מאמר שיטה

Dissection של 6.5 עוברים DPC עכבר

DOI:

10.3791/160

⸱

25 בפברואר 2007

 , 
1Massachusetts General Hospital, Harvard Stem Cell Institute, Harvard Medical School

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

בידוד של postimplantation בשלב עוברי מאפשר ללמוד דפוסים גן ולנתח התא השושלת תהליכי קבלת ההחלטות במהלך ההתפתחות העוברית, אבל לנתיחה תקין של העובר מוקדם יכול להיות מאתגר. פרוטוקול זה מתאר שיטה לבידוד מוקדם פס פרימיטיבי, בשלב עוברי (~ 6.5 ימים הודעה coitum [DPC]).

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ניתוח דפוסי ביטוי גנים במהלך השלבים המוקדמים של ההתפתחות העוברית יונקים יכולים לספק רמזים חשובים על תפקוד אינטראקציה גן תאים תאים, מנגנוני איתות כי דפוסים מדריך עובריים. עם זאת, דיסקציה של העובר עכבר decidua זמן קצר אחרי ההשתלה יכול להיות הליך מאתגר, ותיעוד מפורט צעד אחר צעד של תהליך זה הוא חסר.

כאן אנו מדגימים כיצד שלאחר ההשתלה (6.5 DPC) עוברים מבודדים תחילה לנתח את הרחם של עכבר בהריון (זיהוי של coitum את התקע הנרתיק יועד 0.5 poist יום) ולאחר מכן לנתח את העובר מן decidua אימהית. דיסקציה של הממברנה של רייכרט מתואר כמו גם הסרה של חרוט ectoplacental.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Dissection של איברי הרבייה של העכבר נקבה

  1. חיות בהריון מומתים בחנק CO 2 באמצעות גז דחוס.
  2. הנח את פרקדן בעלי חיים על משטח סופג ולטבול אותו אתנול 70% כדי להפחית את הסיכון של זיהום דיסקציה עם שיער העכבר.
  3. לצבוט את העור לעשות חתך לרוחב קטן קו האמצע עם מספריים כירורגי רגיל. מתחי את העור היטב מעל ומתחת החתך ומושכים את העור כלפי חוץ הראש והזנב לחשוף את הבטן.
  4. אחוז הצפק עם מלקחיים ולחתוך לחשוף את חלל הבטן.
  5. אתר את איברי הרבייה באזור הגבי של חלל הגוף: שתי קרניים הרחם, oviduct ואת השחלות.

Streak בשלב פרימיטיבי (6.5 DPC) Dissection

  1. הסר את קרן הרחם ידי אחיזה הרחם להלן oviduct ופצע אותו בחינם יחד mesometrium. המקום הרחם גזור בקרח קר PBS.

    figure-protocol-1

    איור 1

  2. הפרד העובר על ידי חיתוך בין אתרים ההשתלה יחד קרן הרחם.

    figure-protocol-2

    איור 2


  3. תפוס את רירית הרחם שרירים ידי הזזה מלקחיים של שען בין שכבת השריר שמסביב רקמת decidua אפוף. מקלפים את שכבת השריר האחורי, חשיפת decidua.

    figure-protocol-3

    איור 3

  4. קליפ את חלק decidua נחשף בפסגת (כ 1 / 5 של הרקמה decidua) אשר יחשוף את קצה midventral או דיסטלי של העובר סגורה.

    figure-protocol-4

    איור 4

  5. העובר יכול להיות הפגיזו מחוץ באמצעות קצות מלקחיים. פירס decidua עם מלקחיים המקיפים את העובר ואת מלקחיים לפתוח decidua לקרוע לגזרים.

    figure-protocol-5

    איור 5

  6. לאחר העובר מוסר, קרום של רייכרט, עדיין עשויים להיות מצורפים, כמו גם חרוט ectoplacental (trophoblast). העובר יכול להיות גזור נוספת על ידי דיסקציה זהירה.

    figure-protocol-6
    איור 6

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Postimplantation בעכבר מתרחשת בין 4.5 DPC והלידה. שיטה זו דיסקציה יכול להיות מיושם, למעשה כמתואר, כדי לבודד מוקדם או מאוחר יותר עוברים לשלב ב 5.5-8.5 DPC.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
פינצטה למיקרו-דיסקציה, משוררת, ישרהכליRoboz Surgical Instruments Co.RS-51302 זוגות
פינצטת מיקרו-דיסקציה דגם #55 INOXכליRoboz Surgical Instruments Co.RS-50102 זוגות
Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline (1x)ריאגנטInvitrogen14190
צלחת פטרי סטרילית מפוליסטירן של FisherbrandכליFisher Scientific08-757-12
4% Paraformaldehyde ב-PBSריאגנט
מספרי דיסקציה ישרים בעלי קצה חדכליFisher Scientific08-940
נקבות עכברים בהריוןבעל חיים
מיקרוסקופ דיסקציהמיקרוסקופ

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Nagy, A., et al. Manipulating the mouse embryo: A laboratory manual third edition. , Cold Spring Harbor Laboratory. Cold Spring Harbor, New York. (2003).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

Reichertjeg Ectoplacental ConePFAWhole Mount In SituBMP4

מאמרים קשורים