בדיקת תנועת זחלים: שיטה בעלת תפוקה גבוהה לחקר רעילות נוירו-התנהגותית של תרכובת בזחלי דגי זברה

תקציר

מקור: Zhang B., et al. חקר השפעות נוירו-התנהגותיות של מזהמים סביבתיים על זחלי דגי זברה. J. Vis. Exp. (2020)

מאמר זה מתאר את התגובה ההתנהגותית של דגי זברה לתרכובות רעילות על ידי ניטור תנועת הזחל. הפרוטוקול בוחן גם דוגמה לתגובת זחלי הזברה למזהמים סביבתיים.

פרוטוקול

1. הכנה למבחן ההתנהגות

1. העבר 800 μL של תמיסת חשיפה לכל באר של 48 microplate.
   הערה: השתמש ב-16 בארות לכל קבוצה (כלומר, תמיסת הבקרה, 5 מיקרוגרם/ליטר ו-50 מק"ג/ליטר).
2. השתמש בקצה פיפטה 1 מ"ל כדי להעביר 200 μL של תמיסת חשיפה עם זחל אחד מצלחת פטרי זכוכית לתוך באר אחת של 48 microplate באר
.
3. העבר 4 מ"ל של תמיסת חשיפה לכל באר של 6 microplate.
   הערה: השתמשו במיקרו-צלחת אחת עם 6 בארות לכל קבוצה.
4. השתמש בקצה פיפטה של 1 מ"ל כדי להעביר 200 מיקרוליטר של תמיסת חשיפה עם שני זחלים לכל באר של 6 microplate.
   הערה: בכל קבוצה יש שש קבוצות חוזרות.
5. יש לוודא שטמפרטורת חדר הבחינה היא 28°C שעתיים לפני הבחינה.
   הערה: מבחנים התנהגותיים מבוצעים בדרך כלל בשעות אחר הצהריים.

2. בדיקת תנועה וזווית נתיב

1. שמרו את הפרוטוקול והנמיכו את האור בחדר הבחינה.
2. אקלם את הזחלים במערכת במשך 10 דקות ולחץ על כפתור "ניסוי" "ביצוע" בתורו, ולאחר מכן בחר את התיקיה שבה נשמרים קבצי הניסוי והזן את שם התוצאה.
3. לחץ על כפתור "רקע" "התחל" בתורו כדי להתחיל את הבדיקה.
4. לחץ על כפתור "ניסוי" "עצור" בתורו כדי לעצור את הניסוי כאשר הבדיקה מסתיימת.
   הערה: המערכת מציגה את הנתונים שנבדקו כאשר המערכת עוצרת. הנתונים כוללים את המרחק המסומן בשלוש מחלקות מהירות ומספרי זוויות נתיב בשמונה מחלקות זווית של כל דקה. עבור מבחן התנועה בדוגמה המוצגת, מחושב המרחק הכולל בכל תקופת אור (10 דקות) והושווה ההבדל בין קבוצת הביקורת לקבוצות הטיפול.
5. העבירו את צלחת המיקרו-צלחת 48 בחזרה לאינקובטור האור לניסויים אחרים.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
48-באר-microplate	קורנינג	3548	דיור Embyros
6-באר-microplate	קורנינג	3471	דיור Embyros
זברהבוקס	נקודת מבט	ZebraBox	כלי התנהגות
ZebraLab	נקודת מבט	ZebraLab	תוכנת התנהגות
פיפטה	אפנדורף	3120000267	פתרון העברה