הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

צנתור של לולאות מעיים של מעלי גירה

13.3K צפיות

DOI:

10.3791/1301

11 ביוני 2009

במאמר זה

סיכום

אנו מתארים שיטה כירורגית חדשנית catheterizing "לולאות מעיים" בתוך מעי של כבשה. לאחר חיות התאוששו מהניתוח ויש לי פינה אנטיביוטיקה משככי כאבים, טיפולים מרובים ניתן להפקיד ישירות לולאות באמצעות קטטר.

תקציר

המעי הוא מבנה מורכב כי הוא מעורב לא רק ספיגה של חומרים מזינים, אך גם משמש כמחסום בין הפרט לבין העולם החיצון. ככזו, למעי תפקיד מרכזי immunosurveillance והגנה מפני פתוגנים enteric. חקירת הפיזיולוגיה מעיים ואימונולוגיה כלל מעסיקה "לולאות מעיים" כמודל ניסיוני. רוב המודלים האלה הם לולאה ללא התאוששות ניתוחים כי המחקר לטווח קצר (<24 שעות) שינויים במעי (1-3). אנחנו קודם לכן יצר לולאת המעי התאוששות מודל ספציפי מדד לטווח ארוך (<6 מו) שינויים אימונולוגיים במעי החשיפה כבשים הבאים לחיסונים, adjuvants, ווירוסים (4). הליך זה טיפולים מקומיים ל 'לופ' מסוים, ומאפשר לנו מדגם אזור זה של המעי. החיסרון המשמעותי של שיטה זו היא חלון הזדמנויות יחיד לנהל טיפולים (כלומר בזמן הניתוח). יתר על כן, דגימות של רירית המעי הן ותכנים luminal יכול להיות רק נלקחה ב סיומו של הפרויקט. המגבלות העיקריות אחרות של הדגם הנ"ל כי מניפולציה כירורגית הנדרשים שלאחר הניתוח אמצעים (כגון מתן אנטיביוטיקה ומשככי כאבים) יכולה להשפיע ישירות על הטיפול עצמו ו / או לשנות את תפקוד המערכת החיסונית, ובכך תוצאות בלבול. לכן, אנו מודל שונה לולאת המעי על ידי החדרת שלנו לטווח ארוך קטטר לתוך הלולאות. כבשים להתאושש באופן מלא מן הנוהל, אינם מושפעים על ידי קטטר exteriorized. יש לציין, את הקמתה של צנתרים בלולאות מאפשר לנו להציג טיפולים מרובים על הפסקה ממושכת, לאחר ההתאוששות מהניתוח ולאחר אישור של תרופות מנוהל במהלך הניתוח והתקופה שלאחר הניתוח.

פרוטוקול

נוהל ניסיוני:

  1. מכשירים כל autoclaved; הלא autoclaveable חומרים מעוקרים בפתרון עיקור קר Germex עבור מינימום של 10 דקות.
  2. כבשים הם מראש תרופות עם acepromazine (0.05 מ"ג / ק"ג), glycopyrrolate (0.005 מ"ג / ק"ג), ו tartrate butorphanol (0.2 מ"ג / ק"ג) IM, ויצא 15-20 דקות.
  3. הצוואר הוא מגולח שפשף את העור בניתוח. לאחר וריד הצוואר הוא מדמיין, 0.1 מ"ל של לידוקאין מוזרק SC על הווריד, את הקטטר מוחדר הווריד ומאובטחת על העור באמצעות תג זיהוי בעלי חיים מלט 2 "סרט בית חולים. במהלך הניתוח, בעלי החיים מקבלים 10 מ"ל / ק"ג / שעה של Plasmalyte 148 (על ידי זרימת כוח הכבידה).
  4. Diazepam (0.2 מ"ג / ק"ג) מנוהל IV, הרדמה מושרה עם נתרן thiopental (10 מ"ג / ק"ג). תרסיס לידוקאין endotracheal מוחל על קפלי הקול, כבשים הוא מחובר לצינורות, ומתוחזק על isoflurane (1.5-2.5% ב 100% O 2 בשיעור של 4 L / min) למשך הניתוח.
  5. חיה ממוקם שכיבה הגב על מחצלת מחומם מנת לשמור על חום הגוף במהלך הניתוח. צינור לקיבה מוכנס לתוך כרס פנימית כדי למנוע tympany מוגזמת.
  6. הבטן הגחון הוא מגולח העור מוכן לניתוח עם שלושה מסכת מנתחים Prepodyne. הבטן אז הוא מכוסה, להבטיח כי חשיפה נאותה של האתר כירורגית (הטבור לבטן הזנב) נשמר.
  7. חתך קו האמצע 15-20 ס"מ נעשית באמצעות electroscapel, caudally מן הטבור, ועל פי ileocecal ממוקם ברבע הימני התחתון של הבטן. מעי הזנב ואת cecum הם exteriorized אז. לאורך כל ההליך, טיפול של המעי ממוזער וטיפול נלקח על מנת להבטיח את המעי exteriorized נשמר לח עם חמימים (37-39 מעלות צלזיוס) פוספט סטרילי בופר סליין (PBS, pH 7.2).
  8. קטע 85 ס"מ של מעי (כלומר, "קטע המעי ') נמדד ואחר הידק עם מלקחיים זקן (מהדק מעיים) גדול מלקחיים קלי בסוף כל קטע. בתוך קטע המעי, "לולאות 'ו' interspaces" בין לולאות יוקם. מלקחיים זקן ממוקמות בצד של מעי להיות הצטרף (השקה), ואת מלקחיים קלי ממוקמים בצד קטע מעיים של מעי.
  9. מעי היא לחתוך בין כל זקן וקלי המלקחיים ואת קטע המעי המיועדים לולאות סמוקות בעדינות פעמיים עם 60 מ"ל של PBS חמים כדי להסיר ingesta.
  10. קוקטייל של ספקטרום רחב, אנטיביוטיקה (200 מ"ג ו -250 מ"ג enrofloxacin metronidazole ב PBS חם, נפח 60 מ"ל סה"כ) מופץ ברחבי קטע המעי והשאירו למשך 30 דקות.
  11. מסתיים חתך הפרוקסימלית ומ דיסטלי של מעי (למעט קטע המעי) מצטרפים כדי ליצור מערכת העיכול מתמשכת תפקודית. ראשית, מעי מיושרת על ידי שני תפרים להישאר, להציב את הגבולות mesenteric ו antimesenteric של המעי, בהתאמה. ואז, דפוס פשוטה תפר מתמשך (2-0 Vicryl) תושלם על שני הצדדים של המעי להצטרף המעי ביחד.
  12. PBS חם (3-5 מ"ל) מוזרק באתר השקה כדי לבדוק זליגת וכישלון תפר. לאחר מכן, קצה קלי המלקחיים הוא נצמד למשטח serosal של המעי, קרוב לאתר של האתר השקה, ו פנימה מתקדם באתר השקה כדי להבטיח את לומן המעי הוא גדול פטנט.
  13. קוקטייל האנטיביוטיקה היא להסיר את קטע המעי. בסוף כל קטע סגור עם דפוס תפר פשוט רציפה (תפר נספג; 2-0 Vicryl) ואחריו תבנית היפוך באמצעות תפר 2-0 Vicryl.
  14. 85 ס"מ באורך קטע המעי הוא מחולק לשלושה "לולאות" 15 ס"מ, שניים באורך 15 ס"מ "interspaces" בין הלולאות, ושני 5 ס"מ באורך בוטה סוף תאים ב Termini של קטע המעי (איור 1) . לולאות נוצרות על ידי הנחת תחבושת סביב המעי באמצעות 2-0 משי. ראוי לציין כי כלי mesenteric הגדולות אינן ligated במהלך הליך זה, כמו אלה נדרשים כדי לספק את המעי עם הדם, שמירה על יכולת הקיום של המעיים. כמו כן, חיבורי אותיות נשארים זמן רב, כפי שהם ישמשו להבטחת צנתרים.
  15. צנתרים (צינורות כלומר silastic) מזוהים בנפרד באמצעות סמן קבע. כדור סיליקון (5 מ"מ בקוטר) המקיפות את הקטטר, ממוקם 4-5 ס"מ מקצה קטטר כדי למנוע את הקטטר מלהחליק מתוך המעי (איור 1). לאחר עיקור על ידי מעוקר, במשחה שאינו אנטיביוטי (Orbeseal) מוכנס לתוך בסביבה נקייה מחיידקים סוף את הקטטר (3-5 מ"מ); זה מבטיח כי קטטר נשאר הפטנט (כלומר, זה לא להיות מחובר על ידי רירית השילה בתוך הלולאה).
  16. חתך קטן שהוצב ההיבט הגולגולת של כל אחת משלוש לולאות. כל חור מוגדל עם ההיכרויות צנתר ("המרחיב כלי" כלומר), וכן קטע 6-8 ס"מ של צנתר מוחדר לתוך caudallyלולאה, עד הכדור silcone עובר לתוך לומן (איור 1).
  17. בדופן המעי מאובטח סביב הקטטר עם תפר תיק מחרוזת (2-0 Vicryl). קטטר מובטחת נוספת המעי על ידי קשירת קטטר עם משי את הקשר שתחמו את קצה הגולגולת של הלולאה.
  18. אמפיצילין (5 מ"ל: 100 מ"ג / מ"ל ​​PBS חם) מוזרק לתוך הלולאה כל אינטרספייס, ואת המעי ממוקם חזרה בחלל הבטן. Cefazolin (8 מ"ל, 100 מ"ג / מ"ל ​​PBS חם) מוזרק לתוך חלל הצפק באמצעות חתך הבטן.
  19. חתך דקירה אחת קטנה נעשית דרך דופן הבטן סמוך החתך קו האמצע, ואת צנתרים הם exteriorized דרך אתר זה.
  20. עמדת והמתח של צנתרים מותאם בתוך חלל הצפק. שרירי הבטן סגורים עם דפוס תפר פשוט קטע (תפר נספג; מיתר מס '3), העור נסגר עם דפוס קטע מזרן האופקי (שאינם נספגים תפר; Supramid # 1).
  21. צינור מעוקל חלול נירוסטה (7 מזהה מ"מ, 10 מ"מ OD: 65 ס"מ אורך) מוחדר מתחת לעור ליד החתך בבטן, מנהרה מתחת לעור לאתר יציאה הזנב רק הצוואר בין הכתפיים. צנתרים מוכנסים לתוך הצינור ודחף קדימה לפחות 50% של אורך הצינור. צינורית עם צנתרים היא משכה אז מהעור באתר היציאה, חשיפת צנתרים.
  22. המתח של צנתרים מותאם באתר חתך דקירה, והעור נסגר עם Supramid # 1.
  23. צנתרים הפרט מזוהים ממוקם בתוך "כיס" תחבושת אשר sutured לעור עם Supramid # 1. נרתיק מגן על צנתרים מנזק הבאים.
  24. לאחר הניתוח, כבשים מוזרקים IM במינון ראשונית עם flunixin (SID) 2.2 מ"ג / ק"ג, ואחריו מינון אחזקה של 1.1 מ"ג / ק"ג סיד במשך 3 ימים. כבשה גם מוזרקים IM עם Hemostam (3 מ"ל) ו enrofloxacin (2.5 מ"ג / ק"ג) sid עבור 3 ו - 5 ימים, בהתאמה. בעלי חיים מתוחזקים על Plasmalyte תוך ורידי 148 עם פתרון דקסטרוז 5%, מנוהל באופן רציף עם משאבה peristaltic כדי להבטיח זרימה (145 מ"ל / שעה) ממשיך ללא קשר למיקום הגוף. מותר להם לשתות כרצונך, אבל להאכיל מוגבל עד כרס פנימית רגילה פונקציות המעי משוחזרים. צריכת המזון, צריכת המים, טמפרטורת הגוף, מעבר של צואה ושתן, רעשי בטן, אי נוחות בבטן, התנהגות, ריכוז הגלוקוז בדם נמצאים תחת פיקוח הדוק (ההצעה); בעת הצורך, ריכוזי גלוקוז בעירוי נוזלים מותאמים לשמור על ריכוז הגלוקוז בדם בטווח התקין. דם כימיה המטולוגיה (כלומר phosphatase אלבומין, אלקליין, אלאנין aminotransferase, סידן עמילאז, כולסטרול, קריאטינין, גלוקוז, פוספט אורגניים, בילירובין הכולל, הכולל חלבון, אוריאה, גלובולין, נתרן, אשלגן, כלור, חמצן בלחץ חלקי, pH, חלקית פחמן דו חמצני בלחץ, ביקרבונט, ופחמן דו חמצני הכולל, אדום ולבן תא ספירת דם, המטוקריט, המוגלובין, דם לבנים ההפרש תא לספור ספירת הטסיות) מנוטרים לפני ומיד לאחר הניתוח, וכל יום נוספים לאחר מכן. לאחר פעולת המעיים נורמלי מתחיל, טיפול תוך ורידי נוזל מסתיימת ובעלי חיים מועברים כרי המרעה (כלומר 5-7 ימים אחרי ניתוח). בעלי חיים נשמרות עטים בודדים (בטווח ראייה של בעלי חיים אחרים), ובכך להפחית את הלחץ ואת הסיכוי לקיום נזק שקיות קטטר שלהם (למשל, על ידי לעיסת penmate א).
  25. כדי להזריק לתוך לולאות טיפולים בודדים, 5 מ"ל של הטיפול מוזרק לתוך הקטטר באמצעות מזרק סטרילי מצויד מד 18, בוטה, הסתיים מחט. כדי להבטיח את הפקדת כל הטיפול לתוך הלולאה, הצנתר מוזרק אז עם 3 מ"ל של PBS.

נקודות קריטיות:

נהלים חשיבות מכרעת להצלחת התהליך הזה כירורגית כוללים: (1) לאימות המעי אינו מעוות על עצמה לפני הקמת השקה, (2) להבטיח את שלמות patency של השקה, (3) במידה מספקת כדי להבטיח את הקטטר הקיר לולאה עם המיתר המגדירה את סוף הגולגולת של הלולאה, אך להבטיח כי הקובץ המצורף אינו משפיע על patency של הקטטר, (4) צמצום הטיפול במעי להבטיח כי המעי exteriorized נשמר לח; (5) להבטיח את הקטטר המתאים המתח; (6) להבטיח כי היושרה של הקטטר אינו מושפע במהלך שרירים תפירת עור; (7) על ידי מניעת הזלילה כבשים שלאחר הניתוח (כלומר בתקופת שלאחר הניתוח ileus) אשר יכול לגרום לירידת impaction הכרס של פונקציה כרס פנימית; ו (8) להבטיח כי בעלי החיים מקבלים טיפול מספיק נוזלים תוך ורידי במשך 3-5 הימים הראשונים שלאחר הניתוח, כי ריכוזי גלוקוז בדם מנוטרים בקפידה, ריכוזי גלוקוז בעירוי נוזלים הם adjusטד במידת הצורך על מנת למנוע היפוגליקמיה.

figure-protocol-1
באיור 1. ייצוג סכמטי של לולאות ileal צינתור. הערה שלוש 15 ס"מ באורך צינתור "לולאות", שני 15 ס"מ באורך אי - צינתור "interspaces" שנוצר בין הלולאות, ושני 5 ס"מ באורך מקטעי הטרמינל, שהוקם בתוך כל קטע ס"מ באורך "מעיים 85 "מעי של כבשה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

בהליך זה, היינו יכולים להקים בהצלחה צנתרים בלולאות המעי הוקמה בתוך מעי של כבשה. על ידי הקפדה על הטיפול שלאחר הניתוח מחמירות, חיות התאושש במהירות ההליך וחזר לפעילות רגילה 5-7 ימים לאחר הניתוח. אנחנו נקבע כי הקמתה של צנתרים בתוך לולאות לא להשפיע על תפקוד מערכת החיסון ברירית המעי או (מידע לא מוצג) ובעלי חיים יכולים לחיות לפחות 8 wk לאחר הניתוח. הליך זה מאפשר לנו להציג טיפולים מרובים לתוך תאים החיסונית ברורים על פני הפסקה ממושכת, פעם חיות התאוששו מן הניתוח, כדי למדוד באופן אמפירי את ה...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

נהלים על כל חיות הניסוי אושרו על ידי ועדת Animal Care מוסדיים (השתמש בבעלי חיים פרוטוקול # 0609) ו - בעקבות ההנחיות שנקבעו על ידי המועצה הקנדית של טיפול בבעלי חיים.

אין לנו שום דבר לגלות.

תודות

המחקר לא יכול היה להשלים ללא מסירות ואת המאמצים של אנשים רבים על החקלאות Agri-Food Research Centre בקנדה, Lethbridge, אלברטה, קנדה. בהקשר זה, אנו מודים: טרה Shelton לקבלת טיפול לפני ואחרי הניתוח של בעלי חיים, הכנה כירורגי, ולאחר הרדמה, ניתוח של דגימות, וסיוע עם וידאו הדמיה: רנדי ויילד אסטלה קוסטה לטיפול טרום שלאחר הניתוח; ג'ני Gusse לניתוח מדגם; ביירון לי את התמונה trocar; ובריאן Egland לכבשים בעלי. אנו מודים גם ברנט זלינגר (מחלקת מדעי הביולוגיה, אוניברסיטת Lethbridge) לאספקת ציוד וידאו ועצות, כמו גם סיוע אחרים (כלומר ייצור המבצעת), ואת תוכנית הלימודים מחדש פיתוח מרכז, אוניברסיטת Lethbridge עבור המומחיות videography. מחקר זה נתמך בחלקו על ידי תרומות של מזון וחומרים מתקדמים ברשת (GDI), קנדה, אלברטה בשר לפיתוח התעשייה קרן (GDI), ואת החקלאות Agri-מזון בקנדה (GDI ו JPK).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

קטגוריה / פריט מספר חברה קטלוג
מנתח אספקה
כפפות כירורגיות WDDC 103091
כירורגי מסכה WDDC MAX53013
כירורגי שמלת CDMV ב 3365
OB סינר WDDC 900062
כירורגי כובע WDDC 903271
EZ מברשת קרצוף WDDC BDC377479
הרדמה ותרופות
מכונת הרדמה בויל
Sodasorb WDDC 108638
ראי גרון WDDC
ראי גרון להב (blade מילר מס '4) WDDC 902667
צינור Endotracheal (7.0-8.5 מ"מ) WDDC
לידוקאין endotracheal תרסיס WDDC 103364
Acepromazine WDDC AUS01020
Glycopyrrolate WDDC SAB2880
Butorphanol tartrate WDDC AYE304541
Diazepam WDDC sab790
Thiopental נתרן WDDC 103508
אפינפרין hydrochloride WDDC 103856
Doxapram Strathcona לרוקחות
Isoflurane WDDC 100339
Hemostam WDDC 103857
Flunixin WDDC sch140100
Enrofloxacin WDDC hll0049
Metronidazole WDDC 101653
אמפיצילין WDDC NOV67185-6
Cefazolin WDDC nov69397
ציוד כירורגי וציוד
Electroscapel Macan MV8
חימום מחצלת קיין PHMD-48
צינור קיבה (צינורות Nalgene 5 / 16 "ID) פישר סיינטיפיק
מחט הנהג WDDC 108338
אדיסון חום המלקחיים WDDC 911075
שן עכברוש המלקחיים CDMV 5275
קלי המלקחיים WDDC 901133
יתוש hemostat WDDC 108471
Carmalt המלקחיים WDDC 901225
איזמל לטפל WDDC 900285
איזמל להב # 22 WDDC 900511
מצנבאום מספריים WDDC 901166
שארפ חד מספריים WDDC 108264
מגבת מהדק WDDC 901213
Allis רקמות המלקחיים WDDC 901201
זקן הסגל של המלקחיים WDDC 904226
קערת נירוסטה פלדה WDDC 903601
נירוסטה trocar (מעוגל) מקומי הספק
צנתר ההיכרויות WDDC 11440
כירורגי מגבת CDMV 7972
פנויה וילון WDDC 900035
Steri וילון CDMV 2323
הנח (40 x 40 ס"מ) CDMV 8358
וילון כירורגי (7 "x 11" פתיחה) CDMV 2694
Vicryl (2-0) WDDC JJMJ333H
משי 2-0 WDDC 105248
מיתר # 3 WDDC CSL547-2070
Supramid # 1 WDDC CSL547-3040
מחטים (חיתוך ללא חיתוך) WDDC
צנתר
צינורות Silastic (0.040 "מזהה, .085" OD) פישר סיינטיפיק 11-189-15d
Orbeseal משחה WDDC 106344
סיליקון שקוף (732 רב תכליתי איטום) מקומי הספק
סוף בלאנט מחט WDDC 905035
דה מרקר (תעשייתי קבע) מקומי הספק
כיס צנתר (בנוי הפלסטר 7.5 ס"מ) WDDC 104094
תחבושות
החולים קלטת (2 ") WDDC 103842
החולים קלטת (1 ") WDDC VLMRENF20
גזה ספוג 4x4 WDDC 107551
גזה נאחזים WDDC 107633
הפלסטר 7.5cm WDDC 104094
הפלסטר rippable תחבושת WDDC 104093
Needles מזרקים
מזרק (60 מ"ל) WDDC 104004
מזרק (10 מ"ל) WDDC bdc301604
25 גרם מחט WDDC BDC305122
20 גרם מחט WDDC BDC305175
18G מחט WDDC 903353
תוך ורידי
Intracath IV קטטר (16G 8 ") WDDC bdc3831621
IV הממשל להגדיר (10 ירידה) WDDC 101797
0.9% NaCl פתרון WDDC BAXJB1322P
Plasmalyte 148 פתרון WDDC BAXJB2534
דקסטרוז WDDC MCT60190
Peristaltic משאבה קול בן הזוג 7524-10
תג זיהוי בעלי חיים מלט מקומי הספק
Sanatizers / חיטוי
Germex פתרון WDDC mtc60270
איזופרופיל אלכוהול WDDC 104590
Stanhexidine ניקוי WDDC 109248
Prepodyne פתרון WDDC 105710
Prepodyne לשפשף WDDC 105711

הפצה מערבית והתרופות מרכז בע"מ, אדמונטון, AB.

ב הפצה מרכז וטרינרי תרופות בע"מ, רח' Hyacinthe, QE.

מקורות

  1. Vidal, J. E., McClane, B. A., Saputo, J., Parker, J., Uzal, F. A. Effects of Clostridium perfringens beta-toxin on the rabbit small intestine and colon. Infect. Immun. 76, 4396-4404 (2008).
  2. Santos, R. L., Zhang, S., Tsolis, R. M., Baumler, A. J., Adams, L. G. Morphologic and molecular characterization of Salmonella typhimurium infection in neonatal calves. Vet. Pathol. 39, 200-215 (2002).
  3. Uzzau, S., Leori, G. S., Petruzzi, V., Watson, P. R., Schianchi, G., Bacciu, D., Mazzarello, V., Wallis, T. S., Rubino, S. Salmonella enterica serovar-host specificity does not correlate with the magnitude of intestinal invasion in sheep. Infect. Immun. 69, 3092-3099 (2001).
  4. Gerdts, V., Uwiera, R. R. E., Mutwiri, G. K., Wilson, D. J., Bowersock, T., Kindane, A., Babiuk, L. A., Griebel, P. J. Multiple intestinal 'loops' provide an in vivo model to analyse multiple mucosal immune responses. J. Immunol. Methods. 256, 19-33 (2001).
  5. Greibel, P. J., Davis, W. C., Reynolds, J. D. An analysis of the growth and differentiation of b cells isolated from follicles from ileal Peyer's patch of sheep. Immunology. 75, 601-607 (1992).
  6. Motyka, G., Greibel, P. J., Reynolds, J. D. Agents that activate protein kinase C resue sheep ileal Peyer's patch B cells from apoptosis. Eur. J. Immunol. 23, 1314-1321 (1993).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

החדרת קטטרמעי אילםהליך כירורגיקטטרים לטווח ארוךמקטע מעימודל לולאהשינויים אימונולוגייםאנטיביוטיקה רחבת ספקטרוםטכניקת אנסטומוזיס