Name: Une technique rapide pour la visualisation de Live cellules de levure immobilisées (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2006-11-09T00:00:00.000+00:00
Duration: 2 min 54 s
Description: Découvrez une technique rapide pour visualiser des cellules de levure immobilisées et observer les changements d'état épigénétique lors des divisions cellulaires. Cette méthode utilise des blocs d'agar et des marqueurs fluorescents.

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Nous tenons à remercier Pete Houston et Eugenia Xu pour leur aide.

<ol><li> Cellules immobilisées pour la microscopie à épifluorescence le temps bien sûr. S&#39;il vous plaît noter que ce protocole n&#39;est utile que si l&#39;objectif de lentilles du microscope sont en dessous de la platine du microscope. </li><li> Cellules de lieu à la concentration voulue en milieu liquide sur une lamelle longue (environ 24x50mm) </li><li> Couper un bloc de gélose de la taille souhaitée à partir d&#39;une plaque synthétique médias (ceux-ci ont moins d&#39;autofluorescence) et les placer sur les cellules. Placez le côté du bloc d&#39;agar ne sont pas manipulés par des pinces en contact avec les cellules. </li><li> Pour les cours du temps plus courts (jusqu&#39;à 3 heures), cette mise en place est suffisante. Si les cellules sont en mouvement lorsque visualisés sur le microscope, diminution du volume de cellules ou de la zone augmentation du bloc de gélose. </li><li> Pour les cours de plus de temps, déposer une goutte de liquide sur Fresh Media sommet du bloc d&#39;agar, et placer une lame de verre sur le dessus du bloc de gélose. Cette diapositive réduit l&#39;évaporation par le haut du bloc de gélose. Si désiré, les bords du bloc de gélose en contact avec la lamelle peut être scellé avec de la vaseline pour réduire encore l&#39;humidité. J&#39;ai utilisé cette mise en place pour les films jusqu&#39;à 9 heures, avec les cellules qui se divisent à un rythme de type sauvage. </li></ol>

<ol>
	<li>Xu, E. Y., Zawadzki, K. A., Broach, J. R. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+observations+reveal+intermediate+transcriptional+silencing+states.">Single-cell observations reveal intermediate transcriptional silencing states.</a> Mol. Cell. 23, 219-229 (2006).</li></ol>

Les auteurs n'ont rien à divulguer.

C&#39;est une technique rapide qui immobilise les cellules de levure, tout en permettant la croissance. Nous avons suivi la croissance de la levure pour un maximum de dix heures, avec la levure affichage sauvage taux de division de type long de l&#39;expérience. Notez que cette configuration nécessite l&#39;objectif d&#39;être en dessous de la platine du microscope.

une technique rapide pour la visualisation de live cellules de levure immobilisées

A Rapid Technique for the Visualization of Live Immobilized Yeast Cells

Nous présentons ici une technique simple, rapide et extrêmement flexible pour l&#39;immobilisation et la visualisation des cellules de levure de croissance par microscopie à épifluorescence. La technique est également adapté pour la visualisation des populations de levures statique, ou les cours d&#39;expériences en temps jusqu&#39;à dix heures. Mon microscope hérédité épigénétique étudie au niveau des loci d&#39;accouplement silencieuse chez S. cerevisiae. Il ya deux loci d&#39;accouplement silencieux, HML et HMR, qui ne sont normalement pas exprimée comme ils sont emballés dans l&#39;hétérochromatine. Dans le contexte mutant sir1 taire est affaibli de telle sorte que chaque locus peut être soit dans l&#39;état exprimés ou sous silence épigénétique, donc dans la population dans son ensemble il ya un mélange de cellules de différents états épigénétiques pour les deux HML et HMR. Mon microscope a démontré qu&#39;il n&#39;existe aucune relation entre l&#39;état épigénétique des HML et HMR dans une cellule individuelle. sir1 cellules stochastiquement commuter les états épigénétiques, l&#39;établissement de faire taire à un locus précédemment exprimées ou exprimant un lieu préalablement au silence. Mon microscope cours du temps suivis individuels sir1 cellules et de leur progéniture pour marquer la fréquence de chacun des quatre commutateurs possibles épigénétiques, et donc la stabilité de chacun des états épigénétiques dans les cellules sir1. Voir aussi Xu et al., Mol. Cellule 2006.

Une technique rapide pour la visualisation de la croissance des cellules de la levure immobilisée, ici appliqué à des journalistes fluorescentes au niveau des loci d&#39;accouplement silencieuse HML et HMR

Une technique rapide pour la visualisation de Live cellules de levure immobilisées

Nous présentons ici une technique simple, rapide et extrêmement flexible pour l'immobilisation et la visualisation de cellules de levure en croissance par épifluorescence...

L'objectif de l'expérience est de pouvoir suivre une population de cellules productrices de Sir1 au microscope afin d'observer comment les états épigénétiques changent, et à quelle fréquence ces états épigénétiques évoluent au cours de chaque division cellulaire successive. Prenez une grande lame couvre-objet, déposez environ sept microlitres de cellules sur celle-ci, puis utilisez un milieu synthétique. Prenez une lame de rasoir et effectuez des incisions dans l'agar. Prenez alors un bloc d'agar, soulevez-le et placez-le au-dessus des cellules.D'accord, pour des expériences à court terme, jusqu'à trois heures. Cela convient parfaitement en soi. Pour des expériences à plus long terme, où les cellules seront immobilisées, j'ajoute du milieu liquide au-dessus du coussin d'agar, puis je place une lame de verre par-dessus l'ensemble.Le milieu agira comme un scellant entre les deux. En effet, la lame sert uniquement à prévenir l'évaporation depuis la surface du bloc d'agar. Avec ce dispositif, le bloc d'agar restera humide et les cellules continueront à se diviser pendant huit heures, au moins huit heures.

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Une technique rapide pour la visualisation de Live cellules de levure immobilisées

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