Name: Générer des cellules iPS de MEFS travers lexpression forcée de Sox-2, Oct-4, c-Myc et Klf4 (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-04-07T10:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 2 s
Description: Découvrez la génération de cellules iPS à partir de fibroblastes embryonnaires de souris en utilisant un système lentiviral inducible avec Oct4, Sox2, c-Myc et Klf4. Cette méthode permet de reprogrammer des cellules différenciées vers un état pluripotent pour la recherche en médecine régénérative.

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Etape 1: Dégeler les cellules 293 et ​​la plaque pour la production de lentivirus. <ol><li> Préparer 9 ml de DMEM + support dans un tube de 15 ml. </li><li> Retirer un flacon de 293 stocks congelés à partir du réservoir d&#39;azote liquide et mettre le flacon dans un bain à 37 ° C jusqu&#39;à ce que la plupart des cellules (mais pas tous) sont décongelés. </li><li> Éliminer les cellules du flacon de gel et le placer dans le tube 15ml de l&#39;étape 1. </li><li> Centrifuger à 180g pendant 5 min, puis jeter le surnageant. </li><li> Resuspendre les cellules avec 10 ml de DMEM + support, et le transfert d&#39;une gélatine à revêtement de 100 mm plat. Incuber les cellules dans un 37 ° C, 5% de CO 2 incubateur jusqu&#39;à ce qu&#39;ils soient confluentes à 80-90%. </li><li> Passage des 293 cellules: les cellules de lavage avec du PBS, aspirer le PBS et ajouter 4 ml par 10 cm de plat de 0,05% trypsin/0.53 mM d&#39;EDTA, et incuber pendant 1 min à 37 ° C. </li><li> Détachez les cellules à partir des plats en tapant, resuspendre avec 10 ml de DMEM + support, et le transfert d&#39;un tube de 15 ml. Centrifuger à 180g pendant 5 min, et aspirer le surnageant. </li><li> Ajouter le volume approprié de DMEM + support, et briser les cellules dans une suspension cellulaire unique par aspiration et refoulement à plusieurs reprises. </li><li> Comptez le nombre de cellules et d&#39;ajuster la concentration à 8x10 5 cellules par ml avec le milieu de PF. </li><li> Cellules des semences à 8x10 6 cellules (10 ml) par boîte de culture de 100 mm et incuber une nuit à 37 ° C, 5% de CO 2. </li></ol> Étape 2: Transfecter des cellules avec des plasmides 293 lentivirus et le virus de la récolte <ol><li> Pour chaque plaque de 10 cm, utiliser 10 ug de FUW-tetO-ADNc (Oct4, Sox2, Klf4 ou c-Myc) épine dorsale des lentivirus avec 2.5ug des PMD-G et 7,5 ug d&#39;pPax2. </li><li> Alors que les trois plasmides aliquotage dans un tube, livrer 30μl de réactif de transfection Fugene 6 dans un second tube contenant 500μl de DMEM sans sérum et mélanger délicatement avec le doigt tapant et incuber pendant 5 min à température ambiante. </li><li> Ajouter le mélange d&#39;ADN au goutte-à-goutte dans le tube Fugene 6/DMEM-containing, mélanger délicatement en tapotant des doigts et incuber pendant 20 min. </li><li> Ajouter l&#39;ADN / 6 Fugene goutte à goutte complexes dans le plat de 293, et incuber une nuit à 37 ° C, 5% de CO 2. </li><li> Le lendemain matin: Aspirer le réactif de transfection contenant du milieu, ajoutez 5 ml de milieu de cellules ES frais, et le retour des cellules dans l&#39;incubateur. </li><li> À 48 heures et 72 heures après la transfection, de recueillir le support de la 293 en utilisant une de 10 ml seringue stérile à usage unique, le filtrant à travers un filtre de 0,45 um de taille de l&#39;acétate de cellulose, des pores, et transférer dans un tube de 15 ml. </li><li> Concentrer le surnageant de virus par ultracentrifugation. Reprendre le culot de virus dans le volume désiré et faire amixture à parts égales du milieu contenant Oct-3/4-, Sox2-, Klf4-et c-Myc-lentivirus. </li><li> Tout en faisant le virus, de préparer ou de Oct4-neo/rtTA Oct4-GFP/rtTA FAE (passage &lt;3) à 90% de confluence dans des plats de 10 cm (2x10 6 cellules par boîte) </li><li> Aspirer le milieu de culture et laver avec 10 ml de PBS. </li><li> Jeter PBS, ajouter 1 ml par boîte de 0,05% trypsin/0.53 mM d&#39;EDTA, et incuber à 37 ° C pendant 10 min. </li><li> Ajouter 9 ml de milieu de culture, de suspendre les cellules à une seule cellule, et le transfert d&#39;un tube de 15 ml. </li><li> Comptez le nombre de cellules, et d&#39;ajuster la concentration à 8x10 4 cellules par ml. Transférer 10 ml de suspension cellulaire (8x10 5 cellules) pour un plat de 10 cm recouvert d&#39;gélatine. Incuber le plat une nuit à 37 ° C, 5% de CO 2. </li><li> Aspirer le support d&#39;un plat de fibroblastes, et ajouter 10 ml de milieu contenant le virus. Incuber les cellules à partir de 4 h à une nuit à 37 ° C, 5% de CO 2. </li><li> Après 24 aspirer le support d&#39;un plat de fibroblastes, et ajouter 10 ml de milieu de cellules ES frais. </li><li> Remplacer régulièrement moyennes de cellules ES avec la doxycycline milieu contenant de lancer l&#39;expression des quatre gènes; en d&#39;autres termes, initier une reprogrammation. </li><li> Si vous utilisez un journaliste néo-Oct4, puis de lancer la section des médicaments à tout moment entre 6 et 9 jours. </li><li> Changer le support tous les jours jusqu&#39;à les colonies deviennent assez gros pour être ramassé. Colonies doit d&#39;abord devenir visibles environ une semaine après le début de la reprogrammation. Ils devraient devenir suffisamment importante pour être ramassé autour du jour 20. </li></ol> Étape 3: Reprenant les colonies iPS La veille des vendanges: <ol><li> Seed le nombre requis de gélatine revêtement des plaques 24 puits avec des γ-irradiés DR4 FAE </li></ol> Cueillette des clones sur le Jour 1: <ol><li> Flux des colonies sur les plaques de 1-2 heures avant la cueillette. </li><li> Ajouter 15 ul de PBS dans les puits d&#39;un plat à fond en V de 96 puits. </li><li> Laver la capsule contenant les colonies à être cueillies une fois avec du PBS et ajouter 10 ml de PBS dans le plat. </li><li> Choisissez les colonies avec les petits conseils pipette 5uL (réglez le Pipetman P20 sur 4 pi). Transfert colonies d&#39;un puits dans le plat de 96 puits. </li><li> Ajouter 20 ul de trypsine dans chaque puits en utilisant le multi-canal (12) pipetor. Pipet haut et en bas trois fois. Incuber à 37 ° C pendant 4 minutes. </li><li> Ajouter 100 pi de milieu ES pour les colonies trypsinisées. Pipet haut et en bas 10 fois. Transfert 6 clones à une époque de l&#39;antenne de 96 puits dans un plat de 24 puits en utilisant une pointe à chaque position d&#39;autres sur le pipetor 12 place. </li><li> Cultiver les cellules sur la plaque de 24 puits dans un 37 ° C, 5% de CO 2 de l&#39;incubateur jusqu&#39;à atteindre 80-90% des cellules de confluence, l&#39;alimentation quotidienne avec un milieu de cellules ES. Cellules sera probablement prêt à se développer dans 3-7 jours. </li></ol> Etape 4 <ol><li> Expansion des cellules iPS <ol><li> Aspirer le milieu, et laver les cellules avec 1 ml de PBS. </li><li> Retirer du PBS complètement, ajouter 0,1 ml de 0,25% de trypsine / EDTA 1 mM et incuber à 37 ° C pendant 10 min. </li><li> Ajouter 0,4 ml de milieu ES et les cellules en suspension de pipetage haut et bas pour suspension cellulaire unique. </li><li> Transférer la suspension cellulaire à un puits de la plaque de 6 puits, ajouter 1,5 ml de cellules ES moyennes, et incuber dans un 37 ° C, 5% de CO 2 incubateur jusqu&#39;à atteindre 80-90% des cellules de confluence dans des plaques 6 puits. A ce point, préparer stock congelé des cellules, comme suit. </li></ol></li><li> Préparation de stock gel <ol><li> Aspirer le milieu, et laver les cellules avec 2 ml de PBS. </li><li> Retirer du PBS complètement, ajoutez 0,5 ml de 0,25% de trypsine / EDTA 1 mM et incuber à 37 ° C pendant 10 min. </li><li> Ajouter 2 ml de milieu ES et les cellules en suspension de pipetage haut et bas pour suspension cellulaire unique. </li><li> Transférer la suspension cellulaire dans un tube de 15 ml, comptez le nombre de cellules et de spin-down des cellules. </li><li> Jeter le surnageant, remettre en suspension les cellules avec le milieu ES à la concentration à 2x10 6 cellules par ml. </li><li> Préparer 2 milieu de congélation de cellules ES (DMSO 20% en ES moyenne) et il aliquote de 0,5 ml par flacon. </li><li> Transfert de 0,5 ml de la suspension cellulaire de geler les flacons et mélanger doucement. </li><li> Mettez les flacons dans un contenant de congélation des cellules et le conserver à -80 ° C pendant la nuit; transfert à l&#39;azote liquide le lendemain pour stockage à long terme. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Takahashi, K., Yamanaka, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+pluripotent+stem+cells+from+mouse+embryonic+and+adult+fibroblast+cultures+by+defined+factors%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Induction of pluripotent stem cells from mouse embryonic and adult fibroblast cultures by defined factors.</a> Cell. 126, 663-676 (2006).</li>
<li>Wernig, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((et+al+.+In+vitro+reprogramming+of+fibroblasts+into+a+pluripotent+ES-cell-like+state%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">et al . In vitro reprogramming of fibroblasts into a pluripotent ES-cell-like state.</a> Nature. 448, 318-324 (2007).</li>
<li>Okita, K., Ichisaka, T., Yamanaka, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+germline-competent+induced+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Generation of germline-competent induced pluripotent stem cells.</a> Nature. 448, 313-317 (2007).</li>
<li>Maherali, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+epigenetic+remodeling+in+directly+reprogrammed+fibroblasts%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Global epigenetic remodeling in directly reprogrammed fibroblasts.</a> Cell Stem Cell. 1, 55-70 (2007).</li>
<li>Brambrink, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sequential+expression+of+pluripotency+markers+during+direct+reprogramming+of+somatic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Sequential expression of pluripotency markers during direct reprogramming of somatic cells.</a> Cell Stem Cell. 2, 151-159 (2008).</li>
</ol>

Dans cette vidéo, nous montrent comment utiliser une inductible, système lentiviral pour générer GFP-positives, pluripotentes à partir de cellules iPS FAE provenant de souris et de Oct4-GFP/R26-M2rtTA Nanog-GFP/R26-M2rtTA. Cette procédure est une méthode utile pour générer des cellules iPS, car il permet le contrôle de l&#39;expression du transgène pendant le processus de reprogrammation. Bien que l&#39;utilisation de virus dans la génération de cellules iPS empêche l&#39;utilisation de ces cellules dans un milieu clinique, cette procédure ne nous permettent de répondre à certaines des grandes questions biologiques qui sous-tendent le processus de reprogrammation encore défini.

<table><tbody><tr><td>Doxycycline hyclate</td><td>Réactif</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D9891-100G</td><td></td></tr></tbody></table>

générer des cellules ips de mefs travers l&#39;expression forcée de sox-2, oct-4, c-myc et klf4

Generating iPS Cells from MEFS through Forced Expression of Sox-2, Oct-4, c-Myc, and Klf4

Pluripotence peut être induite dans murines différenciées par transduction virale de Oct4, Sox2, Klf4, et c-Myc (Takahashi et Yamanaka, 2006; Wernig, et al, 2007;. Okita, et al, 2007;.. Maherali, et al, 2007). Nous avons élaboré une stratégie de reprogrammation dans laquelle ces facteurs de transcription quatre sont exprimés à partir de doxycycline (Dox) inductible par des vecteurs lentiviraux (Brambrink et al., 2008). En utilisant ces constructions inductible, on peut dériver souches pluripotentes induites (iPS) à partir de fibroblastes embryonnaires de souris (MEF). Dans cette vidéo, nous démontrons la procédure pour la génération des lentivirus inductibles qui expriment les quatre facteurs de transcription et de montrer comment à infecter MEFs par ces virus, afin de produire des cellules iPS. En utilisant des lentivirus inductible, l&#39;expression des quatre facteurs dans contrôlées par l&#39;ajout de doxycycline au milieu de culture. L&#39;avantage de ce système au cours de l&#39;infection rétrovirale est traditionnelle de la capacité de transformer les gènes sur et en dehors de sorte que la cinétique de la reprogrammation et les exigences expression des gènes peut être analysé en détail.

Cette vidéo montre la procédure pour générer des cellules souches pluripotentes induites à l&#39;aide de lentivirus inductibles qui expriment Oct4, Sox2, c-Myc et Klf4.

Générer des cellules iPS de MEFS travers l&#39;expression forcée de Sox-2, Oct-4, c-Myc et Klf4

La pluripotence peut être induite dans des cellules murines différenciées par transduction virale d'Oct4, Sox2, Klf4 et c-Myc (Takahashi et Yamanaka, 2006 ; Wernig, et al., ...

Il y a plus de 50 ans, on a émis l'hypothèse que des cellules différenciées terminales, telles que les fibroblastes cutanés, pourraient être forcées à adopter un état pluripotent similaire à celui des cellules souches embryonnaires. La base de ce concept repose sur l'observation que tous les types cellulaires, à quelques rares exceptions près, possèdent le même code génétique et que la seule différence entre les types cellulaires réside dans la manière dont ce code est lu. Cette capacité à modifier l'identité cellulaire d'une cellule différenciée pour la ramener à un état pluripotent est appelée reprogrammation cellulaire.Après cinq années de recherche, il a récemment été démontré que l'expression forcée de quatre facteurs de transcription peut reprogrammer des fibroblastes cutanés pour les rendre pluripotents. L'impact de cette découverte est considérable. Au-delà de son importance pour la biologie fondamentale, elle permet également de contourner les principales objections éthiques liées à l'utilisation de cellules souches embryonnaires humaines en thérapie transplantatoire.Pour que le reprogrammation se produise, quatre gènes codant pour les facteurs de transcription OC4, Sox2, c-Myc et K4 doivent être emballés et introduits dans une culture de tissus à l'aide d'un lentivirus. Un milieu contenant le virus purifié est ensuite ajouté à une boîte de culture cellulaire contenant une forte densité de fibroblastes, et dans cette boîte, un phénomène étonnant se produit. Une petite fraction des fibroblastes est infectée par les quatre virus porteurs des facteurs de transcription et commence à se dédifférencier.Ils subissent des changements importants dans leur morphologie et leur prolifération, et commencent à se diviser en grands agrégats sphériques formés de cellules souches pluripotentes. Après deux à trois semaines de culture dans des conditions adaptées aux cellules souches embryonnaires, les colonies de fibroblastes reprogrammés peuvent être isolées manuellement et amplifiées in vitro. Une fois purifiées, ces cellules peuvent être utilisées pour générer des souris chimériques dans lesquelles un certain pourcentage de cellules, dérivé de ces fibroblastes dédifférenciés, peut contribuer à différents tissus de la souris.Dans les chimères où le matériel génétique des fibroblastes d'origine a contribué à la lignée germinale, le code génétique peut être transmis à la génération suivante, puis à la suivante, et ainsi de suite. Bien que l'utilisation d'un système de livraison viral constitue actuellement un obstacle aux applications cliniques, cela devrait être rapidement surmonté. Dans cette vidéo, des membres du laboratoire Yin démontreront comment des cellules souches pluripotentes induites sont obtenues à partir de fibroblastes embryonnaires de souris.Bonjour, je suis Grant Welted du laboratoire de Rudolph Jish à l'Institut Whitehead pour la recherche biomédicale à Cambridge, dans le Massachusetts. Et je suis Tobias Bro brink, également du laboratoire Iš. Aujourd'hui, nous allons vous montrer la génération de cellules souches pluripotentes induites par l'introduction de quatre ADNc OCT4, SOX2, c-MYC et KLF4 à l'aide de lentivirus exprimant ces quatre ADNc sous un promoteur Tet-O-CMV.Ceci permet un contrôle précis de l'expression de ces quatre transgènes après l'infection de fibroblastes embryonnaires de souris. Le protocole que nous vous présentons aujourd'hui implique la manipulation de lentivirus pouvant éventuellement infecter des cellules humaines. Il est essentiel que vous suiviez toujours des procédures sécuritaires et que vous contactiez votre service de sécurité avant de tenter de réaliser cette manipulation vous-même.Alors, générons des cellules IPS afin de produire un lentivirus qui permettra de convertir les cellules ME en cellules IPS. Les cellules 293 doivent être transfectées avec trois plasmides : Paks deux, qui fournit les éléments génétiques nécessaires à l'encapsidation virale ; l'ADN squelette viral, qui est un lentivirus FUW TE OCMV portant l'un des quatre facteurs CD aids T quatre, SOX deux, KLA quatre ou CMIC ; et PMDG, qui exprime la glycoprotéine d'enveloppe du virus de la stomatite vésiculaire, ou VSV.Cela permet de produire le virus qui générera le virus atropique. Par conséquent, il est nécessaire de suivre les procédures appropriées de niveau de biosécurité 2 plus. Dans cette vidéo particulière, nous ne manipulons pas réellement de virus infectieux ; ainsi, nous ne portons pas nos blouses habituelles et ne nous trouvons pas dans un laboratoire de niveau de biosécurité 2 plus.Avant la transfection 2, les cellules 9 3 sont décongelées à partir d'azote liquide et cultivées jusqu'à une confluence de 90 %. Les cellules sont ensuite transfectées avec le gène FU et incubées 48 à 72 heures pour permettre l'expression du virus. À ce stade, le milieu entourant les cellules est filtré à l'aide d'un filtre de 0,45 micron, puis concentré par ultracentrifugation après concentration du virus. Nous sommes désormais prêts à infecter les MES afin de générer des agrégats IPS. Pendant les étapes de préparation virale, des fibroblastes embryonnaires de souris ayant subi moins de trois passages sont cultivés jusqu'à une confluence de 90 % dans des boîtes de 10 centimètres, soit environ deux fois 10 à la puissance 6 cellules par boîte. Dans ce protocole expérimental particulier, nous utilisons des MES exprimant la RTTA, ce qui est essentiel pour l'expression de la doxycycline et de la GFP à partir du locus endogène OC quatre.Les MES sont négatifs pour la GFP, mais les véritables cellules IPS deviennent positives pour la GFP. Ce marqueur permet une méthode permettant d'identifier les cellules reprogrammées. Aspirez le milieu de culture des fibroblastes et rincez avec 10 ml de HBSS, EDTA, jetez le HBSS, EDTA et ajoutez 5 ml de trypsine 1X, puis incubez à 37 degrés pendant 10 minutes. La trypsine aidera à détacher les cellules du fond des boîtes.Ajoutez maintenant neuf millilitres de milieu de culture pour resuspendre les cellules en une suspension monocellulaire et transférez-les dans un tube de 15 millilitres. Ces cellules sont ensuite centrifugées et misent en pellet. Après la resuspension du dépôt, le nombre de cellules dans la suspension est déterminé et la concentration est ajustée à huit fois dix puissance quatre cellules par millilitre.10 mils de la suspension cellulaire sont ensuite transférés dans une boîte de 10 centimètres revêtue de gélatine. Incuber la boîte toute la nuit à 37 degrés Celsius, 5 % CO2 ; après l'incubation nocturne, le milieu provenant d'une boîte de fibroblastes est aspiré et 10 mils de milieu contenant le virus sont ajoutés au méth. Incuber les cellules de quatre heures à toute la nuit à 37 degrés Celsius, 5 % CO2.Le lendemain, aspirez le milieu d'une boîte de fibroblastes, puis ajoutez 10 mils de milieu ESL frais. À ce stade, les cellules peuvent être congelées, mises en culture pour expansion ou préparées pour l'initiation de la reprogrammation. Pour initier la reprogrammation, remplacez le milieu ESL ordinaire par un milieu contenant de la doxycycline afin de déclencher l'expression des quatre gènes.Placer ces cellules dans l'incubateur et changer le milieu chaque jour jusqu'à ce que les colonies deviennent suffisamment grandes pour être prélevées. Les colonies devraient devenir visibles environ une semaine après le début de la reprogrammation. Elles devraient atteindre une taille suffisante pour être prélevées vers le jour 20.À présent que 20 jours se sont écoulés, nous pouvons procéder à la sélection des colonies IPS avant de choisir les colonies. Il faut se rappeler de prévoir le nombre requis de plaques de 24 puits revêtues de gélatine et traitées par irradiation gamma avec des DR quatre mythes une à deux heures avant la sélection. Il faut nourrir les colonies sur les plaques en ajoutant du milieu frais juste avant la sélection, ajouter 50 microlitres de tampon HEPA dans les puits d’un plat de 96 puits à fond en V immédiatement avant la sélection, rincer le plat contenant les colonies à sélectionner une fois avec du PBS et ajouter 10 ml de PBS au plat. Les agrégats de cellules IPS peuvent être sélectionnés soit au microscope stéréo, soit au microscope inversé.Prélevez les colonies à l’aide d’une petite pointe de pipette et transférez-les dans un puits de la plaque de 96 puits contenant du PBS afin d’éliminer les agrégats. Un cercle est tracé avec la pointe de pipette autour de l’agrégat pour disperser les masses. Les cellules reprogrammées peuvent maintenant être prélevées à l’aide de la pipette multipuits ; 20 microlitres de trypsine sont ajoutés à chaque puits.Pipetez vers le haut et vers le bas trois fois, incubez à 37 °C pendant quatre minutes. Après l'incubation de quatre minutes, ajoutez 100 µL de milieu ES aux colonies triées. Pipetez vers le haut et vers le bas dix fois et transférez six clones à la fois.Transférer les cellules d'une plaque de 96 puits vers une plaque de 24 puits à l'aide d'une pipette à 12 canaux en utilisant une pointe à chaque autre position. Ensuite, cultiver les cellules sur la plaque de 24 puits dans un incubateur à 37 °C, 5 % CO₂, jusqu'à ce que les cellules atteignent une confluence de 80 à 90 %, en renouvelant régulièrement le milieu pour cellules souches embryonnaires (ES). Les cellules seront probablement prêtes à être mises en culture élargie dans un délai de trois à sept jours. Quelques jours plus tard, une fois que les cellules IPS sont confluentes, aspirer le milieu et laver les cellules avec 1 mL de HEPES. Retirer complètement le HEPES, puis ajouter 100 µL de trypsine 1X et incuber à 37 °C pendant 10 minutes. Après l'incubation avec la trypsine, ajouter 400 µL de milieu ESL et resuspendre les cellules en pipetant plusieurs fois vers le haut et vers le bas afin d'obtenir une suspension monocellulaire.La suspension simple de cellules de 500 microlitres provenant de la plaque 24 puits est ensuite transférée dans un seul puits d'une plaque 6 puits et incubée dans un incubateur à 37 degrés Celsius et 5 % de CO2 jusqu'à ce que les cellules atteignent une confluence de 80 à 90 % dans la plaque 6 puits. À ce stade, vous pouvez soit procéder à l'amplification des cellules pour des analyses de Southern, des essais sur des blastocystes, des injections, des essais de tératomes ou des essais de différenciation in vitro. Vous devez également penser à congeler des stocks de ces cellules afin de ne pas perdre cet échantillon précieux de cellules IPS.Nous venons de vous montrer comment induire la pluripotence dans des fibroblastes embryonnaires de souris à l'aide d'un système antiviral inductible. Merci d'avoir regardé et bonne chance dans vos expériences.

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