Name: Test MeRIP-qPCR pour détecter les niveaux de modification m6A d’ARN spécifique dans les cellules d’ostéosarcome (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-12-30T13:55:00.000+00:00
Duration: 5 min 16 s
Description: Découvrez la méthode MeRIP-qPCR pour détecter les modifications m6A d'ARN spécifique dans les cellules d'ostéosarcome. Cette technique sensible offre une alternative économique aux méthodes de séquençage.

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<ol><li>Ma, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+interplay+between+m6A+RNA+methylation+and+noncoding+RNA+in+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hematol+Oncol%22%5BJournal%5D)">The interplay between m6A RNA methylation and noncoding RNA in cancer.</a> J Hematol Oncol. 12 (1), 121(2019).</li>
<li>Zhu, Z. M., Huo, F. C., Zhang, J., Shan, H. J., Pei, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crosstalk+between+m6A+modification+and+alternative+splicing+during+cancer+progression%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Crosstalk between m6A modification and alternative splicing during cancer progression.</a> Clin Transl Med. 13 (10), e1460(2023).</li>
<li>Hu, T., Wang, G., Wang, D., Deng, Y., Wang, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((m6A+methylation+modification%3A+Potential+pathways+to+suppress+osteosarcoma+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Immunopharmacol%22%5BJournal%5D)">m6A methylation modification: Potential pathways to suppress osteosarcoma metastasis.</a> Int Immunopharmacol. 145, 113759(2025).</li>
<li>Nagarajan, A., Janostiak, R., Wajapeyee, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dot+blot+analysis+for+measuring+global+N6-methyladenosine+modification+of+RNA%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Dot blot analysis for measuring global N6-methyladenosine modification of RNA.</a> Methods Mol Biol. 1870, 263-271 (2019).</li>
<li>Yang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+progress+in+strategies+to+profile+transcriptomic+m6A+modifications%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Current progress in strategies to profile transcriptomic m6A modifications.</a> Front Cell Dev Biol. 12, 1392159(2024).</li>
<li>McIntyre, A. B. R., Gokhale, N. S., Cerchietti, L., Jaffrey, S. R., Horner, S. M., Mason, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Limits+in+the+detection+of+m6A+changes+using+MeRIP%2Fm6A-seq%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Limits in the detection of m6A changes using MeRIP/m6A-seq.</a> Sci Rep. 10 (1), 6590(2020).</li>
<li>Meyer, K. D., Saletore, Y., Zumbo, P., Elemento, O., Mason, C. E., Jaffrey, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comprehensive+analysis+of+mRNA+methylation+reveals+enrichment+in+3%27+UTRs+and+near+stop+codons%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Comprehensive analysis of mRNA methylation reveals enrichment in 3' UTRs and near stop codons.</a> Cell. 149 (7), 1635-1646 (2012).</li>
<li>Zheng, H. X., Zhang, X. S., Sui, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+the+profiling+of+N6-methyladenosine+%28m6A%29+modifications%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol+Adv%22%5BJournal%5D)">Advances in the profiling of N6-methyladenosine (m6A) modifications.</a> Biotechnol Adv. 45, 107656(2020).</li>
<li>Matsuzawa, S., Wakata, Y., Ebi, F., Isobe, M., Kurosawa, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+validation+of+monoclonal+antibodies+against+N6-methyladenosine+for+the+detection+of+RNA+modifications%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Development and validation of monoclonal antibodies against N6-methyladenosine for the detection of RNA modifications.</a> PLoS One. 14 (10), e0223197(2019).</li>
<li>Law, J., Günther, S., Watanabe, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epitranscriptome+mapping+of+N6-methyladenosine+using+m6A+immunoprecipitation+with+high-throughput+sequencing+in+skeletal+muscle+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Epitranscriptome mapping of N6-methyladenosine using m6A immunoprecipitation with high-throughput sequencing in skeletal muscle stem cells.</a> Methods Mol Biol. 2640, 431-443 (2023).</li>
<li>Mathur, L., Jung, S., Jang, C., Lee, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+analysis+of+m6A+RNA+modification+by+LC-MS%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">Quantitative analysis of m6A RNA modification by LC-MS.</a> STAR Protoc. 2 (3), 100724(2021).</li>
<li>Slama, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+enrichment+factors+for+modified+RNA+in+MeRIP+experiments%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Determination of enrichment factors for modified RNA in MeRIP experiments.</a> Methods. 156, 102-109 (2019).</li>
<li>Guo, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-molecule+m6A+detection+empowered+by+endogenous+labeling+unveils+complexities+across+RNA+isoforms%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell%22%5BJournal%5D)">Single-molecule m6A detection empowered by endogenous labeling unveils complexities across RNA isoforms.</a> Mol Cell. 85 (6), 1233-1246.e7 (2025).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>100 % d’éthanol</td><td>Shanghai Titan Scientific Co., Ltd., Amérique</td><td>1158566</td><td></td></tr><tr><td>143B</td><td>ATCC, Amérique</td><td>ATCC CRL-8303TM</td><td></td></tr><tr><td>2 et fois ; SYBR Mix QPCR vert</td><td>Beijing Qihengxing Biotechnology Co., Ltd., Chine</td><td>FS-Q1002</td><td></td></tr><tr><td>Denovix DS-11 & nbsp ;</td><td>Denovix</td><td>DS-11&nbsp ;</td><td>Spectrophotomètre</td></tr><tr><td>Médium DMEM</td><td>CORPORATION WISENT, Chine</td><td>319-005-CL</td><td></td></tr><tr><td>Milieu DMEM/F-12</td><td>Gibco, Amérique</td><td>11320033</td><td></td></tr><tr><td>ÉpiQuik CUT & Kit d’enrichissement ARN RUN m6A (MeRIP)</td><td>Epigentek, Amérique</td><td>P-9018-24</td><td></td></tr><tr><td>Sérum fœtal bovin</td><td>CORPORATION WISENT, Chine</td><td>086-150</td><td></td></tr><tr><td>hFOB1.19</td><td>Banque cellulaire de l’Académie chinoise des sciences, Chine</td><td>GNHu14</td><td></td></tr><tr><td>Kit de test de méthylation de l’ARN m6A</td><td>Abcam, Angleterre</td><td>ab185912</td><td></td></tr><tr><td>Kit de transcription inverse à microARN</td><td>EZBioscience-EZB, Amérique</td><td>A0010CGQ</td><td></td></tr><tr><td>Système temps réel</td><td>BIO-RAD, Amérique</td><td>CFX96</td><td></td></tr><tr><td>Kit d’extraction totale d’ARN</td><td>EZBioscience-EZB, Amérique</td><td>B0004DP</td><td></td></tr><tr><td>TrypLE Express Enzyme</td><td>Gibco, Amérique</td><td>12604021</td><td></td></tr></tbody></table>

test merip-qpcr pour détecter les niveaux de modification m6a d’arn spécifique dans les cellules d’ostéosarcome

MeRIP-qPCR Assay for Detecting m6A Modification Levels of Specific RNA in Osteosarcoma Cells

Test MeRIP-qPCR pour détecter les niveaux de modification m6A d’ARN spécifique dans les cellules d’ostéosarcome

RNA epitranscriptomic modification plays a critical role in the initiation and development of various cancers, among which N6-methyladenosine (m6A) is the ...

merip-qpcr-assay-for-detecting-m6a-modification-levels-specific-rna

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Nous allons démontrer la configuration et l'analyse des pré-microARN de 96 puits pour les tableaux QPCR aide d'un robot ainsi que par la main avec une pipette multicanaux Thermo Scientific Matrix.

Profilage de la pré-micro ARNs et micro-ARN en utilisant quantitative PCR en temps réel (qPCR) Arrays

Quantitative de réaction en chaîne polymérase en temps réel (qPCR) est une méthode rapide et sensible pour enquêter sur les niveaux d'expression de microARN (miARN différents) des molécules dans des échantillons tumoraux. En utilisant cette expression méthode de centaines de molécules différentes miARN peuvent être amplifiés, quantifiés, analysés et partir du même modèle d'ADNc.

Détection MicroRNA dans les tumeurs prostatiques par quantitative PCR en temps réel (qPCR)

La présence de cellules souches cancéreuses (CCF) dans sarcomes osseux a récemment été liée à leur pathogénie. Dans cet article, nous présentons l'isolement des cellules souches cancéreuses à partir de cultures de cellules primaires obtenues à partir de biopsies humaines d'ostéosarcome classique (OS) en utilisant la capacité de CSCs à croître dans des conditions non adhérentes.

Création de souches du cancer de cultures de cellules de Human ostéosarcome conventionnel

Une méthode Northern Blot modifiée pour mesurer N6- -methyladenosine (m 6 a) des modifications dans l' ARN est décrite. La méthode actuelle peut détecter des modifications dans divers ARNs et des contrôles en vertu de divers modèles expérimentaux.

Une méthode pour l&#39;ARN de mesure<em&gt; N</em<sup&gt; 6</sup&gt; -methyladenosine Modifications dans les cellules et de tissus

Nous présentons ici une méthode de culture cellulaire pour induire des transitions mésenchymateuses-épithéliale (MET) dans les cellules de sarcome basées sur l'expression ectopique combinée de microARN-200 membres de la famille et comme grainyhead 2 (GRHL2). Cette méthode est adaptée pour mieux comprendre l'impact biologique de la plasticité phénotypique sur l'agressivité du cancer et des traitements.

L&#39;induction de mésenchymateuses-épithélial Transitions dans les cellules Sarcome

Ici, une implantation orthotopique syngénique suivie d’une procédure d’amputation de l’ostéosarcome avec métastases pulmonaires spontanées pouvant être utilisée pour l’investigation préclinique de la biologie des métastases et le développement de nouvelles thérapies est décrite.

Un modèle de rat Sprague Dawley d’ostéosarcome orthotopique syngénique avec amputation pour contrôler le taux de métastases

Le présent protocole décrit une méthode d’hybridation in situ par fluorescence de l’ARN pour localiser les ARNlnc dans les cellules d’ostéosarcome humain.

Hybridation in situ par fluorescence de l’ARN pour la localisation de longs ARN non codants dans les cellules d’ostéosarcome humain

Le protocole décrit un test d’hybridation par immunofluorescence en tandem avec du tissu fixé au formol et inclus dans de la paraffine pour détecter et quantifier simultanément les microARN et les protéines multiplexées.

Amplification et reconnaissance de microARN par hybridation in situ d’acides nucléiques verrouillés en tant que nouvelle méthode de détection et de quantification

Ici, nous présentons un protocole pour évaluer semi-quantitativement les niveaux globaux de m⁶A en utilisant le blot de points. L’ARN total est extrait, dénaturé, taché sur une membrane en nylon, sondé avec un anticorps anti-m⁶A, et visualisé par chimiluminescence. L’intensité du signal, quantifiée par l’analyse en niveaux de gris ImageJ, reflète l’abondance relative de méthylation, offrant un flux de travail reproductible pour la recherche.

Essai par blot de points pour détecter les niveaux globaux de modification de l’ARNde la N 6-méthyladenosine

Ce protocole expérimental offre une méthode stable, rentable et efficace qui combine le knockdown de l’ARNnc avec des tests formant des colonies afin de quantifier l’effet de l’ARNnc sur la prolifération cellulaire de l’ostéosarcome.

Essai de formation de colonie détectant la capacité proliflective des cellules d’ostéosarcome à élimination d’ARNCn

Découvrez la méthode MeRIP-qPCR pour détecter les modifications m6A d'ARN spécifique dans les cellules d'ostéosarcome. Cette technique sensible offre une alternative économique aux méthodes de séquençage.

Test MeRIP-qPCR pour détecter les niveaux de modification m⁶A d’ARN spécifique dans les cellules d’ostéosarcome

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