מאמר זה מתאר את הנהלים של assay גרורות ניסיוני המשמש כדי לקבוע את פוטנציאל גרורתי של שורות תאים סרטניים אנושיים.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
במאמר זה
סיכום
תקציר
גרורה היא הגורם המוביל למוות בקרב חולי סרטן. כדי להבין את המנגנון של גרורות, assay גרורות ניסיוני הוקם באמצעות עכברים immunodeficient. מאמר זה מתאר את ההליכים הכרוכים assay זה, כולל הכנת המדגם, הזרקה תוך ורידית, ותאי culturing של גרורות בריאות. בקצרה, מספר שנקבע מראש של תאים סרטניים אנושיים היו מוכנים
פרוטוקול
1. לדוגמא הכנה
- לגדל תאים ומחוברות ~ 70% בתקשורת הספציפיים שלהם עם גורמי גדילה או FBS (למשל, DMEM עם FBS 10% MC-1 תאים). לשאוב התקשורת מהצלחת בעדינות לשטוף מספר פעמים עם 1 x PBS (8 g / L של NaCl, 0.2 גר '/ L של KCl, 1.15 גר' / L של Na 2 HPO 4 0.7 H 2 O, 0.2 גר '/ L של KH 2 PO 4, pH 7.3).
- לשאוב PBS ומוסיפים 2 מ"ל של טריפסין 0.05% ב versene (0.014 g / L של פנול אדום 0.2 גרם / L של EDTA-Na ב 1 x PBS, pH 7.2). בעדינות רוק צלחת כדי להקל על נ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
גרורה היא הגורם המוביל למוות בקרב חולי סרטן. היא כוללת ארבעה צעדים מרכזיים: ניתוק של תאים סרטניים מ לוקוסים העיקרי שלהם, כניסתם למחזור (intravasation), יציאתם מן המחזור (extravasation), הישרדות וצמיחה באיבר מרוחק. גרורות האדם נחשב תהליך איטי לידי ביטוי לעתים קרובות, לאחר שנים של חביון. כדי ללמוד ההתקדמות שלה מבעוד מועד, assay לעיל ניסיוני מהיר יחסית הוקמה בשנת עכברים immunodeficient. 4 מאז הקמתה, נעשה בו שימוש יעיל לבודד תאים שונים עם יכולות גרורתי, לזהות גנים למעלה או .......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תודות
פרוטוקול זה נבדק אופטימיזציה תחילה במעבדה של ד"ר ריצ'רד היינס (MIT). המימון ניתן על ידי פרס NYSTEM IDEA (ל LX) ורות ל Kirschstein בפרס הלאומי לחקר שירות (כדי LX).
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| DMEM | Invitrogen | 10313-021 | |
| FBS | Hyclone | SH30088.03 | |
| HBSS | Invitrogen | 14175-095 | |
| NaCl | Sigma-Aldrich | S9888 | |
| KCl | Mallinckrodt Baker Inc. | 6838-04 | |
| Na2 HPO4.7H2O | Mallinckrodt Baker Inc. | 7896-04 | |
| KH2PO4 | Mallinckrodt Baker Inc. | 7100-12 | |
| פנול אדום | Sigma-Aldrich | P3532 | |
| EDTA-Na | EMD Millipore | 4010 | |
| טריפן כחול | Invitrogen | 15250-061 | |
| טריפסין 2.5% | Invitrogen | 15090-046 | |
| אתנול | Ultrapure | 200-CSGP | |
| מבחנת פלקון 50 ml | VWR international | 89039-656 | |
| מבחנות מיקרוצנטריפוגה | Axygen Scientific | MCT-175-C | |
| מסנן תאים Falcon 70μm | BD Biosciences | 352350 | |
| מבחנת תרבית פלקון 5ml | VWR international | 60818-576 | |
| המוציטומטר | Hausser Scientific | 15170-208 | |
| מזרק 1 ml | BD Biosciences | 329650 | |
| מחט 30 ½ gauge | BD Biosciences | 305106 | |
| מכשיר קיבוע לעכברים | Plas Labs Inc. | 551-BSRR | |
| מספריים כירורגיים | Fisher Scientific | 08-940 | |
| פינצטה | Fisher Scientific | 08-902 | |
| מיקרוסקופ לדיסקציה | Nikon Instruments | SMZ1500 | |
| צנטריפוגה לשולחן | Thermo Fisher Scientific, Inc. | 75003491 |
מקורות
- Xu, L. Gene expression changes in an animal melanoma model correlate with aggressiveness of human melanoma metastases. Mol Cancer Res. 6 (5), 760-760 (2008).
- Clark, E. A., Golub, T. R., Lander, E. S., Hynes, R. O. Genomic analysis of metastasis r....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
תגיות
