Novel Tank Diving Assay: שיטה לחקר תגובות עקה מולדות בדגי זברה

תקציר

מקור: Chin J.S.R., et al. גישות התנהגותיות לחקר לחץ מולד בדגי זברה. J. Vis. Exp. (2019)

המאמר מתאר שיטה התנהגותית להערכת לחץ בדגי זברה. בתגובה ללחץ, דגי זברה נוטים לשחות בתחתית מיכל עד להסרת הלחץ. פרוטוקול הדגימה מתאר שיטה מדורגת לביצוע הבדיקה.

פרוטוקול

1. מערך בדיקת טנק חדשני

1. הכינו בנפח 250 מ"ל ממולאת מראש במי מערכת דגים, ולפחות שני מיכלי אחיזה.
2. בבוקר הניסוי, העבירו לפחות 10 דגי זברה בוגרים שישמשו לכל תנאי ניסוי (קבוצת ביקורת ובוגרים ניסיוניים) ממתקן הדגים למיכל החזקה, העבירו אותם לחדר ההתנהגות ואפשרו להם להתאקלם למשך שעה לפחות.
   הערה: ניתוח כוח צריך להתבצע לפני ניסוי, אבל בידינו, n = 10 הוא בדרך כלל מספיק כדי לזהות מובהקות סטטיסטית. יתר על כן, מיכל ההחזקה צריך להכיל לא יותר מחמישה אנשים לליטר מים. התאקלמות של שעה מספיקה מכיוון שדגי זברה בוגרים הוכחו כמתרגלים תוך 30 דקות ממיכל חדש. כמו כן, מקצבים התנהגותיים מושפעים מתהליכים צירקדיים, ולכן יש לבצע שכפולים ניסיוניים שנעשו בימים שונים באותן שעות. בדרך כלל אנו מבצעים את כל הניסויים בין השעות 11:00 בבוקר ל-18:00 בערב.
3. תייגו את המכלים כך שהמצב או הגנוטיפ של בעלי החיים יהיה עיוור לנסיין.
   הערה: ניסויים יכולים בקלות להיות מסונוורים לנסיין על ידי תיוג טנקים באמצעות מערכת אותיות או מספרים (כלומר, טנק אחד מסומן 'A', אחר 'B', וכו '). גורם שאינו מעורב בניסויים מתייג את המכלים במערכת כזו, ומסווה את הזהויות מהנסיין עד לאחר השלמת הניתוח.
4. בעזרת רשת, הניחו בעדינות מבוגר בודד בכד ממולא מראש משלב 1.1. תנו לדגים הבוגרים להתאקלם בכד למשך 10 דקות.
   הערה: רשום את המין של המבוגר, מכיוון שזה עשוי להיות חשוב לאחר הניתוח לחפש הבדלים ספציפיים למין.
5. לאחר ההתאקלמות בכד, הכניסו את הדג למיכל החדש (הגדירו פרטים בהמשך) על ידי שפיכה עדינה של המים והבוגר מהכד.
   הערה: השלבים בסעיף זה מתארים את הגדרת מבחן הטנק החדש. תרשים של המוצר הסופי מוצג באיור 1B.
   1. הניחו את המיכל החדשני במרכז השולחן.
   2. מקם את נורות האינפרא אדום מאחורי המיכל ומקם את יריעת האקריליק הלבנה או מסך הדיפיוזר בין המיכל למקור אור ה-LED.
   3. מקמו את הדיפיוזר כך שיפיץ באופן מקסימלי את האור המגיע מנורות ה-LED, ועוצמת האור תספיק כדי להאיר את המיכל החדש. ככל שהלוח קרוב יותר למקור האור, כך האורות יהיו בהירים יותר, אך הוא יתפזר פחות. לעומת זאת, מיקום לוח הדיפיוזר הרחק ממקור האור יפחית את עוצמת האור, אך יפיץ את האור טוב יותר.
   4. מלאו כשלושה רבעים מהמיכל החדש במי מערכת דגים.
      הערה: מי המערכת נוצרים באמצעות אוסמוזה הפוכה של מי ברז, ואחריה מינון כזה שהמוליכות שווה ל 900 ± 100 μS, כי pH הוא נייטרלי (7.2), וכי הטמפרטורה היא 27 ± 1 מעלות צלזיוס.
   5. חבר את המצלמה למעמד המצלמה וחבר את המצלמה למחשב. פתח את תוכנת רכישת הווידאו וכוונן את המצלמה כך שתפנה לחזית הטנק וודא שניתן לראות את כל הטנק החדשני ושאין אזורים מוסתרים בסרטון. כוונן את המיכל ואת אורות האינפרא אדום כך שתהיה מספיק תאורה ואחידה בכל הטנק כאשר צופים דרך המצלמה.
      הערה: לפני שתמשיך לניסויים, זה יכול להיות שימושי לעתים קרובות לבצע ריצת ניסיון, שבה וידאו של דג נלכד ומעקב מבוצע. זה יבטיח כי ההתקנה מספיקה לניסויים של התנהגות.
6. לאחר הכנסת המבוגר למיכל החדש, התחל את הקלטת המצלמה והתרחק מהמערך כדי למנוע מצוקה נוספת לדגים.
7. לאחר סיום ההקלטה, הוציאו את האדם מהמיכל החדש והכניסו אותו למיכל אחיזה חדש.
   הערה: יש להשתמש במיכל אחיזה שונה מזה שבשלב 1.2 כדי למנוע בדיקות חוזרות על אותם אנשים.

תוצאות

איור 1. דיאגרמה של מערך הטנק החדש.(A) מידות מיכל הטרפז 1.8 ליטר כפי שהן נראות מצד ההקלטה של המיכל. (B) דיאגרמה של ההתקנה כולל מיקומים של אורות אינפרא אדום, מצלמה ומחסומים המשמשים כדי למזער את ההפרעה האנושית.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
מצלמה			אנו משתמשים במצלמת USB Point Grey Grasshopper3 עם עדשה מבית Edmund Optics.
מסנן אינפרא אדום	אדמונד אופטיקה
תוכנית רכישת וידאו			השתמש בתוכניות כגון Virtualdub או FlyCapture מכיוון שניתן להגדיר את קצב הפריימים של הרכישה.
נורות LED אינפרא אדום
טנק Assay	אקוונירינג	מק"ט: ZT180	גודל: M3 1.8 ליטר
מעמד ומהדק, או חצובה סטנדרטית למצלמה
250 מ"ל
תוכנת מעקב			אנו משתמשים Ethovision XT 13 מ Noldus טכנולוגיית מידע