בדיקת טיפוס זבובים: שיטה לבדיקת תנועה כללית בדרוזופילה מלנוגסטר

תקציר

מקור: Gevedon, O., et al. In Vivo Forward Genetic Screen to Identify Neuroprotective Genes in Drosophila melanogaster. J. Vis. Exp. (2019).

סרטון זה מתאר שיטה פשוטה לכימות תנועת הזבובים ומציג את בדיקת הטיפוס שבוצעה. מבחן טיפוס הזבובים הוא מבחן כללי של תפקוד מוטורי המסתמך על תגובת גיאוטקסיס שלילית.

פרוטוקול

פרוטוקול זה הוא קטע מתוך Gevedon et al., In Vivo Forward Genetic Screen to Identify Novel Neuroprotective Genes in Drosophila melanogaster, J. Vis. Exp.(2019).

1. Climbing Assay (הותאם מ-Ali et al., J. Vis. Exp. (2011))

1. אמת את מבחן הטיפוס. במחקר זה, בחנו את מבחן הטיפוס בהתבסס על מתודולוגיה שתוארה קודם לכן על ידי עלי ואחרים, תוך שימוש בזבובי Elav^C155>UAS-Tau^R406W (המציגים שיעורי מעבר טיפוס נמוכים יותר) ו-Elav^C155>UAS-GFP (בקרה) וזבובי Elav^C155>UAS-mCherry (בקרה).
2. הפכו את הזבובים לתא בדיקה, שורה אחת בכל פעם (אין להשתמש בהרדמה CO₂) ואפשרו להם להתאושש במשך 5 דקות. אם הבדיקה נעשית בימים שונים, בצע את הבדיקה באותו זמן של היום. במחקר זה, כל בדיקות הטיפוס בוצעו בשעות אחר הצהריים כדי לשלוט בהשפעות הצירקדיות על תנועה.
   NOTE הימנע מחשיפת הזבובים לאור שמש ישיר בעת הבדיקה; זה יפריע ליכולת שלהם לטפס.
3. הקש בכוח על התא (מסומן בצד כלפי מטה) על משטח עכבר המונח על משטח מוצק 3 פעמים כך שכל הזבובים יתחילו את הבדיקה בתחתית. צפו בתנועת הזבובים במשך תקופה של 10 שניות.
4. רשום את מספר הזבובים שמגיעים או עוברים את קו 5 הס"מ בזמן זה, כמו גם את המספר הכולל של הזבובים שנבדקו. חזור על הפרוטוקול, תוך המתנה של דקה אחת בין כל גירסת ניסיון, לקבלת לפחות 3 עותקים משוכפלים של גירסת ניסיון בכל שורה.
   NOTE במחקר הנוכחי, כל בקבוקון הכיל בין 2 ל-19 זבובים לבדיקה הראשונית (זבובים זכרים) ובין 6 ל-21 זבובים לניתוח חסר מוטנטי של נקבות נחצות.

חומרים

<גבול טבלה="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1448px;" width="1449"> רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה שם חברה מספר קטלוג הערות VWR® בקבוקון דרוזופילה; צר VWR 75813-160 VWR® סרט תיוג מעבדה למטרות כלליות VWR 89097-912 משטח עכבר סטנדרטי סטריאוסקופ מוטיק דגם SMZ-168 Drosophila Incubator VWR 89510-750 חבילת התוכנה R