דיסקציה של מעי דג זברה בוגר: טכניקה לניתוח ספיגת תרכובות

תקציר

מקור: Jie J. et. al., אינטובציה אוראלית של דגי זברה בוגרים: מודל להערכת ספיגת מעיים של תרכובות ביו-אקטיביות. J. Vis. Exp. (2018).

סרטון זה מתאר את הטכניקה של בידוד המעי כדי להעריך את ספיגת המעי של תרכובות ביו-אקטיביות. במדגם זה, נבודד את המעי מדגי זברה בוגרים כדי לנתח את ספיגת האימונוסטימולנטים.

פרוטוקול

1. דיסקציה של מעי דג זברה

1. לאחר פרק זמן מוגדר לאחר אינטובציה (למשל, 5 שעות ו / או 24 שעות), הניחו את הדג באמצעות רשת בתמיסת 300 מ"ג / ליטר אתיל 3-אמינובנזואט מתאן-סולפונט (MS-222) להמתת חסד. ודא שהאופרקולום מפסיק לזוז ואין רפלקס צביטת זנב. חמש דקות מספיקות בדרך כלל.
2. הרימו את בעל החיים שעבר המתת חסד עם רשת והניחו אותו על נייר פילטר.
   הערה: נייר הסינון שימושי מאוד להסרת רקמת הדבק לאורך המעי.
3. בעזרת מספריים חדים לדיסקציה מבצעים חתך חצי עגול מפי הטבעת אל האופרקולום ופותחים חתך באמצעות פינצטה עדינה. חותכים את שני קצוות המעי, מוציאים את כל האיברים הפנימיים ומניחים אותם על נייר המסנן.
   זהירות: עבוד במהירות כדי להפחית את חילוף החומרים בתאים ואת המוות.
   הערה: לחלופין, הסר את רקמת ההדבקה ב- PBS ועל קרח.
4. יש להפריד את המעי מהאיברים הפנימיים, להקפיד לשמור על כיוונו (מקטע המעי הקדמי לאחורי) ולמתוח אותו. בדרך כלל, המקטע הקדמי של המעי רחב יותר מהמקטע האחורי. דאג להשיג את כל המעי בעת ניתוח.
   הערה: הקצה האחורי הוא די דק ושביר בדגים קטנים ועלול להישבר, במיוחד אצל בעלי חיים <0.7 גרם.
5. מגלגלים את המעי על נייר הסינון בפינצטה על מנת לנתק את רקמת הדבק מהמעי.
6. המשך להכין את המעי לניתוחים שונים במורד הזרם

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
MS-222	סיגמא אולדריץ'	E10521	אבקה
10x PBS	סיגמא אולדריץ'	P5493
נייר סינון	מעבדת מסננים	RM14034252