Name: Essai par blot de points pour détecter les niveaux globaux de modification de l’ARNde la N 6-méthyladenosine (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-02-06T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 40 s
Description: Découvrez l'essai par blot de points pour évaluer les niveaux globaux de m6A dans l'ARN. Cette méthode semi-quantitative rapide permet le dépistage routinier et l'analyse fonctionnelle préliminaire des modifications épigénétiques de l'ARN.

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<ol><li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((N6-methyladenosine-dependent+regulation+of+messenger+RNA+stability%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">N6-methyladenosine-dependent regulation of messenger RNA stability.</a> Nature. 505 (7481), 117-120 (2014).</li>
<li>Zhang, Z., Wei, W., Wang, H., Dong, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((N6-methyladenosine-sculpted+regulatory+landscape+of+noncoding+RNA%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Oncol%22%5BJournal%5D)">N6-methyladenosine-sculpted regulatory landscape of noncoding RNA.</a> Front Oncol. 11 (1), 743990(2021).</li>
<li>Hsu, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+RNA-binding+protein+FMRP+facilitates+the+nuclear+export+of+N6-methyladenosine-containing+mRNAs%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">The RNA-binding protein FMRP facilitates the nuclear export of N6-methyladenosine-containing mRNAs.</a> J Biol Chem. 294 (52), 19889-19895 (2019).</li>
<li>Chen, X. -Y., Zhang, J., Zhu, J. -S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+m6A+RNA+methylation+in+human+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cancer%22%5BJournal%5D)">The role of m6A RNA methylation in human cancer.</a> Mol Cancer. 18 (1), 103(2019).</li>
<li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+characterization+and+clinical+relevance+of+m6A+regulators+across+33+cancer+types%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cancer%22%5BJournal%5D)">Molecular characterization and clinical relevance of m6A regulators across 33 cancer types.</a> Mol Cancer. 18 (1), 137(2019).</li>
<li>Hu, Y., Zhao, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+m6A+in+osteoporosis%2C+arthritis+and+osteosarcoma+%28review%29%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Ther+Med%22%5BJournal%5D)">Role of m6A in osteoporosis, arthritis and osteosarcoma (review).</a> Exp Ther Med. 22 (3), 926(2021).</li>
<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((N6-methyladenosine+%28m6A%29+modification+in+osteosarcoma%3A+expression%2C+function+and+interaction+with+noncoding+RNAs-an+updated+review%5BTitle%5D)+AND+%22Epigenetics%22%5BJournal%5D)">N6-methyladenosine (m6A) modification in osteosarcoma: expression, function and interaction with noncoding RNAs-an updated review.</a> Epigenetics. 18 (1), 2260213(2023).</li>
<li>Zhu, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+N6methyladenosine+modification+residues+%28review%29%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Detection of N6methyladenosine modification residues (review).</a> Int J Mol Med. 43 (6), 2267-2278 (2019).</li>
<li>Wang, Y., Jia, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+methods+of+epitranscriptomic+mark+N6-methyladenosine%5BTitle%5D)+AND+%22Essays+Biochem%22%5BJournal%5D)">Detection methods of epitranscriptomic mark N6-methyladenosine.</a> Essays Biochem. 64 (6), 967-979 (2020).</li>
<li>Stejskal, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+analysis+by+LC-MS%2FMS+of+N6-methyladenosine+and+inosine+in+mRNA+reveal+complex+incidence%5BTitle%5D)+AND+%22RNA%22%5BJournal%5D)">Global analysis by LC-MS/MS of N6-methyladenosine and inosine in mRNA reveal complex incidence.</a> RNA. 31 (4), 514-528 (2025).</li>
<li>Ensinck, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((m6A-ELISA%2C+a+simple+method+for+quantifying+N6-methyladenosine+from+mRNA+populations%5BTitle%5D)+AND+%22RNA%22%5BJournal%5D)">m6A-ELISA, a simple method for quantifying N6-methyladenosine from mRNA populations.</a> RNA. 29 (5), 705-712 (2023).</li>
<li>Liu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((m6A+mRNA+methylation+regulates+AKT+activity+to+promote+the+proliferation+and+tumorigenicity+of+endometrial+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">m6A mRNA methylation regulates AKT activity to promote the proliferation and tumorigenicity of endometrial cancer.</a> Nat Cell Biol. 20 (9), 1074-1083 (2018).</li>
<li>Zhang, M., Li, Q., Xie, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Bayesian+hierarchical+model+for+analyzing+methylated+RNA+immunoprecipitation+sequencing+data%5BTitle%5D)+AND+%22Quant+Biol+%28Beijing%29%22%5BJournal%5D)">A Bayesian hierarchical model for analyzing methylated RNA immunoprecipitation sequencing data.</a> Quant Biol (Beijing). 6 (3), 275-286 (2018).</li>
<li>Dominissini, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Topology+of+the+human+and+mouse+m6A+RNA+methylomes+revealed+by+m6A-seq%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Topology of the human and mouse m6A RNA methylomes revealed by m6A-seq.</a> Nature. 485 (7397), 201-206 (2012).</li>
<li>Mishra, T., Phillips, S., Zhao, Y., Wilms, B., He, C., Wu, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epitranscriptomic+m6A+modifications+during+reactivation+of+HIV-1+latency+in+CD4%2B+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22mBio%22%5BJournal%5D)">Epitranscriptomic m6A modifications during reactivation of HIV-1 latency in CD4+ T cells.</a> mBio. 15 (11), e0221424(2024).</li>
<li>Li, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((METTL16+promotes+lipid+metabolic+reprogramming+and+colorectal+cancer+progression%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Biol+Sci%22%5BJournal%5D)">METTL16 promotes lipid metabolic reprogramming and colorectal cancer progression.</a> Int J Biol Sci. 21 (11), 4782-4797 (2025).</li>
<li>Ren, F., Cai, Y., Song, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((OTUD7B+stabilization+by+METTL14-mediated+m6A+methylation+drives+HIF-1%CE%B1+expression+in+esophageal+squamous+cell+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Oncol+Res%22%5BJournal%5D)">OTUD7B stabilization by METTL14-mediated m6A methylation drives HIF-1α expression in esophageal squamous cell carcinoma.</a> Oncol Res. 33 (8), 2055-2074 (2025).</li>
<li>Chen, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((WTAP+facilitates+progression+of+hepatocellular+carcinoma+via+m6A-HuR-dependent+epigenetic+silencing+of+ETS1%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cancer%22%5BJournal%5D)">WTAP facilitates progression of hepatocellular carcinoma via m6A-HuR-dependent epigenetic silencing of ETS1.</a> Mol Cancer. 18 (1), 127(2019).</li>
<li>Gu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Upregulation+of+circGDI2+inhibits+tumorigenesis+by+stabilizing+the+expression+of+RNA+m6A+demethylase+FTO+in+oral+squamous+cell+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Noncoding+RNA+Res%22%5BJournal%5D)">Upregulation of circGDI2 inhibits tumorigenesis by stabilizing the expression of RNA m6A demethylase FTO in oral squamous cell carcinoma.</a> Noncoding RNA Res. 10 (1), 140-152 (2025).</li>
<li>Ura, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+dot+blot+analyses+of+blood-group-related+antigens+in+paired+normal+and+malignant+human+breast+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Cancer%22%5BJournal%5D)">Quantitative dot blot analyses of blood-group-related antigens in paired normal and malignant human breast tissues.</a> Int J Cancer. 50 (1), 57-63 (1992).</li>
<li>Reed, K. C., Mann, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+transfer+of+DNA+from+agarose+gels+to+nylon+membranes%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">Rapid transfer of DNA from agarose gels to nylon membranes.</a> Nucleic Acids Res. 13 (20), 7207-7221 (1985).</li>
<li>Herrin, D. L., Schmidt, G. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid%2C+reversible+staining+of+northern+blots+prior+to+hybridization%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechniques%22%5BJournal%5D)">Rapid, reversible staining of northern blots prior to hybridization.</a> Biotechniques. 6 (3), 196-200 (1988).</li>
<li>Rio, D. C., Ares, M., Hannon, G. J., Nilsen, T. W. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aRio%2C+DC+%22RNA%3A+A+Laboratory+Manual%22">RNA: A Laboratory Manual</a>. , Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor. NY. (2010).</li>
<li>Sambrook, J., Russell, D. W. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSambrook%2C+J+%22Molecular+Cloning%3A+A+Laboratory+Manual%22">Molecular Cloning: A Laboratory Manual</a>. , 3rd ed, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY. (2001).</li>
<li>Helm, M., Motorin, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detecting+RNA+modifications+in+the+epitranscriptome%3A+Predict+and+validate%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Genet%22%5BJournal%5D)">Detecting RNA modifications in the epitranscriptome: Predict and validate.</a> Nat Rev Genet. 18 (5), 275-291 (2017).</li>
<li>Meyer, K. D., Jaffrey, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+dynamic+epitranscriptome%3A+N6-methyladenosine+and+gene+expression+control%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">The dynamic epitranscriptome: N6-methyladenosine and gene expression control.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 15 (5), 313-326 (2014).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>3-dézaadénosine (3-DAA)</td><td>MCE</td><td>HY-W013332A</td><td>1 mg</td></tr><tr><td>Anticorps monoclonal anti-m6A</td><td>Proteintech</td><td>68055-1-IG</td><td>50 & mu ; L</td></tr><tr><td>Albumine sérique bovine (BSA, fraction V)</td><td>BioFroxx</td><td>4240GR100&nbsp ;</td><td>100 g</td></tr><tr><td>Système d’imagerie ChemiDoc MP</td><td>BIO RAD</td><td>12003154</td><td></td></tr><tr><td>DMEM Glucose élevé</td><td>WISENT</td><td>319-005-CL</td><td>500 mL</td></tr><tr><td>Spectrophotomètre DS-11</td><td>DeNOVIX</td><td>DS-11</td><td></td></tr><tr><td>Kit de purification ARN EZ-press</td><td>EZB&nbsp ;</td><td>B0004DP</td><td>100 préparations</td></tr><tr><td>FBS - Qualité supérieure</td><td>WISENT</td><td>086-150</td><td>500 mL</td></tr><tr><td>IgG anti-souris de chèvre conjugué HRP (H+L)</td><td>Beyotime</td><td>A0216</td><td>1 mL</td></tr><tr><td>Immobilon Western chemiluminescent HRP substrat &nbsp ;</td><td>Millipore</td><td>WBKLS0500</td><td>2 et fois ; 250 mL</td></tr><tr><td>Acide méclofénamique (MA)</td><td>MCE</td><td>HY-117275</td><td>1 mg</td></tr><tr><td>Solution de coloration au bleu de méthylène</td><td>Solarbio</td><td>G1300</td><td>0,1 %, 100 mL</td></tr><tr><td>Membrane de transfert en nylon</td><td>LABSELECT</td><td>TM-NY-XS-45</td><td>7.4 et hors ; 8,5 cm, 0,45 & mu ; m, 10 PCS/BAG</td></tr><tr><td>Tampon PBS (poudre sèche prête à l’emploi)</td><td>biosharp</td><td>BL601A</td><td>pH : 7,2-7,4, 2 L/sac</td></tr><tr><td>Dodécyle sulfate de sodium (SDS)</td><td>Sigma</td><td>L5750-500G</td><td>500 g</td></tr><tr><td>Poudre de prémélange tampon TBS</td><td>Sangon</td><td>&nbsp ; A510025-0001</td><td>1EA (243,9 g de poudre)</td></tr><tr><td>TrypLE Express Enzyme</td><td>Gibco</td><td>12604-021</td><td>1 et fois, 500 mL</td></tr><tr><td>Préadolescent-20</td><td>Sangon</td><td>A600560-0500</td><td>500 mL</td></tr><tr><td>Réticulateur UV</td><td>UVP</td><td>CL-1000</td><td></td></tr></tbody></table>

essai par blot de points pour détecter les niveaux globaux de modification de l’arnde la n 6-méthyladenosine

Dot Blot Assay for Detecting Global N6-Methyladenosine RNA Modification Levels

Essai par blot de points pour détecter les niveaux globaux de modification de l’ARNde la N 6-méthyladenosine

N6-methyladenosine (m&#8310;A) is the most abundant internal modification in eukaryotic messenger RNA (mRNA) and serves as a key regulator of ...

dot-blot-assay-for-detecting-global-n6-methyladenosine-rna

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Médecine

Une méthode Northern Blot modifiée pour mesurer N6- -methyladenosine (m 6 a) des modifications dans l' ARN est décrite. La méthode actuelle peut détecter des modifications dans divers ARNs et des contrôles en vertu de divers modèles expérimentaux.

Une méthode pour l&#39;ARN de mesure<em&gt; N</em<sup&gt; 6</sup&gt; -methyladenosine Modifications dans les cellules et de tissus

Nous décrivons ici un protocole pour la caractérisation biochimique de l’enzyme de RNA-modification de la levure, Mod5 et discuter de comment ce protocole pourrait être appliqué à d’autres enzymes de modification des RNA.

Un test In Vitro pour détecter l’activité ARNt-isopentényl transférase

Ici nous présentons un protocole pour le clivage DNAzyme-dépendant de l'ARN. Cela permet une analyse rapide et dépendante du site de l'ARN 2'-O-méthylation. Cette approche peut être utilisée pour l'évaluation préliminaire ou majeure de l'activité du snoRNA.

Analyse Dépendante de DNAzyme de rRNA 2'-O-Methylation

Ici, un analyse in vitro sans anticorps pour l'analyse directe de l'activité de méthyltransferase sur l'ARN synthétique ou in vitro transcrit est décrit.

Analyse d'activité sans anticorps pour l'analyse de l'activité de méthyltransferase d'ARN

Nous présentons un protocole détaillé de réparation de petite bibliothèque d'ARN avec moins de biais que les méthodes standard et une sensibilité accrue pour les ARN 2'-O-méthyle. Ce protocole peut être suivi à l'aide de réactifs faits maison pour économiser des coûts ou en utilisant des kits pour plus de commodité.

Améliorer l'ARN-seq : moins de biais et une meilleure détection des ARN 2'-O-Methyl

L’essai méthylé d’immunoprécipitation d’ARN est une méthode anticorps-basée employée pour enrichir pour des fragments méthylés d’ARN. Couplé à un séquençage profond, il conduit à l’identification des transcriptions portant la modification m5C.

Essai méthylé d’immunoprécipation d’ARN pour étudier la modification m5C dans Arabidopsis

Une méthode précise et reproductible pour la quantification in vivo des nucléosides/nucléotides dans les plantes est décrite ici. Cette méthode utilise une CLHP-MS/MS.

Préparation d’échantillons de plantes pour la mesure de la teneur en nucléosides/nucléotides avec une CLHP-MS/MS

Le rôle des modifications de l’ARN dans les infections virales commence tout juste à être exploré et pourrait mettre en évidence de nouveaux mécanismes d’interaction viral-hôte. Dans ce travail, nous fournissons un pipeline pour étudier les modifications de l’ARN m6A et m5C dans le contexte des infections virales.

Explorer les épitranscriptomes m6A et m5C lors d’une infection virale : un exemple avec le VIH

Les modifications post-transcriptionnelles de l’ARN représentent une couche de régulation de la traduction sous-étudiée qui a récemment été liée à la plasticité du système nerveux central. Ici, la préparation des échantillons et l’approche de chromatographie liquide-spectrométrie de masse en tandem sont décrites pour la caractérisation simultanée de nombreuses modifications de l’ARN dans des neurones uniques.

Caractérisation des modifications de l’ARN dans des neurones uniques à l’aide de la spectrométrie de masse

Le protocole fournit des instructions pour modifier l’ARN avec du sulfate de diméthyle pour les expériences de profilage mutationnel. Il comprend le sondage in vitro et in vivo avec deux méthodes alternatives de préparation de bibliothèque.

Criblage de la structure de l’ARN avec le profilage mutationnel du sulfate de diméthyle avec séquençage in vitro et dans les cellules

Ce protocole fournit une approche détaillée pour évaluer les niveaux de modification de m6Ad’ARN spécifique à l’aide de MeRIP-qPCR.

Test MeRIP-qPCR pour détecter les niveaux de modification m6A d’ARN spécifique dans les cellules d’ostéosarcome

Découvrez l'essai par blot de points pour évaluer les niveaux globaux de m6A dans l'ARN. Cette méthode semi-quantitative rapide permet le dépistage routinier et l'analyse fonctionnelle préliminaire des modifications épigénétiques de l'ARN.

Essai par blot de points pour détecter les niveaux globaux de modification de l’ARN^{de la N} 6-méthyladenosine

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