פרוטוקול Vaccinia זיהום של תאים הלה וניתוח של המארח ביטוי גנים ויראליים. חלק 1 מתוך 3.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
Vaccinia זיהום בנגיף וניתוח הזמני של ביטוי גנים וירוס: חלק 1
במאמר זה
סיכום
פרוטוקול
חלק 1: הגדרת זיהום
- לגדל תאים הלה ב צלוחיות ולהמתין עד התאים הם כ 80% ומחוברות.
- הכינו מספיק בינוני צמיחה ויראלי לניסוי: DMEM קבוע עם 2% FBS ללא אנטיביוטיקה הוסיף.
- הזיהום יכול להתבצע גם עם מלאי גולמי של הנגיף vaccinia עם כייל ידוע, או סוכרוז מטוהרים וירוס עם כייל ידוע אם אתה מודאג לגבי ביטוי גנים המארח.
- אם אתה משתמש וירוס סוכרוז מטוהרים, להמשיך ישירות חלק 2.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
קריטי שלבים
חלק 1 & 2
ישנם שלבים קריטיים כמה הגדרת זיהום סינכרוני vaccinia, sonication first להיות זהיר (או trypzinizing) של הנגיף, על מנת disaggregate חלקיקי הנגיף. Vaccinia נוטה מאוד צבירה, לבין שיבוש של חלקיקי נגיף חשוב להבטחת אפילו זיהום של תאים. על מנת להשיג זיהום סינכרוני, בגובה הפנים (יותר מ 2) יש להשתמש כדי להבטיח כל תא נגוע. תערובת של תא.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תודות
וייטהד במכון עמיתי קרנות
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות | |
|---|---|---|---|---|
| TRIzol Reagent | ריאגנט | Invitrogen | 15596-026 | ריאגנטים דומים, כגון TriPure מבית Roche, יעבדו גם הם. |
| BCP Phase Separation Reagent | ריאגנט | Molecular Research Center | BP151 | |
| RNase-Free DNase Set | ריאגנט | Qiagen | 79254 | טיפול ב-DNase הוא שלב אופציונלי. |
מקורות
- KH, R. ubins, LE, H. ensley, GW, B. ell, Wang, C., EJ, L. efkowitz, PO, B. rown, DA, R. elman Comparative analysis of viral gene expression programs during poxvirus infection: a transcriptional map of the vaccinia and monkeypox genomes. PLoS ONE. 3 (7), e2628-e2628 (2008).
- Assarsson, E., Greenbaum, J. A., Sundström, M., Schaffer, L., Hammond, J. A., Pasquetto, V., Oseroff, C., Hendrickson, R. ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
תגיות
