Method Article

גרורה ניסויית Assay

DOI:

10.3791/1942

⸱

August 24th, 2010

 , 
1Department of Biomedical Genetics, University of Rochester Medical Center, 2Department of Dermatology, University of Rochester Medical Center

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מאמר זה מתאר את הנהלים של assay גרורות ניסיוני המשמש כדי לקבוע את פוטנציאל גרורתי של שורות תאים סרטניים אנושיים.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

גרורה היא הגורם המוביל למוות בקרב חולי סרטן. כדי להבין את המנגנון של גרורות, assay גרורות ניסיוני הוקם באמצעות עכברים immunodeficient. מאמר זה מתאר את ההליכים הכרוכים assay זה, כולל הכנת המדגם, הזרקה תוך ורידית, ותאי culturing של גרורות בריאות. בקצרה, מספר שנקבע מראש של תאים סרטניים אנושיים היו מוכנים

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. לדוגמא הכנה

  1. לגדל תאים ומחוברות ~ 70% בתקשורת הספציפיים שלהם עם גורמי גדילה או FBS (למשל, DMEM עם FBS 10% MC-1 תאים). לשאוב התקשורת מהצלחת בעדינות לשטוף מספר פעמים עם 1 x PBS (8 g / L של NaCl, 0.2 גר '/ L של KCl, 1.15 גר' / L של Na 2 HPO 4 0.7 H 2 O, 0.2 גר '/ L של KH 2 PO 4, pH 7.3).
  2. לשאוב PBS ומוסיפים 2 מ"ל של טריפסין 0.05% ב versene (0.014 g / L של פנול אדום 0.2 גרם / L של EDTA-Na ב 1 x PBS, pH 7.2). בעדינות רוק צלחת כדי להקל על נ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

גרורה היא הגורם המוביל למוות בקרב חולי סרטן. היא כוללת ארבעה צעדים מרכזיים: ניתוק של תאים סרטניים מ לוקוסים העיקרי שלהם, כניסתם למחזור (intravasation), יציאתם מן המחזור (extravasation), הישרדות וצמיחה באיבר מרוחק. גרורות האדם נחשב תהליך איטי לידי ביטוי לעתים קרובות, לאחר שנים של חביון. כדי ללמוד ההתקדמות שלה מבעוד מועד, assay לעיל ניסיוני מהיר יחסית הוקמה בשנת עכברים immunodeficient. 4 מאז הקמתה, נעשה בו שימוש יעיל לבודד תאים שונים עם יכולות גרורתי, לזהות גנים למעלה או .......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

פרוטוקול זה נבדק אופטימיזציה תחילה במעבדה של ד"ר ריצ'רד היינס (MIT). המימון ניתן על ידי פרס NYSTEM IDEA (ל LX) ורות ל Kirschstein בפרס הלאומי לחקר שירות (כדי LX).

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
DMEMInvitrogen10313-021
FBSHycloneSH30088.03
HBSSInvitrogen14175-095
NaClSigma-AldrichS9888
KClMallinckrodt Baker Inc.6838-04
Na2 HPO4.7H2O Mallinckrodt Baker Inc.7896-04
KH2PO4Mallinckrodt Baker Inc.7100-12
פנול אדוםסיגמא-אולדריץ'P3532
EDTA-NaEMD Millipore4010
טריפן כחולInvitrogen15250-061
טריפסין 2.5%Invitrogen15090-046
אתנולUltrapure200-CSGP
50 מ"ל שפופרת פלקוןVWR בינלאומי89039-656
צינורות מיקרוצנטריפוגהAxygen ScientificMCT-175-C
Falcon 70μ m מסננת תאיםBD Biosciences352350
5 מ"ל צינור תרבית בזVWR בינלאומי60818-576
HemacytometerHausser Scientific15170-208
מזרק 1 מ"לBD Biosciences329650
30 ½ מחט מדBD Biosciences305106
מרסן עכברPlas Labs Inc. 551-BSRR
מספריים כירורגייםפישר סיינטיפיק08-940
מלקחייםפישר סיינטיפיק08-902
מיקרוסקופ ניתוחמכשירי ניקון SMZ1500
צנטריפוגה ספסלתרמו פישר סיינטיפיק, בע"מ
75003491

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Xu, L. Gene expression changes in an animal melanoma model correlate with aggressiveness of human melanoma metastases. Mol Cancer Res. 6 (5), 760-760 (2008).
  2. Clark, E. A., Golub, T. R., Lander, E. S., Hynes, R. O. Genomic analysis of metastasis r....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Experimental Metastasis AssayTail Vein InjectionImmunodeficient MiceLung MetastasesCell CultureCell ViabilityDissecting MicroscopeMetastatic AbilityCancer Cell LinesMetastasis Quantification

Related Articles