הזרקה intraductal: אספקת תערובת הזרקה לתוך צינורות של בלוטת החלב העכבר

תקציר

מקור: Xiang, D., et al. מידול סרטן השד באמצעות הזרקה תוך צינורית של אדנו-וירוס המבטא Cre-expressing לתוך בלוטת החלב של העכבר. J. Vis. Exp (2019).

סרטון זה מתאר טכניקת הזרקה אינטרדוקטלית שבה אנו מעבירים תערובת הזרקה לתוך צינורות בלוטות החלב של עכברים.

פרוטוקול

1. הזרקה intraductal

1. השתמש בטכניקות אספטיות לאורך כל ההליך הכירורגי.
2. בצעו חתך בעור באורך של ~1 ס"מ בין שני ה-MGs המפשעתיים הרביעיות (איור 1). בזהירות להפריד את דש העור (עם MG) מן הצפק הקודקוד כדי לדמיין את עץ ductal החלב.
3. החזיקו בזהירות את הפטמה עם מלקחיים של שען והסירו את הפטמה החיצונית מבלי לחתוך עור סמוך, באמצעות מספריים מיקרו-דיסקציה.
4. טען ~ 3-5 μL של תערובת הזרקת Ad-Cre לתוך מזרק המילטון 25 μL עם מחט רכזת מתכת 33 G מוצמדת. הערך את נפח תערובת ההזרקה במזרק בהתבסס על הצבע הכחול הכלול בתערובת.
   הערה: יש להשתמש בנפח קטן יותר (למשל, 3 μL) בעת הזרקה לנקבות בנות 3-4 שבועות ובנפח גדול יותר (למשל, 10 μL) בעת הזרקה ל-MGs של נקבות מניקות.
5. החזיקו בעדינות את קצה דש העור בפינצטה מעוקלת עדינה והזריקו את תערובת הזרקת Ad-Cre באיטיות לתוך הפטמה, תוך מעקב אחר התפשטות הצבע הכחול לתוך עץ צינור החלב. שמור על קצב הזרקה נמוך ככל האפשר כדי למנוע נזק לומן ductal.
   הערה: הזרקת נוזל (כפי שמודגם על ידי הצבע הכחול ברומופנול הכלול) המתפשט לאורך כל עץ הצינור מבלי לדלוף לתוך תא הסטרומה מעיד על הזרקה אינטרדוקטלית מוצלחת.
6. משכו בעדינות את המחט מהפטמה כדי למנוע דליפה של הנוזל המוזרק.
7. בדוק את הצד הדיסטלי (כלומר, הרחק מהפטמה) של MG או את האזור שמסביב של הפטמה המוזרקת. שימו לב שנפיחות בצבע כחול (כלומר, צבע שמתפזר לתוך הסטרומה הסמוכה) מעידה על הזרקת פד שומן חלב ולא על הזרקה אינטרדוקטלית מוצלחת.
8. סגור את פצעי הניתוח (מ 1.2) בעור עם קליפסים פצע.

2. טיפול לאחר הניתוח

1. הוציאו את העכבר מההרדמה והניחו אותו על כרית חימום בתוך כלוב נקי להתאוששות.
2. יש לתת מלוקסיקם תת עורית ב 5 מ"ג / ק"ג שוב, 24 שעות לאחר הניתוח.
3. לפקח על התנאים הכלליים של החיה ולחפש סימנים של זיהום באתר החתך במשך 5 ימים.
4. קליפים פצע מוסרים ~ 7-10 ימים לאחר הניתוח.

תוצאות

איור 1: תרשים סכמטי של הזרקה תוך-צינורית של וירוס Ad-Cre לתוך MG.(A) אתר חתך בקו האמצע בין שני ה-MGs הרביעיים. (B) הזרקה תוך-צינורית של Ad-Cre עם צבע כחול (להמחשה טובה יותר) לאחד ה-MGs הרביעי. (C) סגירת החתך בעור על ידי קליפסים לפצע

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
מחט 33 מד	המילטון	7803-05	סגנון נקודה 3 בוטה
תפס רפלקס 7 מ"מ	בריינטרי סיינטיפיק	RF7 CS
אדנווירוס, Ad-K5-Cre	אוניברסיטת איווה ליבה וקטורית ויראלית	Ad5-bk5-Cre (VVC-Berns-1547)
אדנווירוס, Ad-K8-Cre	אוניברסיטת איווה ליבה וקטורית ויראלית	Ad5mK8-nlsCre
ברומופנול כחול	סיגמא-אולדריץ'	B0126-25G
מזרק המילטון	המילטון	7636-01	0.025 מ"ל
מספריים לניתוח זעיר	פנטאייר	9 דקות	מלקחיים של שען
פינצטה במיקרו-ניתוח	דומונט	M5