בקנה מידה גדול immunodetection של חלבונים יעד ברחבי המוח הפרימטים כולו ניתן על ידי העסקת רקמה רומן הטבעה וכן חתך שיטות בשילוב עם השימוש במנגנון יצירתיים מכתים אצווה של ריחוף ללא מקטעים מרובים בכל זמן נתון.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
אצווה Immunostaining לגילוי בקנה מידה גדול חלבון הנמצא במוח הקופים שלמים
במאמר זה
סיכום
תקציר
אימונוהיסטוכימיה (IHC) הוא אחד טכניקות מעבדה הנפוצה ביותר לצורך זיהוי של חלבונים היעד
פרוטוקול
Immunohistochemisty היא אחת הטכניקות הנפוצה ביותר לאפיון ביטוי חלבון במוח של שונות במודלים של בעלי חיים ניסיוניים. קל יחסית לנהל הליכים immunohistochemical שיטתי על מוחותיהם של מכרסמים אחרים מודלים ניסיוניים משותף עם מוח בגודל דומה. עם זאת, אין עבודה שפורסם לידע שלנו המספק תיאור מקיף של איך לבצע את ההליכים immunodetection כאלה ברחבי מוח קוף כולו. להלן תיאור מפורט של איך להכין מוח קוף כולו לגילוי בקנה מידה גדול immunohistochemical של חלבונים היעד השונים. עבודה זו התפתחה כתוצאה של שיתוף פעולה בין יוזמות מסחריות אקדמי. ככזה, פרטים הנוגעים רקמות הטבעה וכן חתך להישאר ידע קנייני של NSA.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
ישנם שני שלבים קריטיים בהליך זה שהופכים בקנה מידה גדול זיהוי של חלבונים במוח הקוף כל האפשר. האחד הוא פרוטוקול הטבעה ואת חתך, אשר נשאר הידע הקנייני של NSA. השני הוא השימוש של מנות מכתים וסלים מסופק על ידי HistoTools. זו האחרונה מאפשרת טיפול קל ומהיר של (~ 40) קטעים רבים בזמן נתון. הוא גם מספק את האמצעים לטיפול אחיד על פני כל חלקי המוח וגורמת לטיפול מדעית היסטולוגית קול. בנוסף, השימוש ציוני מוטבע מספק יתרון נוסף של היכולת דיגיטלית לרכוש את דפוסי מכתים משקופיות יבשים coverslipped ו ל.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
למחברים אין ניגודים להצהיר עליהם.
תודות
אנו מודים פרנק ארווין, רוברטה Palmour ואנשי מדעי ההתנהגות קרן מעבדות ממוקם בסנט קיטס, הודו המערבית, על המשך התמיכה עבודתם הפרימטים שלנו. עבודה זו נתמכה על ידי מענק של X השביר קרן המחקר של קנדה (FXRFC) כדי SZ ו - מענקים ההפעלה המכונים הקנדי לבריאות מחקר (AC) ועל הנדסת הלאומי מועצת המחקר של קנדה (MP).
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| נוגדן מונוקלונלי anti-FMRP | Chemicon International | MAB2160 | דורש שחזור אנטיגן ברקמה מקובעת. |
| נוגדן מונוקלונלי anti-NeuN | Chemicon International | MAB377 | N/A |
| נוגדן מונוקלונלי anti-Neurofilament H | Sternberger Monoclonals Inc. | SMI32 | N/A |
| תמיסה לחשיפת אנטיגן (Antigen Unmasking Solution) | Vector Laboratories | H-3300 | N/A |
| סרום סוס נורמלי | Invitrogen | 16050122 | 500 mL |
| Anti-Mouse IgG (H+L) ביוטינילי, יוצר בסוס | Vector Laboratories | BA-2000 | |
| ערכה VECTASTAIN ABC (סטנדרטית) | Vector Laboratories | PK-4000 | 1.5 mg |
| כלי צביעה לחתכים צפים | HistoTools | 10009 | 12 x 65 mm |
| סלסילת הובלה לצביעה | HistoTools | 10012 | גדולה (מתאימה לכלי 12 x 65 mm) |
| Triton X-100 | Fisher Scientific | P8514B | N/A |
| DAB | Fisher Scientific | AC11209-0050 | N/A |
מקורות
- Guide to the Care and Use of Experimental Animals. Olfert, E. D., Cross, B. M., McWilliam, A. A. , Canadian Council on Animal Care. Ottawa. (1993).
- Devys, D., Lutz, Y., Rouyer, N., Bellocq, J. P., Mandel, J. L. The FMR-1 protein is cytoplasmic, most abundant in neurons and appears normal in carriers of ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
