הסרת פופריום חרקים: שיטה לחקירת גולמים

תקציר

מקור: Fukutomi, Y., et al. Methods for Staging Pupal Periods and Measurement of Wing Pigmentation of Drosophila guttifera.J. Vis. Exp. (2018).

מאמר זה מתאר טכניקה להסרת בובה של חרק תוך שמירה על הגלמים הפנימיים שלמים ולכן כשירים לחקירה נוספת. הפרוטוקול לדוגמה מציג את ההליך עם Drosophila guttifera; עם זאת, טכניקה זו ישימה למיני דרוזופילה אחרים.

פרוטוקול

פרוטוקול זה הוא קטע מתוך Fukutomi et al., Methods for Staging Pupal Periods and Measurement of Wing Pigmentation of Drosophila guttifera, J. Vis. Exp. (2018).

1. הסרת בובה

NOTE הגלמים של דרוזופילה מכוסים במבנה הנקרא גולם. חרק של Muscomorpha (זבובים) אינו משיל את הקוטיקולה הזחלית שלו בגור; במקום זאת, הוא מקשה את הקוטיקולה לאחר אפוליזה, ומשתמש בה ככיסוי מגן של הגולם, הגולם. לגולם השוהה בתוך בובה יש קוטיקולה גולמית אמיתית, שהיא רכה ושברירית מאוד. לפני שאפוליזה מתרחשת סביב P4(ii), אפיתליה ובובה מחוברים יחד, ולכן הסרת הבובה ללא נזק קשה מאוד. לאחר P5, הסרת הבובה מייגעת, אך שימושית לתצפית מורפולוגית ולהגדרת שלבי הגולם. התהליך מתבצע כדלקמן.

1. הדביקו פיסת סרט דו-צדדי על מגבת נייר.
2. הניחו גולם על סרט דו-צדדי בצד הגחוני כלפי מעלה (איור 1A).
3. אתר את הרווח בין הצד הקדמי של הבובה לבין הגולם. אחזו והסירו את הבובה סביב רווח זה באמצעות מלקחיים, וחשפו את הצד הקדמי של ראש הגולם.
4. הכנס קצה של מלקחיים על ידי הזזתו במקביל לציר הקדמי-אחורי. הרימו את קצה המלקחיים כדי לשבור את הגלמים באופן מקומי. חזור על פעולה זו עד שהשבירה מגיעה לחלק האחורי של הגולם. ודאו שנוצר גם רווח בין רגלי הבובה לרגלי הגולם, ושברו את הצד הגחוני של הבובה ומזערו את הנזק לגלמים הפנימיים (איור 1B).
5. לאחר ששברו את הבובה ככל האפשר, הוציאו את הגלמים בעזרת מברשת צבע עדינה (#5/0) (איור 1C).
6. מניחים את הגלמים על פיסת נייר טישו שהורטבה ב-ddH₂O ומונחת בכלי פטרי מפלסטיק (קוטר 60 מ"מ x גובה 15 מ"מ). צלמו תמונות בהקדם האפשרי מכיוון שהגולם החשוף פגיע ומתייבש בקלות.
    

תוצאות

איור 1. איור של הסרת puparium.(A) הניחו צד גחוני של גולם על פיסת סרט דו-צדדי. הסר את החלק הקדמי של הגולם. (B) שברו את הבובה במלקחיים מהצד הגחוני. (C) לאחר שבירת הגולם, הוציאו את הגלמים בעזרת מכחול.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
דרוזופילה גוטיפרה	מרכז מלאי מיני דרוזופילה בארה"ב בסן דייגו	15130-1971.10	Drosophila guttifera, מין של זבוב פירות המשמש במאמר זה
סרט דו-צדדי NICETACK	ניצ'יבאן	NW-15SF	סרט דו צדדי, להסרת בובות
Dumont #5 מלקחיים	כלים מדעיים משובחים	11252-20	מלקחיים, להסרת בובות
מברשת צבע חזותית של ואן גוך	Talens, יפן	GWVR-#5/0	מברשת צבע, להסרת בובות
סטריאומיקרוסקופ	אולימפוס	SZX16	סטריאומיקרוסקופ, לתצפית מורפולוגית
מצלמה דיגיטלית	אולימפוס	DSE-330-A	מצלמה דיגיטלית, להדמיה
צלחת תרבית רקמות סטנדרטית בז	קורנינג	353002	צלחת פטרי מפלסטיק (קוטר 60 מ"מ x גובה 15 מ"מ)