes. Notre technique de rouleau suisse résout ce problème en maintenant toutes les régions, y compris le duodénum et l’œsophage, intactes dans un seul bloc cryogénique, rendant les expériences plus fiables et reproductibles.

Pour commencer, utilisez des ciseaux pour couper le long du mésentère ventral du duodénum et de l’estomac jusqu’à la goupille au niveau du corpus. À l’aide d’une pipette de transfert remplie de PBS, éliminez tout résidu de nourriture dans la lumière gastrique. Étirez doucement le ventre ouvert pour obtenir une orientation plate.

Épingle le mouchoir à nouveau à plat après la brève fixation. À l’aide de ciseaux, taillez le ventre le long du contour pointillé pour créer une forme uniforme adaptée au roulement. Placez le tissu gastrique coupé sur du papier filtre humidifié au PBS.

Roulez le mouchoir en forme de rouleau suisse et fixez-le en insérant un cure-dent au centre. Une fois roulé, insérez une aiguille de calibre 30 pour en fixer la forme. Ensuite, pliez l’aiguille à un angle de 90 degrés pour stabiliser l’estomac roulé.

Fixez le tissu roulé dans du paraformoldéhyde à 4 % à quatre degrés Celsius pendant six heures. Ensuite, retirez doucement l’aiguille stabilisatrice. Incorporez le tissu dans un composé à température de coupe optimal à l’aide de moules de base jetables.

Ensuite, congelez la moisissure sur de la glace sèche. Une fois complètement congelé, conservez la moisissure à moins 80 degrés Celsius. La nouvelle méthode permettait d’inclure le fond d’œsophage, le corpus, l’antrum, une partie de l’œsophage et le duodénum dans une seule section murine du Swiss roll gastrique.

La coloration à l’hématoxyline et à l’éosine du rouleau suisse gastrique a révélé une architecture bien conservée dans le fundus, le corpus, l’antrum, l’œsophage et le duodénum, avec des couches muqueuses, sous-muqueuses et musculaires clairement visibles. La coloration immunofluorescente a montré l’expression de KIT et d’ANO1 dans les cellules interstitielles de Cajal et l’expression de la bêta-tubuline trois dans les neurones entériques, confirmant la préservation cellulaire dans le Swiss roll gastrique. L’expression de KIT a également été détectée dans les cellules paneth et goblet de la muqueuse gastrique tandis que l’ANO1 était fortement exprimée dans les cellules épithéliales colonnaires fondiques.

L’expression de la bêta-tubuline 3 a été observée dans les cellules gastriques, endocrines et sécrétentes de mucus, en plus des neurones entériques. La coloration de la chaîne lourde en myosine 11 a confirmé la présence de cellules musculaires lisses et de myofibroblastes dans la muqueuse gastrique, tandis que la coloration par E-cadherine a montré des cellules épithéliales et la coloration KIT a de nouveau marqué les cellules interstitielles de Cajal. La technique suisse de la route peut faire progresser la recherche sur les changements régionaux spécifiques au tissu gastrique.

Contrairement aux approches traditionnelles qui implantent la région séparément, la Technique Suisse Roll traite toutes les régions gastriques dans des conditions identiques, économisant à la fois du temps et des réactifs. Cela en fait une plateforme pratique et évolutive pour l’analyse complète des tissus gastriques, tant en santé qu’en maladie.