ג. אלגנס בדיקת הישרדות: מבחן רעילות לטווח קצר

תקציר

מקור: Possik, E. and Pause, A. מדידת עמידות לעקה חמצונית של Caenorhabditis elegans בלוחות מיקרוטיטר 96 באר.J. Vis. Exp. (2015).

סרטון זה מציג בדיקת הישרדות לטווח קצר שבודקת טיפול ברעילות חריפה או בודקת זן גנטי לעמידות למצב רעיל. הפרוטוקול לדוגמה מציג בדיקת הישרדות לדוגמה שבה תולעים נבדקות על יכולתן להתנגד לעקה חמצונית הנגרמת על ידי פרקוואט (PQ).

פרוטוקול

פרוטוקול זה הוא קטע מתוך Possik and Pause, Measurement Oxidative Stress Resistance of Caenorhabditis elegans in 96-well Microtiter Plates, J. Vis. Exp.(2015).

1. ביצוע בדיקת עמידות לעקה חמצונית

1. פיפטה 40 μl של תמיסת PQ 100 mM (מוכן טרי) לכל באר של צלחת 96 באר. השתמש לפחות 12 בארות כמו העתקים של כל מצב (טיפול, מוטציה, וכו '). בעזרת קוטף תולעי תיל פלטינה, מעבירים לכל באר 5-8 זחלי L4 המציינים את שעת ההתחלה ושעת הסיום.
2. בעת הפעלת תנאי אחר, שים לב לשעת ההתחלה ולשעת הסיום. מניחים את הצלחת על 20 מעלות צלזיוס בזמן הדגירה בין העברת התולעים לבין ניקוד בעלי חיים מתים שעה מאוחר יותר משעת ההתחלה.
3. בעזרת המיקרוסקופ המנתח, ספרו את ההישרדות בכל שעה. נערו בעדינות את הצלחת לפני שתתחילו לספור. ציין תולעים שאינן זזות, גם לאחר זיהוי אור בעוצמה גבוהה, כחיות מתות. ציין גם את מספר בעלי החיים החיים.
   NOTE: התבוננות בצורת התולעת, בזנבות ובתנועת הראש בהגדלה גבוהה, מסייעת לקבוע תולעים מתות מהחיים.
4. חזור על שלב זה כל שעה עד שרוב התולעים מתות.

2. קביעת אחוז הישרדות בכל נקודת זמן

1. חשב את המספר הכולל של בעלי חיים לכל מצב על ידי הוספת המספר הכולל של בעלי חיים שהועברו לכל באר. התעלמו מבעלי החיים שניזוקו או נהרגו בעת ההעברה.
2. עבור כל נקודת זמן, חשב את המספר הכולל של בעלי חיים מתים לכל מצב (סכום החיות המתות ב -12 הבארות). עבור כל נקודת זמן, חשב אחוז מוות (מספר החיות המתות חלקי המספר הכולל של בעלי חיים ומוכפל ב -100) ואחוז ההישרדות (100 פחות אחוז מוות).
3. חזור על בדיקה זו לפחות 3 פעמים עצמאיות.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
מיקרוסקופ Zeiss סטריאופוני דיסקברי v8	זיס
96 צלחת מיקרוטיטר שקופה היטב