Name: Cartographie spatiale améliorée des couches de muscles gastriques de souris à l’aide d’une technique modifiée du Swiss roll (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-11-25T14:30:00.000+00:00
Duration: 4 min 18 s
Description: Découvrez une technique Swiss roll modifiée pour l'immunomarquage de l'estomac entier chez la souris. Cette méthode permet de visualiser toutes les régions gastriques dans une seule coupe cryo tout en préservant l'orientation spatiale et la qualité d'image.

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<ol><li>Chaudhry, S. R., Liman, M. N. P., Omole, A. E., Peterson, D. C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aChaudhry%2C+SR+%22Anatomy%2C+abdomen+and+pelvis%3A+Stomach%22">Anatomy, abdomen and pelvis: Stomach</a>. , StatPearls. (2025).</li>
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<li>Hayashi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hyperglycemia+increases+interstitial+cells+of+Cajal+via+MAPK1+and+MAPK3+signaling+to+ETV1+and+KIT%2C+leading+to+rapid+gastric+emptying%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Hyperglycemia increases interstitial cells of Cajal via MAPK1 and MAPK3 signaling to ETV1 and KIT, leading to rapid gastric emptying.</a> Gastroenterology. 153 (2), 521-535.e20 (2017).</li>
<li>Gao, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypoxia-inducible+factor+1alpha+stabilization+restores+epigenetic+control+of+nitric+oxide+synthase+1+expression+and+reverses+gastroparesis+in+female+diabetic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Hypoxia-inducible factor 1alpha stabilization restores epigenetic control of nitric oxide synthase 1 expression and reverses gastroparesis in female diabetic mice.</a> Gastroenterology. 165 (6), 1458-1474 (2023).</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>#5SF Pinces</td><td>OUTILS SCIENTIFIQUES DE QUALITÉ</td><td>11252-00</td><td></td></tr><tr><td>albumine sérique bovine & nbsp ;</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>A7906</td><td></td></tr><tr><td>Source lumineuse LED ColdVision MC-LS</td><td>SCHOTT</td><td>MC-LS</td><td></td></tr><tr><td>Confocal software&nbsp ;</td><td>Nikon</td><td>Logiciel d’imagerie Nikon NIS-Elements</td><td></td></tr><tr><td>Cryoseal XYL</td><td>Epredida</td><td>9312-4</td><td></td></tr><tr><td>DAPI (4',6-diamidino-2-phénylindole, dilactate)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>D3571</td><td></td></tr><tr><td>Plats de dissection, grands</td><td>Systèmes vivants & nbsp ; Instrumentation</td><td>SKU : DD-90</td><td></td></tr><tr><td>Anti-chèvre Donkey AF647 pAb</td><td>Technologies de vie</td><td>A21447</td><td>Lot : 1739289 RRID : AB_2535864</td></tr><tr><td>Anti-souris Donkey AF555 pAb</td><td>Technologies de vie</td><td>A31570</td><td>Lot : 1774719 RRID : AB_2536180</td></tr><tr><td>Anti-lapin Donkey AF488 pAb</td><td>Technologies de vie</td><td>A21206</td><td>Lot : 2668665 RRID : AB_2535792</td></tr><tr><td>E-cadharine (dilution 1:400)</td><td>BD Biosciences</td><td>610181</td><td>lot : 25510 RRID : AB_397580</td></tr><tr><td>Éosine</td><td>ELITechGroup</td><td>$SS-071C</td><td></td></tr><tr><td>Pinces recouvertes d’époxy</td><td>OUTILS SCIENTIFIQUES DE QUALITÉ</td><td>11210-10</td><td></td></tr><tr><td>Éthanol</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>459828-4L</td><td></td></tr><tr><td>TUBE FLEXIBLE 1,5 mL</td><td>Eppendorf</td><td>22364111</td><td></td></tr><tr><td>Éponges en gaze</td><td>Fisherscientific</td><td>22-362-178</td><td></td></tr><tr><td>Ciseaux fins durcis</td><td>OUTILS SCIENTIFIQUES DE QUALITÉ</td><td>14090-09</td><td></td></tr><tr><td>Hématoxyline</td><td>Epredia</td><td>7211</td><td></td></tr><tr><td>KIT (0.2 & micro ; g/mL ; dilution 1:1000)</td><td>R& Systèmes D</td><td>AF1356</td><td>Beaucoup : IEO0217101 RRID : AB_354750</td></tr><tr><td>SOLUTION DE NETTOYAGE DE LENTILLE BOUTEILLE VAPORISATRICE DE 1 OZ</td><td>Nikon</td><td>77013066</td><td></td></tr><tr><td>Verre de revêtement de microscope</td><td>Fisher Scientific</td><td>12541016</td><td></td></tr><tr><td>Lames de microscope</td><td>CardinalHealth</td><td>M6133A</td><td></td></tr><tr><td>Épingles Minutien</td><td>OUTILS SCIENTIFIQUES DE QUALITÉ</td><td>26002-20</td><td></td></tr><tr><td>MYH11 (dilution 1:400)</td><td>Technologies biomédicales</td><td>BT-562</td><td>RRID : AB_10013421</td></tr><tr><td>Vernis à ongles</td><td>COULEURS PÉCHERESSES</td><td>7.33855E+11</td><td></td></tr><tr><td>Aiguille 30 G x 1/2 pouce. &nbsp ;</td><td>BD Biosciences</td><td>305106</td><td></td></tr><tr><td>Paraformélélidoïde</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>158127-500G</td><td></td></tr><tr><td>Lames à tranchant simple Personna</td><td>La Compagnie Razor Blade</td><td>76247-652</td><td></td></tr><tr><td>Solution de blocage IgG souris-sur-souris ReadyProbes (30x)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>R37621</td><td>Beaucoup : 3226230</td></tr><tr><td>Fixation antifondu diamant SlowFade (support de montage)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>S36972</td><td></td></tr><tr><td>Système de coloration StainTray 10 lames</td><td>Simport Scientific</td><td>M918-2</td><td></td></tr><tr><td>Microscope stéréo 0,8x-5x</td><td>Nikon</td><td>SMZ645</td><td></td></tr><tr><td>Sacchrose & nbsp ;</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>S9378-1KG</td><td></td></tr><tr><td>Surface-Amps X-100 (Triton X)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>28314</td><td></td></tr><tr><td>TMEM16A (ANO1 : dilution 1:400)</td><td>Abcam</td><td>ab53212&nbsp ;</td><td>Lot : GP3295656-1 RRID : AB_883075</td></tr><tr><td>Pipette de transfert</td><td>Faucon</td><td>357575</td><td></td></tr><tr><td>TUBB3 (dilution 1:400)</td><td>Technologie de signalisation cellulaire</td><td>4466</td><td>Lot : 5 RRID : AB_1904176</td></tr><tr><td>Xylènes&nbsp ;</td><td>Fisher Scientific</td><td>X3P-1GAL</td><td>BEAUCOUP 206238</td></tr></tbody></table>

cartographie spatiale améliorée des couches de muscles gastriques de souris à l’aide d’une technique modifiée du swiss roll

Enhanced Spatial Mapping of Mouse Gastric Muscle Layers Using a Modified Swiss Roll Technique

En utilisant la nouvelle méthode, les rouleaux suisses gastriques murins incluaient les trois principales régions de l’estomac : le fundus, le corpus et l’antrum, ainsi qu’une petite portion de l’œsophage et du duodénum en une seule section. Inclure l’estomac entier dans une seule section permet une analyse régionale complète (Figure 1). La coloration à l’hématoxyline et à l’éosine (H&amp;E) d’images entières des rouleaux suisses de l’estomac a démontré une architecture gastrique bien préservée dans toutes les régions, permettant une visualisation claire des couches muqueuse, sous-muqueuse et musculaire (Figure 3). La figure 4 montre une coloration immunofluorescente représentative des cellules interstitielles de Cajal (ICC ; cellules pacemaker générant des ondes rythmiques lentes sous-jacentes à la motilité intestinale phasique ; identifiées par KIT et ANO1), des neurones entériques (neurones du système nerveux entérique coordonnant la motilité gastro-intestinale ; identifiés par immunocoloration TUBB3) et des noyaux (DAPI). Dans la muqueuse gastrique, la KIT est également exprimée dans les cellules de Paneth et de goblet, comme précédemmentrapporté 9,10,11. ANO1 est également fortement exprimé dans l’épithélium gastrique, en particulier dans les cellules épithéliales colonnaires du fundus, ce qui correspond à son rôle dans le transport du chlorure et la sécrétionmuqueuse 11. De plus, TUBB3 est exprimée dans certaines cellules endocriniennes gastriques et cellules sécrétentes de mucus, selon les données de l’Atlas des protéineshumaines 12,13. La figure 5 montre une coloration immunofluorescente représentative des cellules musculaires lisses marquées par MYH11, des cellules épithéliales de la muqueuse gastrique marquées par E-cadherine, et de l’ICC marquées par KIT. MYH11 s’exprime également sous forme de myofibroblastes dans la muqueuse gastrique, comme rapporté précédemmentdans 14. Ensemble, ces résultats d’immunofluorescence confirment que notre protocole préserve l’architecture tissulaire.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/69673/69673fig1.jpg" data-altupdatedat="1783400419000" data-alt="Figure 1"> 
Figure 1 : Préparation du « Swiss roll » de l’estomac de souris pour la cryosection. (A) L’estomac entier est placé dans une cuvette de dissection recouverte de silicone noir, remplie de solution physiologique froide tamponnée au phosphate (PBS) immédiatement après le retrait afin de préserver l’intégrité des tissus. (B) L’estomac est ouvert le long du point médian du duodénum. (C) L’estomac est doucement étiré et maintenu dans le plat pour qu’il reste plat sans exercer de tension excessive. Une ligne rouge pointillée est délimitée le long du mouchoir pour indiquer où il doit être taillé afin de faciliter le roulement. (D) L’estomac ouvert et fixé est placé sur du papier filtre humidifié au PBS en préparation du roulage en configuration compacte. La flèche rouge indique la direction du ventre qui roule. (E) Les morceaux de tissu sont intégrés dans un composé optimal à température de coupe (O.C.T.) et congelés sur de la glace sèche en préparation de la cryosection. (F) Les blocs congelés sont stockés à −80 °C et cryosectionnés à une épaisseur de 5 μm pour une analyse en aval. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/69673/69673fig1large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figurine.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/69673/69673fig2.jpg" data-altupdatedat="1783400419000" data-alt="Figure 2"> 
Figure 2 : Configuration de l’acquisition ND et visualisation de saturation lors de l’imagerie Z-stack. (A) Réglages du laser et du détecteur configurés dans le logiciel d’imagerie confocale pour l’imagerie spectrale multicanal. Quatre fluorophores sont utilisés : 4′,6-diamidino-2-phénylindole (DAPI), Alexa Fluor 488 (AF488), Alexa Fluor 555 (AF555) et Alexa Fluor 647 (AF647), chacun associé à des lasers d’excitation et des détecteurs d’émission correspondants. Le graphique spectral affiche les courbes d’excitation et d’émission, permettant d’ajuster pour minimiser la diaphonie et optimiser la détection du signal. (B) Les réglages d’exposition sont ajustés individuellement pour chaque fluorophore afin d’éviter la saturation des pixels et de préserver les détails dans les régions à forte intensité. (C) Un réglage d’acquisition d’image large (par exemple, 6 × 6 champs) permet de visualiser l’ensemble du rouleau suisse gastrique ; La taille du champ d’image doit être ajustée en fonction de la taille et de la compacité du tissu roulé. (D) Fenêtre d’acquisition ND montrant les paramètres de la pile Z. La plage Z est définie en sélectionnant les positions supérieure et inférieure du muscle gastrique, avec huit étapes configurées pour capturer la profondeur complète du tissu pour une analyse tridimensionnelle (3D). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/69673/69673fig2large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figurine.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/69673/69673fig3.jpg" data-altupdatedat="1783400419000" data-alt="Figure 3"> 
Figure 3 : Image d’un rouleau suisse de souris taché à l’hématoxyline et à l’éosine. La balayage des tuiles démontre la capacité de visualiser l’intégralité du Swiss roll gastrique d’une souris C57BL/6J femelle de 8 semaines. Les principales régions anatomiques sont indiquées, notamment l’œsophage (ligne pointillée rouge), le sphincter œsophagien inférieur (ligne pointillée violette), le fundus (ligne pointillée noire), le corps (ligne pointillée bleue), l’antrum (ligne pointillée verte) et le duodénum (ligne pointillée orange). Barre d’échelle : 1000 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/69673/69673fig3large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/69673/69673fig4.jpg" data-altupdatedat="1783400419000" data-alt="Figure 4"> 
Figure 4 : Images confocales d’un rouleau suisse d’un ventre murin entier : ANO1, KIT, TUBB3. Panneaux supérieurs : Images confocales représentatives brodées d’un Swiss roll gastrique d’une femelle C57BL/6J âgée de 8 semaines, montrant l’immunocoloration pour ANO1 (vert), KIT (cyan), TUBB3 (jaune) et noyaux (bleu). L’ensemble de l’estomac gondé, y compris le fundus, le corpus et l’antrum, est visualisé. Barres d’échelle : 1000 μm. Panneaux inférieurs : Vues agrandies de la région délimitée par la boîte blanche pointillée dans les panneaux supérieurs, mettant en évidence les détails cellulaires des cellules interstitielles de Cajal (ANO1+ et KIT+ ; flèches jaunes) et des neurones entériques (TUBB3⁺ ; flèches rouges). Barres d’échelle : 100 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/69673/69673fig4large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/69673/69673fig5.jpg" data-altupdatedat="1783400419000" data-alt="Figure 5"> 
Figure 5 : Images confocales d’un rouleau suisse d’un estomac murin entier : MYH11, KIT, E-cadherin. Panneaux supérieurs : Images confocales représentatives brodées d’un Swiss roll gastrique d’une souris C57BL/6J femelle âgée de 8 semaines, montrant l’immunocoloration pour MYH11 (vert), KIT (cyan), E-cadherine (jaune) et noyaux (bleu). L’ensemble de l’estomac gondé, y compris le fundus, le corpus et l’antrum, est visualisé. Barres d’échelle : 1000 μm. Panneaux inférieurs : Vues agrandies de la région délimitées par la boîte blanche pointillée dans les panneaux supérieurs. Des lignes en pointillés blancs délimitent l’épithélium muqueusement (E-cadherine) et la couche musculaire (MYH11). Les flèches blanches indiquent les cellules interstitielles KIT+ du Cajal (ICC). Barres d’échelle : 100 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/69673/69673fig5large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>

Cartographie spatiale améliorée des couches de muscles gastriques de souris à l’aide d’une technique modifiée du Swiss roll

Spatial "omics" technologies provide unprecedented opportunities to study the biology and interactions of individual cells of the gastric neuromuscular ...

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La section suivante décrit les performances de gastrectomie verticale chez les souris. Il s’agit d’un type de chirurgie de perte de poids qui implique le retrait d’environ 70 % de l’estomac.

Un modèle murin de gastrectomie verticale

L’intestin est vital pour la digestion et l’absorption. Chaque région - duodénum, jéjunum, iléon, côlon - remplit des fonctions distinctes en raison de structures cellulaires uniques. L’étude de la physiologie intestinale nécessite une analyse méticuleuse des tissus. Ce protocole décrit la fixation et le traitement des tissus à l’aide de la technique du rouleau suisse, assurant une immunocoloration précise grâce à une préservation et une orientation appropriées des tissus.

Protocole optimisé pour les Swiss Rolls intestinaux et la coloration immunofluorescente des tissus inclus dans la paraffine

Cette étude présente une méthode d’imagerie 3D utilisant des tissus intestinaux entiers et la microscopie multiphotonique pour quantifier le mucus sécrété, permettant une analyse volumétrique précise et la visualisation de la dynamique du mucus en réponse à des stimuli comme le chlorure de carbamoylcholine.

Quantification tridimensionnelle du mucus intestinal à l’aide de l’imagerie tissulaire intégrale

Découvrez une technique Swiss roll modifiée pour l'immunomarquage de l'estomac entier chez la souris. Cette méthode permet de visualiser toutes les régions gastriques dans une seule coupe cryo tout en préservant l'orientation spatiale et la qualité d'image.

Cartographie spatiale améliorée des couches de muscles gastriques de souris à l’aide d’une technique modifiée du Swiss roll

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