למחברים אין ניגודי עניינים להצהיר עליהם.

wolbachia זיהום חיידקי ב תסיסנית

Wolbachia Bacterial Infection in Drosophila

Wolbachia זיהום חיידקי ב תסיסנית

שמי הוא Voia Friedman. אני חוקרת עמיתה באוניברסיטת פרינסטון. והיום אני עומדת לספר לכם על מספר פרוטוקולים שפיתחתי כדי להדביק, בתחילה כדי לבודד, לחזור מההמילי של זבובים נגועים, ומאוחר יותר לעזור להזריק את ההמילי לזבובים שאינם נגועים.לסיכום, זהו פרוטוקול פשוט מאוד לבידוד המין לצורכי בסיס. בשלב זה תשתמשו במכשיר של Mepo הכולל מסנן המונח על גבי מבחנה מסוג Eppendorf. תהליך העבודה מתחיל עם כ-100 זבובים. הרגיעו את הזבובים, העבירו אותם למכשיר הסינון (ניתן להשתמש במשפך כדי להקל על ההעברה למכשיר) ושטפו אותם ב-70% ethanol.פשוט מסננים את הנוזל, ניתן לשפוך את האתנול, ואחרי שלוש שטיפות, את השטיפה האחרונה מבצעים עם מים מזוקקים כיוון שאינכם רוצים שהבקטריות יהיו עם עקבות של אתנול. לאחר מכן, מעבירים את התוכן למבחנה חדשה, ומבצעים ספינטדאון במיקרוצנטריפוגה למשך שתי דקות. לאחר מכן ניתן להזריק זאת; רק להאכיל זבובים שאינם מושפעים.לסיכום, קח סרט דבק דו-צדדי; בדרך כלל לסרטים אלה יש שני צדדים, כאשר צד אחד הוא דביק יותר מהשני. השאר את הצד הדביק פונה כלפי מעלה, מכיוון שזהו הצד שבו תדביק את הזבובים מעליו. באופן בסיסי, במכשיר הגז, אם תניח את הפס מעליו, לא תהיה זרימת גז והזבובים יתעוררו אם הם נמצאים מעל הפס.כך שתוכלו פשוט לכוון את הזרימה, וליצור מעין כיסוי, תא קטן באמצעות סרט דביק. לאחר מכן מכוונים את הגז מעל הזבובים. אז אתם מניחים את התאורה הזו כאן עם הסרט הדביק, והזבובים נמצאים שם.הדביקו את הזבובים על החלק העליון של הסרט, כולם באותו כיוון, והניחו את ראשם לכיוון ממנו תכניסו את המחט. כך תוכלו פשוט לעבור מעל הכנף; ודאו שהם אינם עפים, שכן אינכם רוצים שהם יעוף. אם הם התעוררו במהלך הפעולה, אינכם רוצים שהם יברחו.לכן, ודאו שאתם מפעילים לחץ קל עם הקצה נגד הכנפיים של הזבוב באזור הזנב. זה בסדר אם הכנפיים יינזקו. כאשר תסירו את הזבובים לאחר ההזרקה, סביר להניח שהם יאבדו את כנפיהם ממילא, אך הם ישרדו.זה יכול להיות שימושי כיוון שלא תאבדו את הזבובים, לכן הוא מניח שמן מינרלי על המיקרומטר עבור החלק האחורי של המחט, לאחר מכן את מחט ההזרקה, ואז ניתן פשוט לכוונן את הלחץ כדי להעלות את החומר לקצה המחט. אני הזרקתי כמות שבין 10 ל-15 nanoliters, אך העיקר הוא לשמור על עקביות. אוקיי, פרט חשוב אחד בניסוי זה הוא שהזבוב, ברגע שהוא מוזרק, כפי שראיתם, המחט צריכה לחדור רחוק ככל האפשר דרך החלק העליון של הבטן.מכיוון שכאן, בעיקר כאשר המחט חודרת, ישנו מרחב גדול יותר לתנועה למעלה ולמטה. ובשאיפה להיות קרובים יותר לקיטיקולה, הסבירות לחדירה לאיברים חיוניים בזבוב היא נמוכה יותר. סביר מאוד שלא תגרימו חור במעי, למשל, דבר שעלול להרוג את הזבוב שבו אתם מבצעים את הניתוח.שמי הוא Voia Friedman. אני חוקרת עמיתה באוניברסיטת פרינסטון במעבדתו של Eric Hels. והיום אני רוצה לספר לכם על הפרוטוקול שראיתם כעת, בהדגמה.פרוטוקול זה בוצע כיוון שרצינו להוכיח ש-UBA מסוגל לחצות רקמות. UBA הוא אחד הטפילים התו-תאיים המצליחים ביותר על פני כדור הארץ, והוא מדביק בין 20% ל-70% מהחרקים ומספר רב של חלקיקים.כמו כן, הדבר חשוב מאוד בהקשר של מחלות בבני אדם, כיוון שהם מזיהים גם נמטודות המעבירות מחלות כמו עיוורון נהרות או Onchocerciasis. לפיכך, CCA הוא האנדוסימביונט ההכרחי בתולעים אלה. ישנו עניין רב בשימוש ב-CCA גם כאמצעי לשליטה במחלות טפיליות המועברות על ידי יתושים וקרציות, ועל ידי יתושים כגון מלריה ודנגי.פרוטוקול זה פותח בעיקרו כדי להראות שברגע ש-CCA נמצא בתוך חלל הבטן של זבוב, הוא יכול לחצות רקמות ולהגיע לנבט. באופן בסיסי, מה שניתן לראות כאן הוא השחלה של drosophila, וברגע שהחומר נמצא בהמליף, הוא יכול לחצות את המעטפת הפריטוניאלית העוטפת את השחלה.ואז הם חוצים שכבת שריר. למעשה, אחד המקומות הראשונים שבהם הם חודרים אל תוך השחלה הוא תמונת התא הגזע הסומטי. ומשם הם יכולים להגיע לקו הנבט.חיידק זה מועבר באותו האופן שבו מועברים מיטוכונדריה, כלומר באמצעות האם, דרך הציטופלזמה הנוכחת בביצית. לכן, עליהם להיות נוכחים בקו הנבט. זו הסיבה לפיתוח פרוטוקול זה.פרוטוקול זה יכול להיות שימושי מאוד, שכן הדרך המסורתית שבה אנשים היו מנסים לבצע התעתוק ל-wbaa היא באופן בסיסי על ידי לקיחת wbaa והחדרת מין חרק חדש. הדבר היה נעשה באמצעות הזרקות מיקרוסקופיות לתוך העובר, אך אלו הן פרוצדורות מורכבות הרבה יותר.ובעיקרה, אנחנו פשוט מנצלים כאן את הביולוגיה של ה-o, כיוון שהם מסוגלים לחצות רקמות ולנוע לרקמות התאי הגזע, ומשם הם יכולים לעבור לקו הנבט. כך קל יותר להוציא UBA ממינים מסוימים של חרקים נגועים, והם יכולים להיות מועברים למינים שאינם נגועים. כנראה שזהו ההזרקה עצמה.בעיקר עליכם להיזהר לנייד את הזבוב בצורה הטובה ביותר שניתן. אנו משתמשים בסרט דביק דו-צדדי ועליכם להחדיר את המחט קרוב ככל האפשר לזבוב ובמקביל אליו, כדי לא להחדירה עמוק מדי. כך הסיכוי שנגרום למות הזבוב לאחר ביצוע הניתוח יהיה נמוך יותר.

Wolbachia זיהום חיידקי ב תסיסנית

במאמר זה

גילויים

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות