דרוזופילה בדיקת העדפת הטלת ביצים: שיטה לבדיקת קבלת החלטות בזבובים

תקציר

מקור: Gou, B., et al. High Throughput Assay to Examine Egg-Tהטלת Preferences of Individual Drosophila melanogaster. J. Vis. Exp. (2016).

נקבות דרוזופילה בוחרות בין מצעים ובוחרות אתרים אטרקטיביים להטלת ביצים. סרטון זה מתאר בדיקה התנהגותית שבוחנת את קבלת ההחלטות שלהם, הנקראת בדיקת העדפת הטלת ביצים. הסרטון המוצג מדגים את ההליך עם מערך שנבנה בהתאמה אישית, המאפשר לחוקרים לא רק לבחון את התנהגותן של נקבות רבות בו זמנית, אלא גם תואם להקלטת וידאו והגדרות אופטוגנטיות.

פרוטוקול

פרוטוקול זה הוא קטע מתוך Gou et al., High Throughput Assay to Examine Egg-Tהטלת Preferences of Individual Drosophila melanogaster, J. Vis. Exp. (2016).

1. בניית קאמרי, הרכבה, הגדרת בדיקה

1. בקשו מבית מלאכה לבנות תאי הטלת ביצים אקריליים (איור 1A-D). השרטוט ההנדסי של חלקים שונים הוצג באיור משלים 1-3. תמונות ברזולוציה גבוהה ניתן למצוא גם כאן (http://www.rebeccayang.org/pdf/chamber%20design.pdf).
2. הכניסו יריעות פלסטיק לחלק ההעמסה (העליון) של התא כפי שמוצג באיור 1C. זה משמש כמשטח התחתון בעת העמסת זבובים לזירות הטלת ביצים בודדות.
3. הרדימו את הנקבות על כרית_CO2 והעמיסו אותן בנפרד לכל זירת הטלת ביצים. אפשר ~ 30 דקות לזבובים להתאושש מה- CO₂ ולהתאקלם בסביבה החדשה.
4. מכינים את מצעי האגרוז.
   1. לנוחיותכם, יש לשמור בקבוק מוכן מראש של אגרוז 1% מומס באמבט מים בטמפרטורה של 55 מעלות צלזיוס.
   2. מוסיפים את הכמות הרצויה של תמיסת סוכרוז מלאי (2 מ ') לתוך צינור חרוטי 50 מ"ל וערבוב אותו עם כמות מתאימה של אגרוז. לדוגמה, כדי להכין את מצע הסוכרוז 150 mM, מניחים 750 μl של תמיסת סוכרוז 2 M לתוך הצינור ולאחר מכן למלא את הצינור עם agarose עד סימן 10 מ"ל.
   3. מכינים את המצע הרגיל באותו אופן אך מוסיפים מים מזוקקים במקום תמיסת סוכרוז.
      NOTE: הריכוז הסופי של אגרוז בפרוטוקול זה הוא מעט פחות מ -1%. מניסיוננו, הריכוז המדויק של אגרוז אינו משנה כל עוד הוא נשלט להיות בטווח ~ 0.9 - 1.1% וכי שני הסובסטרטים הם באותו ריכוז אגרוז.
5. קח את המצע (התחתון) של החדר ואת פיפטה 1,000 μl של מצע agarose לתוך כל שוקת כפי שניתן לראות <מחלקה חזקה = "xfig">איור 1D.
6. אפשר agarose להתמצק במשך ~ 30 דקות.
7. לאחר שמצעי האגרוז והזבובים מוכנים, הרכיבו את כל שלושת חלקי תא הטלת הביצים ולאחר מכן הוציאו את יריעות הפלסטיק.
8. מקם את התאים באינקובטורים של זבובים.
   NOTE: אורך ניסויי הטלת הביצים יכול להשתנות בהתאם לצרכי הניסוי. בדרך כלל אנו מריצים את הניסוי O/N (14 - 16 שעות). כמו כן, לא נצפתה השפעה משמעותית של תזמון הצירקדי על העדפות הטלת הביצים.
9. מרדימים נקבות על ידי הזרקת CO₂ לתוך החדר. לפרק את החדר, להשליך את הזבובים המורדמים לחדר המתים של הזבובים (כלומר, פחית קפה ריקה מלאה במעט שמן תירס). צלמו את התוצאות לצורך שמירת רשומות (ראו איור 2).
10. לספור את מספר הביצים באופן ידני ולחשב מדדי עדיפות לניתוח. חשב את מדד ההעדפות כ- (N_a - N_b)/(N_a + N_b) כאשר N_a ו- N_b מייצגים את מספר הביצים באתר a לעומת אתר b, בהתאמה.

תוצאות

איור 1: תאי הטלת ביצים ופרוטוקול הטלת ביצים. (A) תא הטלת ביצים מורכב במלואו. (ב) חתיכות מפורקות. A: חתיכת הטעינה (למעלה), B: חתיכת החוצץ (באמצע), C: חתיכת המצע (למטה). שרטוטים הנדסיים של חלקים אלה מוצגים באיור משלים 1-3. (ג) פיסת הטעינה של התא. א': דלתות הזזה, א': מסילות. יריעות הפלסטיק מוכנסות לחתיכת ההעמסה כדי לשמש כרצפה כדי לשמור על הזבובים הטעונים במ...

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
אגרוז אולטרה טהור	Invitrogen	16500-500
סוכרוז	סיגמא	S0389
אמבט מים	פישר	15-462-6Q
תאי הטלת ביצים	נבנה בהתאמה אישית
בקבוקוני זבוב (צרים)	ג'נסי	32-116 לפנה"ס