Name: Trypsinisation et Repiquage des cellules de mammifères (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-06-12T13:28:00.000+00:00
Duration: 5 min 59 s
Description: Apprenez la technique de trypsinisation et de repiquage des cellules adhérentes et en suspension pour maintenir leur viabilité. Cette méthode visuelle guide les chercheurs en biologie cellulaire.

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Le protocole texte complet de cette approche expérimentale est disponible en <a href="http://www.mrw.interscience.wiley.com/emrw/9780471143031/cp/cpcb/article/cb0101/current/abstract" target="_blank">Current Protocols in Cell Biology</a> .

Les auteurs n'ont rien à divulguer.

trypsinisation et repiquage des cellules de mammifères

Trypsinizing and Subculturing Mammalian Cells

Comme les cellules atteignent la confluence, elles doivent être repiquées ou passages. Le défaut de sous-culture des cellules dans les résultats confluentes index mitotique réduit et éventuellement à la mort cellulaire. La première étape de repiquage est de détacher les cellules de la surface du récipient de culture primaire par trypsinisation ou des moyens mécaniques. La suspension cellulaire obtenue est ensuite subdivisée, ou réensemencés, dans les cultures fraîches. Cultures secondaires sont vérifiés pour la croissance et alimenté périodiquement, et peuvent ensuite être repiquées pour produire des cultures tertiaires. Le temps entre repiquage de cellules varie en fonction de la lignée cellulaire et dépend du taux de croissance.

Comme les cellules atteignent la confluence, elles doivent être repiquées ou passages. Cette vidéo va démontrer une procédure de repiquage deux adhérentes et les cellules en suspension.

Trypsinisation et Repiquage des cellules de mammifères

Lorsque les cellules atteignent la confluence, elles doivent être sous-cultivées ou repiquées. Le fait de ne pas sous-cultiver des cellules confluentes entraîne une réduction de l'indice mitotique et, à terme, une ...

La technologie de culture tissulaire a trouvé une large application dans le domaine de la biologie cellulaire. Toutefois, les cellules cultivées nécessitent un entretien régulier pour rester en bonne santé. Lorsque les cellules atteignent la confluence, elles doivent être resemées ou repiquées.Le non-respect de cette consigne entraîne une croissance réduite et, à terme, la mort cellulaire. Dans cette vidéo, nous montrons comment maintenir en culture des cellules de lignées adhérentes et en suspension. Bonjour, je suis Ricky, ici au laboratoire du Dr. LAN, au sein du réseau des laboratoires de pathologie moléculaire du Tennessee oriental.Aujourd'hui, je souhaite vous montrer deux techniques permettant d'isoler des cellules en suspension et des cellules adhérentes. Pour repiquer une culture de cellules, nous devons commencer par une culture primaire ayant atteint la confluence, cultivée dans une boîte de Pétri de 60 millimètres ou dans un flacon de culture tissulaire de 25 centimètres carrés contenant cinq millilitres de milieu de culture tissulaire.Nous commençons par retirer tout le milieu de la culture primaire à l’aide d’une pipette stérile. Ensuite, nous lavons la monocouche de

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La technique de micro-disséqués explants est une méthode robuste et fiable pour isoler proliférative des cellules musculaires squelettiques de juvéniles, adultes ou embryonnaires muscles comme source de cellules souches du muscle squelettique. Uniquement, ces cellules ont été tirés par clonage pour produire des lignes squelettiques musculaires cellules souches utilisées pour la transplantation in vivo.

Adultes et embryonnaires Culture squelettique Microexplant musculaire et isolement de cellules souches du muscle squelettique

Dans ce rapport, nous démontrons un système pour isoler les cellules du donneur et de la culture de la glande mammaire de la souris, et la transplantation orthotopique ces cellules dans des souris bénéficiaires d'analyser stromales: interactions épithéliales pendant le développement de tumeurs mammaires.

Transplantation mammaires de cellules stromales et les cellules de carcinome chez les souris C57BL/6J

Cette vidéo présente une technique permettant d’étudier la localisation in vivo d’anticorps spécifiques à une tumeur dans un modèle de xénogreffe de tumeur chez la souris. Lors de l’injection sous-cutanée de cellules cancéreuses dans des souris pour la formation de tumeurs, des anticorps marqués par fluorescence sont injectés qui se lient à des récepteurs spécifiques de la tumeur, permettant une évaluation in vivo de la localisation des anticorps par imagerie.

Technique d’évaluation de la localisation in vivo d’anticorps spécifiques à une tumeur

La vidéo montre un test permettant d’évaluer l’activité de séquestration autophagique en vrac dans des cellules de mammifères. Il utilise l’électroporation pour libérer des protéines cytosoliques, y compris la lactate déshydrogénase (LDH). Les fractions de LDH séquestrée et de LDH cellulaire totale sont déterminées pour évaluer la séquestration de la LDH, ce qui donne un aperçu de l’activité globale de séquestration en vrac.

Quantification de l’activité de séquestration autophagique en vrac dans des cellules de mammifères

Cette vidéo présente un protocole permettant d’isoler et de cultiver des cellules primaires du cortex cérébral à partir du télencéphale dorsolatéral d’embryons de souris.

Isolement et culture de cellules à partir de télencéphales dorsolatéraux d’embryons de souris

Cette technique fournit une méthode pour récolter, normaliser et quantifier la croissance intracellulaire des bactéries pathogènes qui sont pré-cultivées dans les cellules hôtes naturels protozoaires avant infections de cellules de mammifères. Cette méthode peut être modifiée pour accueillir une grande variété de cellules hôtes pour la phase d'amorçage, ainsi que les types de cellules cibles.

Infections traitables avec des cellules de mammifères Protozoaire amorcées bactéries

Nous décrivons les procédures pour l'étiquetage et le génotypage des souris nouveau-nés et de générer des cultures de neurones primaires d'eux. Le génotypage est rapide, efficace et fiable, et permet pour l'extraction de l'acide nucléique automatisé. Ceci est particulièrement utile pour les souris néonatale létales et leurs cultures qui nécessitent l'achèvement préalable de génotypage.

Rapid génotypage des animaux Suivi par Établir des cultures primaires de neurones du cerveau

L'objectif de ce protocole est d'isoler les kératinocytes épidermiques de la peau dorsale de souris adultes pour une variété d'applications en aval telles que la biologie moléculaire, la biochimie, le tri cellulaire activé par fluorescence et les utilisations in vitro primaires (p. ex., clonogènes kératinocytes).

Isolement des kératinocytes épidermiques de souris et de leur culture clonogène in vitro

Nous présentons une technique pour stabiliser rapidement les complexes translationnels (biosynthèse des protéines) avec réticulation du formaldéhyde dans les cellules de levures et de mammifères vivantes. L’approche permet de disséquer les intermédiaires transitoires et les interactions dynamiques ARN:protéine. Les complexes réticulés peuvent être utilisés dans de multiples applications en aval telles que les méthodes de profilage basées sur le séquençage en profondeur, la microscopie et la...

Fixation et isolement rapides in vivo de complexes translationnels à partir de cellules eucaryotes

La Biotinylation par illumination restreinte par localisation spécifique à AviTag (ALIBi) est une méthode novatrice activée par l’optogénétique développée pour marquer et purifier par affinité les populations subcellulaires de ribosomes pour le séquençage en aval et l’analyse protéomique.

Isolement des sous-populations de ribosomes subcellulaires basé sur la biotinylation enrichie par éclairage restreinte par peptide peptidique spécifique à la marque de recombinaison

Apprenez la technique de trypsinisation et de repiquage des cellules adhérentes et en suspension pour maintenir leur viabilité. Cette méthode visuelle guide les chercheurs en biologie cellulaire.

Trypsinisation et Repiquage des cellules de mammifères

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