Culture of myeloid dendritic cells from bone marrow precursors

Jeanette Boudreau; Sandeep Koshy; Derek Cummings; Yonghong Wan

doi:10.3791/769

Culture de cellules dendritiques myéloïdes à partir de précurseurs de moelle osseuse

JoVE Journal
Biology

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Biology

Culture of myeloid dendritic cells from bone marrow precursors

Culture de cellules dendritiques myéloïdes à partir de précurseurs de moelle osseuse

Full Text

23,198 Views

06:39 min

July 25, 2008

DOI: 10.3791/769-v

Jeanette Boudreau^1,2, Sandeep Koshy^2,3, Derek Cummings², Yonghong Wan²

¹Medical Sciences Program,McMaster University, ²Centre for Gene Therapeutics,McMaster University, ³Department of Chemical Engineering,University of Waterloo

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This video demonstrates the procedure for differentiating myeloid dendritic cells from mouse bone marrow. The isolation and processing of mouse tibia and femur are shown, along with cell morphology and phenotype analysis.

Key Study Components

Area of Science

Immunology
Cell Biology
Vaccine Development

Background

Myeloid dendritic cells play a crucial role in immune responses.
They are important for studying innate and adaptive immune interactions.
These cells are increasingly utilized in vaccine research.
Understanding their differentiation is key for therapeutic applications.

Purpose of Study

To isolate precursor cells from mouse bone marrow.
To culture and differentiate these cells into dendritic cells.
To analyze cell proliferation and maturation.

Methods Used

Isolation of precursor cells from mouse tibia and femur.
Culturing cells in vitro with toll-like receptor ligands.
Flow cytometric analysis of cell phenotype and IL-12 production.
Observation of cell morphology before and after differentiation.

Main Results

Significant increase in cell numbers during culture.
Demonstration of cell morphology changes post-differentiation.
Flow cytometry results showing maturation markers.
IL-12 production analysis following maturation.

Conclusions

The procedure effectively differentiates myeloid dendritic cells.
In vitro culture leads to substantial cell proliferation.
Flow cytometric analysis is crucial for assessing cell maturation.

Frequently Asked Questions

What are myeloid dendritic cells?

Myeloid dendritic cells are immune cells that play a key role in initiating and regulating immune responses.

Why is it important to differentiate these cells?

Differentiating myeloid dendritic cells is essential for understanding their function in immunity and for developing vaccines.

What methods are used to analyze the cells?

Flow cytometry is used to analyze cell phenotype and measure IL-12 production after maturation.

How are precursor cells isolated?

Precursor cells are isolated from the bone marrow of mouse tibia and femur.

What is the expected increase in cell numbers during culture?

A five to eightfold increase in total cell numbers is expected during the culture period.

What precautions should be taken during the procedure?

It is recommended to perform cultures in a biological safety cabinet to maintain sterility.

Cette vidéo montre la procédure pour différencier les cellules dendritiques myéloïdes de la moelle osseuse de souris. Isolement du tibia et du fémur de souris, et le traitement de la moelle osseuse sont démontrés. Photos montrant la morphologie des cellules avant et après différenciation, et les chiffres illustrant phénotype cellulaire et la maturation de production d'IL-12 suivantes à l'aide CpG sont affichés.

Je m’appelle Jeanette Boudreaux, et aujourd’hui, j’aimerais vous présenter les étapes de la culture de cellules dendritiques myéloïdes à partir de précurseurs de la moelle osseuse. La lignée myéloïde DC est de plus en plus appréciée pour les études sur l’interaction immunitaire innée et adaptative, et est de plus en plus utilisée comme plate-forme pour le développement de vaccins. Aujourd’hui, nous allons vous expliquer les étapes permettant d’isoler les cellules précurseurs, de les mettre en culture et de les différencier en cellules dendritiques.

Ensuite, je vous montrerai une analyse cytométrique en flux des cellules avant et après la maturation. Avec le ligand du récepteur de type Toll, les cellules prolifèrent in vitro pendant la période de culture, alors attendez-vous à voir une augmentation d’environ cinq à huit fois du nombre total de cellules par rapport aux précurseurs que vous avez joués au jour zéro. Les procédures que je vous montre aujourd’hui vont être démontrées sur une paillasse de laboratoire ouverte, mais pour maintenir la stérilité, je vous recommande de faire vos cultures dans une enceinte de sécurité biologique ou une hotte à flux lanar.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos

Explore More Videos

Immunologie numéro 17 les cellules dendritiques le GM-CSF la culture la moelle osseuse