הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
7.9K צפיות
⸱
30 באפריל 2023
מקור: Catrina, I. E., et al. Visualizing and Tracking Endogenous mRNA in Live Drosophila melanogaster egg chambers. J. Vis. Exp. (2019).
בשל גודלם הגדול וארגונם הפשוט יחסית, תאי אחות דרוזופילה מתאימים באופן אידיאלי למחקרי הדמיה של תאים חיים. סרטון זה מתאר שיטת מיקרו-הזרקה להעברת תרכובות אקסוגניות לתוך התאים, והפרוטוקול המוצג מדגים את ההליך עם בדיקות אוליגונוקלאוטיד פלואורסצנטיות הנקראות משואות מולקולריות (MBs) המשמשות להדמיית תעתיקי mRNA אנדוגניים.
פרוטוקול זה מובא מתוך Catrina et al., Visualizing and Tracking Endogenous mRNAs in Live Drosophila melanogaster Egg Chambers, J. Vis. Exp. (2019).
1. תכנון MBs להדמיית תאים חיים
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| ספקטרופלואורומטר | פלואורומקס-4 הוריבה-ג'ובין איבון | לא ישים | ספקטרופלואורומטר ספירת פוטונים |
| קובטת קוורץ | Fireflysci (לשעבר Precision Cells Inc.) | 701MFL | |
| פינצטה Dumont #5 | מכשירים מדויקים בעולם | 501985 | פינצטה דקה חשובה מאוד כדי להפריד את תאי הביצים הבודדים |
| שמן הלוקרבון 700 | סיגמא-אולדריץ' | H8898 | |
| החלקת כיסוי מס' 1 22 מ"מ × 40 מ"מ | VWR | 48393-048 | |
| מיקרוסקופ מנתח | Leica MZ6 Leica Microsystems Inc. | לא ישים | |
| פד הרדמה של זבוב פירות CO2 | Genesee Scienific | 59-114 | |
| Tris-HCL pH 7.5 | סיגמא-אולדריץ' | 1185-53-1 | |
| מגנזיום כלורי | סיגמא-אולדריץ' | 7791-18-6 | |
| NaCl | סיגמא-אולדריץ' | 7647-14-5 | |
| מיקרוסקופ קונפוקלי דיסק מסתובב | מיקרוסקופ הפוך Leica DMI-4000B מצויד בדיסק מסתובב Yokogawa CSU 10 Leica Microsystems Inc. | לא ישים | |
| Hamamatsu C9100-13 ImagEM EMCCD מצלמה | האמאמאטסו | לא ישים | |
| PatchMan NP 2 Micromanipulator | Eppendorf Inc. | 920000037 | |
| FemtoJet Microinjector | Eppendorf Inc. | 920010504 | |
| מחט הזרקה: Femtotips II | Eppendorf Inc. | 930000043 | |
| טיפ טעינה: 20 μL Microloader | Eppendorf Inc. | 930001007 | |
| משקפי מיקרו כיסוי מס' 1 או 1.5, 22 מ"מ x 40 מ"מ | VWR | 48393-026; 48393-172 | |
| שמרים יבשים | כל חנות מכולת | לא ישים | |
| מחשב, > זיכרון RAM של 20 GB | למרות עיבוד יכול להתבצע על רוב המחשבים, יכולות גבוהות יותר יגדיל את מהירות העיבוד |
