ספקטרוסקופיה אולטרה סגולה (UV-Vis)

1. כייל את הספקטרומטר

1. הפעל את ספקטרומטר UV-Vis ואפשר למנורות להתחמם לפרק זמן מתאים (כ -20 דקות) כדי לייצב אותן.
2. מלאו קובט בממס לדגימה וודאו שבחוץ נקי. זה ישמש ריק ולעזור להסביר הפסדים קלים עקב פיזור או ספיגה על ידי הממס.
3. מניחים את הקובט בספקטרומטר. הקפד ליישר את cuvette כראוי, כמו לעתים קרובות cuvette יש שני צדדים, אשר נועדו לטיפול (עשוי להיות מחורץ) ואינם אמורים להאיר אור דרך.
4. קח קריאה עבור הריק. הספיגה צריכה להיות מינימלית, אבל כל ספיגה צריכה להיות מופחתת מדגימות עתידיות. מכשירים מסוימים עשויים לאחסן את הנתונים הריקים ולבצע את החיסור באופן אוטומטי.

2. ביצוע ספקטרום ספיגה

1. מלא את הקובט עם המדגם. כדי לוודא שההעברה כמותית, יש לשטוף את הקובט פעמיים עם המדגם ולאחר מכן למלא אותה כ-3/4 מלא. ודאו שבחוץ נקי מכל טביעות אצבעות וכו'.
2. הנח את הקובט בספקטרומטר בכיוון הנכון.
3. מכסים את התבלינים כדי למנוע אור סביבה.
4. לאסוף ספקטרום ספיגה על ידי מתן אפשרות למכשיר לסרוק דרך אורכי גל שונים ולאסוף את הספיגה. ניתן להגדיר את טווח אורך הגל עם מידע על המדגם הספציפי, אך טווח של 200-800 ננומטר הוא סטנדרטי. מכשיר מערך דיודות מסוגל לאסוף ספקטרום ספיגה שלם בריצה אחת.
5. מתוך ספקטרום הספיגה שנאסף, לקבוע את מקסימום הספיגה (λ_{מקסימום}). חזור על אוסף הספקטרום כדי לקבל הערכת שגיאה ב- λ_max.
6. כדי ליצור עקומת כיול, אסוף את ספקטרום ה- UV-Vis של מגוון דגימות ריכוז שונות. ספקטרומטרים מוגבלים לעתים קרובות בטווח הליניארי ולא יוכלו למדוד ערך ספיגה גדול מ- 1.5. אם ערכי הספיגה של המדגם נמצאים מחוץ לטווח הליניארי של הכלי, דלל את המדגם כדי לקבל את הערכים בטווח הליניארי.

3. ניסויים קינטיקה עם ספקטרוסקופיה UV-Vis

1. UV-Vis יכול לשמש לניסויים קינטיים על ידי בחינת השינוי בספיגה לאורך זמן. לניסוי קינטיקה, יש לבצע קריאה ראשונית של המדגם.
2. מוסיפים במהירות את ריאגנט כדי להתחיל את התגובה הכימית.
3. מערבבים היטב לערבב עם המדגם. אם כמות קטנה מתווספת, זה יכול להיעשות cuvette. לחלופין, מערבבים את ריאגנט עם מדגם במהירות לשפוך קצת cuvette למדידה.
4. למדוד את הספיגה ב λ_{מקסימום} עבור ניתוח של עניין לאורך זמן. אם משתמשים במדידת ריאגנט (כלומר הספיגה עולה מכיוון שיש פחות ריאגנט לספוג), הריקב יציין את סדר התגובה.
5. באמצעות עקומת כיול, לעשות חלקה של ריכוז אנליסט לעומת זמן, המרת ערך הספיגה לריכוז. משם, גרף זה יכול להתאים למשוואות מתאימות כדי לקבוע את קבועי קצב התגובה.