Drosophila melanogaster (זבוב הפירות)

בשל גודלם הגדול וארגונם הפשוט יחסית, תאי אחות דרוזופילה מתאימים באופן אידיאלי למחקרי הדמיה של תאים חיים. סרטון זה מתאר שיטת מיקרו-הזרקה להעברת תרכובות אקסוגניות לתוך התאים, והפרוטוקול המוצג מדגים את ההליך עם בדיקות אוליגונוקלאוטיד פלואורסצנטיות הנקראות משואות מולקולריות (MBs) המשמשות להדמיית תעתיקי mRNA אנדוגניים.

עובר הדרוזופילה מוקף בקרומים חיצוניים מגנים. כדי לקבל גישה לעובר, לעתים קרובות מסירים את הכוריון – החלק החיצוני ביותר של הממברנות. סרטון זה מתאר שיטה נפוצה של dechorionation באמצעות hypochlorite נתרן. הפרוטוקול לדוגמה מדגים את ההליך תוך שימוש בטכניקות סטריליות הנחוצות לגידול בעלי חיים אקסניים או גנוטוביוטיים.

Immunostaining של ביציות דרוזופילה בשלב מאוחר יכול להיות מאתגר בשל הקרומים הסובבים את הביציות. סרטון זה מתאר שיטה בעלת תפוקה גבוהה להשגת ביציות, קיבוע שלהן והסרת קרומים לצורך צביעה חיסונית. הפרוטוקול המוצג מדגים טכניקות אלה עם ביציות בשלב מאוחר המשמשות לדמיין שלבים שונים של מיוזה.

סרטון זה מתאר שיטה להסרה מכנית של קרומי הכוריון והויטלין מביציות דרוזופילה בוגרות שהיו קבועות בעבר. הפרוטוקול המוצג מציג הדגמה מפורטת של ההליך המניב ביציות התואמות לבדיקות הכלאה פלואורסצנטיות באתרן.

סרטון זה מתאר כיצד לבצע מיקרו-הזרקות המעבירות ריאגנטים לעוברי דרוזופילה חיים. חוקרים יכולים להשתמש בשיטה זו כדי להציג תרכובות אקסוגניות כמו חומצות גרעין וחלבונים בשלבים המוקדמים של התפתחות העובר. הפרוטוקול המוצג מדגים כיצד להגדיר ולבצע את ההליך להזרקה של כל מגיב מסיס - כאן, חלבון פלואורסצנטי לניסויי הדמיה חיים.

Source:Siddarth Gunnala1, Nafisa M. Jadavji2,3,41Department of Biomedical Sciences, Midwestern University, Glendale, AZ, USA2Division of Integrative and Molecular Physiology, Department of Biomedical Sciences, Southern University of Illinois, Carbondale, IL, USA3Department of Child Health, College of Medicine Phoenix, University of Arizona, Phoenix, AZ, USA4Department of Neuroscience, Carleton University, Ottawa, ON, CanadaThis video demonstrates hypoxia-induced climbing behavior in Drosophila...

סרטון זה מציג שיטה לבדיקת היפוקסיה בזחלי דרוזופילה על ידי הערכת יכולות המחילה והמנהור שלהם. באמצעות טכניקה זו חוקרים יכולים להבחין בין זחלים הסובלים ממחסור בחמצן לבין אלה עם ליקויים התפתחותיים. פרוטוקול הדוגמה מדגים את ההתקנה עבור בדיקה זו.

בעת צביעת דיסקים דמיוניים של דרוזופילה, לעיתים קרובות מתבצעת דיסקציה גסה בה הדיסקים חשופים אך נשארים מחוברים לגוף. לאחר המוכתמים, הדיסקים המעניינים מבודדים ומורכבים. הפרוטוקול לדוגמה מדגים הליך לדיסקציה והרכבה של דיסק דמיוני בכנף.

צומת נוירומוסקולרי דרוזופילה (NMJ) משמש כמודל לחקר המורפולוגיה והתפקוד של סינפסות. סרטון זה מתאר תכונות חשובות שהחוקרים מכמתים כדי לאפיין את NMJ. הפרוטוקול לדוגמה מדגים תוכנה המסוגלת לבצע את הכימות באופן אוטומטי.

סרטון זה מתאר אבלציה של אקסונים בלייזר דו-פוטוני בזחל Drosophila melanogaster ופרוטוקול לדוגמה לגרימת פציעה ותמונה של אתר הפגיעה.

סרטון זה מתאר כיצד להכין פילה זחל המשמש להדמיה של נוירונים דנדריטיים חושיים (DA) ותאי האפידרמיס הקשורים אליהם. הפרוטוקול המוצג מראה בפירוט כיצד להסיר רקמת שריר מדופן הגוף תוך שמירה על המורפולוגיה של התאים, מה שמשפר את ההדבקה החיסונית וההדמיה של תאי העצב ותאי האפידרמיס המוסתרים אחרת.

המולימפה של דרוזופילה משמשת הן כדם והן כנוזל אינטרסטיציאלי, המסתובב בכל הגוף במהלך שלבי הזחל והבוגרים. סרטון זה מתאר פרוטוקול לאיסוף המולימפה של הזחלים על מנת לכמת את התאים במחזור.

זחלי דרוזופילה רגישים לאור ומגיבים לשינויים באור שמסביב. סרטון זה מתאר בדיקה הבדוקה את יכולתם להימנע מאור, הנקראת בדיקת נקודת האור. הפרוטוקול המוצג מדגים כיצד להגדיר את התסעפות עם נורית אור כחול ומראה כיצד לתעד את התנהגות החיה בתגובה למפגש האור.

סרטון זה מתאר את בלוטת טבעת דרוזופילה, מבנה אנדוקריני מורכב החשוב לביוסינתזה ולהפרשת אקדיסטרואידים והורמונים אחרים. הפרוטוקול המוצג מדגים את הדיסקציה, הקיבוע והחיסון.

לזחלי דרוזופילה יש נוירונים חושיים ייעודיים – nociceptors – שתגובתם לגירויים תרמיים שעלולים להיות מזיקים מעוררת התנהגויות מרתיעות – או מה שמכונה "nocifensive" – אצל החיה. סרטון זה מתאר שיטה להערכת נוסיספטציה תרמית על ידי רישום התנהגות הזחל בתגובה ליישום מקומי של בדיקת חום על הקוטיקולה. שיטה זו נקראת, אם כן, בדיקת חום מקומית.

זבובי פירות דרוזופילה יכולים להבחין בשינויים קטנים בטמפרטורה ולכן לבחור סביבות עם תנאים תרמיים נוחים. סרטון זה מתאר בדיקה התנהגותית הבודקת את העדפת הטמפרטורה של זחלי דרוזופילה על שיפוע תרמי ליניארי.

סרטון זה מתאר את בלוטת הלימפה דרוזופילה – האתר העיקרי של המטופויזיס בזחל הזבוב – ומציג פרוטוקול לדוגמה לניתוח והרכבה של האיבר לצורך אימונוהיסטוכימיה והדמיה פלואורסצנטית.

מאמר זה מתאר טכניקה להסרת בובה של חרק תוך שמירה על הגלמים הפנימיים שלמים ולכן כשירים לחקירה נוספת. הפרוטוקול לדוגמה מציג את ההליך עם Drosophila guttifera; עם זאת, טכניקה זו ישימה למיני דרוזופילה אחרים.

סרטון זה מתאר כיצד לנתח ולבודד את קומפלקס עין-מוח מגלמי דרוזופילה. הפרוטוקול המוצג מדגים את ההליך המניב רקמות באיכות גבוהה, התואמות, למשל, immunostaining, כמו גם, ניסויים אחרים ביטוי גנים.

שרירי התעופה של דרוזופילה משמשים כמערכת מודל להתפתחות שרירים ופיזיולוגיה. סרטון זה מתאר את שרירי התעופה של מבוגרים ומדגיש פרוטוקול לניתוח שרירי טיסה עקיפים מתפתחים המתאימים לריצוף RNA מגלמים.

סרטון זה מתאר בדיקת התניה קלאסית שבוחנת למידה וזיכרון בדרוזופילה, הנקראת התניה של חיזור. הבדיקה מבוססת על הפחתת החיזור הגברי לאחר שחווה דחייה על ידי נקבה לא פתוחה מראש. הפרוטוקול לדוגמה מציג הגדרה עבור ההליך שניתן להשתמש בה כדי להעריך זיכרון לטווח קצר וארוך.

סרטון זה מתאר שיטה פשוטה לכימות תנועת הזבובים ומציג את בדיקת הטיפוס שבוצעה. מבחן טיפוס הזבובים הוא מבחן כללי של תפקוד מוטורי המסתמך על תגובת גיאוטקסיס שלילית.

סרטון זה מתאר את הדיסקציה של בלוטות האביזרים מזבובים זכרים ומציג דוגמה שבה הבלוטה המבודדת תנותק לתרחיף של תא יחיד.

סרטון זה מתאר את האנטומיה הכללית של שחלה דרוזופילה וכולל שיטה לניתוח שחלות לצורך הדמיה חיה או קבועה.

מאמר זה מתאר את נתיחת הצינוריות המלפיגיות הקדמיות (MT) מנקבת זבוב דרוזופילה ופרוטוקול לדוגמה מאת Rossano et al. (2017) שבו MTs מוכנים להדמיה חיה בתא זילוח.

סרטון זה מתאר את בדיקת האי, שיטה התנהגותית המשמשת לחקר תנועת דרוזופילה. הפרוטוקול לדוגמה כולל הגדרה עבור הבדיקה התואמת לניתוח תמונה אוטומטי למחצה.

מדענים משתמשים בפרוטוקול תוחלת החיים של דרוזופילה כדי למדוד כיצד תנאי ניסוי שונים משפיעים על תוחלת החיים של הזבובים וליצור עקומות הישרדות בתהליך כדי לכמת את תוצאות הניסוי. פרוטוקול הדגימה כולל את הבדיקה המיושמת כדי לחקור את ההשפעות על אריכות ימים מחשיפה לריכוזים משתנים של כימיקלים משבשים אנדוקריניים, או EDCs, כגון 17-α-ethinylestradiol (EE2).

סרטון זה מתאר בדיקת האכלה לזבובי פירות שבה משתמשים במזון צבעוני כדי לפקח על האכלה ועל ההשפעה שעשויה להיות לתרכובות נוספות על פעילות ההאכלה. הפרוטוקול לדוגמה בודק את ההשפעות של מספר כימיקלים משבשים אנדוקריניים (EDC).

סרטון זה מתאר שיטה להרכבת מוחות שלמים מזבובים בוגרים מתחת למגלשת גשר ומציג את הפרוטוקול המבוצע על מוחות מוכתמים חיסונית עבור מיקרוסקופ פלואורסצנטי.

סרטון זה מתאר שיטת סינון לזיהוי זבובי דרוזופילה טרנסגניים, שהגנום שלהם שונה באמצעות CRISPR-Cas9. CRISPR-Cas9 הוא כלי רב עוצמה לעריכת גנום שחולל מהפכה באופן שבו מדענים יכולים לתמרן את הגנום של אורגניזם. בפרוטוקול לדוגמה, נראה כיצד לזהות מוטציות שנוצרו על ידי קריספר, שבו החדרה של רצף טרנסאקטיבציה מחליפה את האקסון הראשון של הגן חסר הענף (bnl), ובכך יוצרת קו דרייבר ספציפי לגן bnl, bnl-LexA.

מיקרוסקופ אלקטרונים סורק (SEM) הוא כלי רב עוצמה להדמיה – בעיקר – של תכונות פני השטח של דגימה ביולוגית. עם זאת, הכנת דגימה נכונה היא קריטית לקבלת תמונות איכותיות. סרטון זה מתמקד בשלבי ההתייבשות והייבוש של הכנת דרוזופילה בוגרת שלמה עבור SEM.

סרטון זה מתאר כיצד להטמיע ראשי דרוזופילה בפרפין בשיטת הצווארון, טכניקה המכינה ראשי זבובים לחתך סדרתי. קטעי פרפין משמשים לבדיקות היסטולוגיות של האנטומיה של המוח ולהערכת ניוון עצבי. הפרוטוקול המוצג מדגים כיצד ניתן לעבד מספר זבובים בהכנה אחת, ובכך להגדיל את יעילות הזמן ולמזער ממצאים ניסיוניים.

סרטון זה מתאר כיצד לבצע הזרקה של זבובים בוגרים חיים וכולל פרוטוקול לדוגמה שבו חלקיקים מסומנים וטריפאן כחול מוזרקים בבטן הזבוב כדי להעריך פגוציטוזה.

סרטון זה מתאר את מבחן העדפות הטעם, שיטה התנהגותית המשמשת למדידת משיכה או הימנעות כלפי תמיסות צבעוניות שטעמן שונה על ידי הערכת צבע הבטן של הזבוב לאחר בליעת החומר המועדף. הפרוטוקול המוצג מדגים את ההליך המשמש למדידת העדפת זבובים לתמיסות בריכוזי סוכרוז משתנים.

סרטון זה מתאר את CApillary FEeder, או CAFE, assay, שיטה התנהגותית המודדת צריכת מזון והעדפה של זבובי פירות בלתי מרוסנים. הפרוטוקול המוצג מראה כיצד לבצע את הבדיקה עם אידוי מינימלי מהנימים המלאים בנוזל המשמשים להעברת המזון ולעקוב אחר צריכתו.

סרטון זה מתאר כיצד לנתח ולבודד את מוח הדרוזופילה הבוגר – הליך הכרחי לדמיון האיבר, שאחרת מוסתר על ידי הקוטיקולה, העין ורקמת קנה הנשימה. הפרוטוקול לדוגמה מראה הדגמה מפורטת המניבה תכשירים באיכות גבוהה שניתן להשתמש בהם לשיטות אימונוסטיין והדמיה בנוירוביולוגיה של דרוזופילה.

מיקרוביוטה של דרוזופילה משפיעה על התפתחות החיה, חסינותה והפיזיולוגיה שלה. סרטון זה מתאר שיטה לכימות חיידקים מזבובים על ידי קביעת יחידות היוצרות המושבה מתכשירי כל הגוף. הפרוטוקול המוצג מדגים את הטכניקה עם זבובים, המגודלים בתנאים גנוטוביוטיים באמצעות ארבעה מיני חיידקים.

סרטון זה מתאר שיטה לנתח, לתקן ולהרכיב את הרגל הבוגרת של דרוזופילה תוך שמירה על שלמותה העצבית-שרירית לצורך ניתוח הדמיה.

סרטון זה מתאר כיצד לעקוב אחר זבובים ההולכים בחופשיות כדי להעריך את יכולת התנועה הכללית שלהם. הפרוטוקול המוצג מדגים את הגדרת הבדיקה וניתוח הנתונים באמצעות תוכנת מעקב וידאו.

סרטון זה מתאר שיטה אחת לבניית שואב זבובים, שניתן להשתמש בו כדי להעביר חרקים בין מתחמים ללא הרדמה. השואף בפרוטוקול לדוגמה הוכן לניסוי לכימות התנהגויות טיפוח...

סרטון זה מתאר הדמיית סידן in vivo בנוירונים דרוזופילה באמצעות GCaMP. סרטון הפרוטוקול המוצג מראה כיצד לתעד שינויים בפלואורסצנטיות GCaMP מנוירונים בגוף פטריות במהלך ניסוי מיזוג ריח.

לזבובי פירות יש מערכת ריח מורכבת, הם יכולים להבחין במאות ריחות ולהשתמש בחוש הריח שלהם כדי לכוון החלטות התנהגותיות. סרטון זה מתאר את בדיקת האולפקטומטר הארבע-כיוונית, שיטה לחקר תגובות התנהגותיות של חוש הריח בזבובים. סרטון הפרוטוקול המוצג מראה כיצד לטפל בזבובי בדיקה ומהם השלבים הקריטיים בעת ביצוע הבדיקה.

תוקפנות היא התנהגות מולדת וניסיון לחימה קודם משפיע על אסטרטגיית הלחימה ועל התוצאה של תחרויות מאוחרות יותר בזבובים. סרטון זה מתאר בדיקה ששימשה לחקר התנהגותה התוקפנית של דרוזופילה. הפרוטוקול לדוגמה כולל את הבדיקה המבוצעת במערך שמבטל את הטיפול בזבובים ולכן מפחית את הלחץ עבור בעלי החיים, מה שאחרת היה משפיע על ביצועי הנבדקים.

סרטון זה מתאר שיטה לבדיקת התנהגות גישוש חוש הריח בזבוב הפירות, הנקראת מבוך Y. סרטון הפרוטוקול המוצג מדגים כיצד להגדיר ולנהל את הבדיקה.

סרטון וידאו זה מתאר את מערכת ניטור פעילות דרוזופילה (DAM) המשמשת למעקב אחר פעילות לוקומוטורית. חוקרים משתמשים בנתוני פעילות שנאספו מה-DAM כדי לחקור את השעון הביולוגי בזבובי פירות. סרטון הפרוטוקול המוצג מראה כיצד לטעון זבובים במכשיר ולתעד נתוני פעילות עבור ניסויים צירקדיים.

אופטוגנטיקה מאפשרת שימוש באור כדי לתמרן תאי עצב מהונדסים גנטית לבטא אופסינים ספציפיים – חלבונים רגישים לאור שהפעלת האור שלהם מעוררת שינוי במצב תא העצב. כאן אנו מתארים גישה אופטוגנטית בדרוזופילה באמצעות אופסין צ'אנלרודופסין2. הפרוטוקול לדוגמה כולל בדיקת אופטוגנטיקה שנועדה לחקור את המעגלים העצביים מאחורי התנהגות הבריחה של הזבוב.

בסרטון זה אנו מדגישים דיסקציה של מעי דרוזופילה בוגר ואוסף של מעי אמצע המתאים לדיסוציאציה של תא בודד ו- FACS על מנת לבודד תאי גזע במעי.

סרטון זה מתאר את ליבו הבוגר של הזבוב, או נקרא אחרת הכלי הגבי דרוזופילה. הפרוטוקול המוצג מדגים הליך דיסקציה לתכשירי לב חי.

נקבות דרוזופילה בוחרות בין מצעים ובוחרות אתרים אטרקטיביים להטלת ביצים. סרטון זה מתאר בדיקה התנהגותית שבוחנת את קבלת ההחלטות שלהם, הנקראת בדיקת העדפת הטלת ביצים. הסרטון המוצג מדגים את ההליך עם מערך שנבנה בהתאמה אישית, המאפשר לחוקרים לא רק לבחון את התנהגותן של נקבות רבות בו זמנית, אלא גם תואם להקלטת וידאו והגדרות אופטוגנטיות.