אינפלציית דיו בהודו: שיטת צביעה לדמיין גושים סרטניים

תקציר

מקור: Paschall, A. V. et al. מודל עכבר אורתוטופי של גרורות ספונטניות בסרטן השד. J. Vis. Exp. (2016).

סרטון זה מתאר את ניפוח הדיו בהודו - שיטת צביעה - כדי לכמת גושים סרטניים בריאות עכבר נושאות גידול. לאחר הצביעה, הריאות מקובעות בתמיסה של פקטה כדי לצפות בגושים סרטניים בריאות.

פרוטוקול

1. אימות גרורות ריאה באמצעות אינפלציית דיו הודו של ריאות נושאות גידולים

הערה: כדי לאמת את תוצאות הדמיית הגידול החי של לוציפראז, בצע ניפוח דיו הודי של ריאות עכבר נושאות גידול כדי לכמת גושים סרטניים. תאי 4T1 גם שולחים גרורות לאיברים ורקמות אחרים (איור 1), ולכן יש לבצע בדיקה היסטולוגית של איברים אלה כדי לאמת גרורות סרטניות במידת הצורך. פרוטוקול זה משתמש בגרורות ריאה כדוגמה.

1. החזיקו עכברים בכלוב הביתי הקיים שלהם להמתת חסד. כאשר הם שוכנים עם בעלי חיים אחרים, העבירו את העכברים שלא עברו המתת חסד לכלוב אחר.
2. הסר את ראש מסנן הכלוב והחלף בראש מסנן CO2. הפעל את בלון גז CO2 דחוס (100%) המחובר לחלק העליון של מסנן CO2. הגדר את קצב הזרימה על 2 ליטר לדקה ושמור על CO2 דולק למשך 10 דקות לפחות. אם העכברים עדיין נושמים בתום 10 דקות, השאירו את ה-CO2 דולק עד דקה אחת לפחות לאחר שהעכברים הפסיקו לנשום. כבה את בקרת מיכלי CO2 ואת מד הזרימה. המתן 3 דקות נוספות והסר את ראש המסנן.
3. הניחו את העכבר שהוקרב על גבו על לוח פוליסטירן. הצמד את הרגליים כדי להבטיח גישה ללא הפרעה לקנה הנשימה. רססו את העכברים באתנול 70%.
4. בעזרת זוג מספריים, חותכים לאורך קו האמצע של אמצע הבטן של העכבר דרך כלוב הצלעות ומעלה לכיוון בלוטות הרוק. שימו לב לקנה הנשימה. השתמש במלקחיים כדי להסיר רקמות המקיפות את קנה הנשימה כדי לחשוף את קנה הנשימה.
5. משחילים קצה פיפטה מתחת לקנה הנשימה. מחזיקים את הקצה ביד אחת, מרימים בעדינות את קנה הנשימה למעלה והרחק מהגוף.
6. סובב את הפלטפורמה ומחזיק את העכבר ב-180°. השתמש 1/2 CC 27 גרם 1/2 מזרק שחפת כדי להזריק דיו הודו (10% דיו הודו ו 0.1% אמוניום הידרוקסיד) לתוך הריאות דרך קנה הנשימה. לחלוטין לנפח את הריאות עם דיו עד התנגדות חזקה מורגשת.
7. השתמש זוג מספריים כדי לחתוך את קנה הנשימה. השתמש במלקחיים כדי להחזיק את העכבר ולהכניס קבוצה נוספת של מלקחיים מתחת לריאות ולמשוך את אונות הריאה מתוך העכבר. שטפו את הריאות לזמן קצר בכד המכיל מים.
8. במכסה אדים כימי מעבירים את הריאות לבקבוקון זכוכית המכיל 3 מ"ל של תמיסה של פקטה (50% אתנול, 6% פורמלדהיד ו-3% חומצה אצטית קרחונית). מכסים את הבקבוקון כדי למנוע מהתמיסה להתאדות.
   הערה: ניתן לאחסן את הרקמות בתמיסה של Fekete ללא הגבלת זמן.
9. לאחר כמה דקות, התבוננו בגושים סרטניים כנקודות לבנות על הריאות השחורות (איור 1). גולם הגידול הלבן נראה על ידי העיניים. מעבירים את הריאות לצלחת במכסה אדים וסופרים את מספר הכתמים הלבנים. כל נקודה לבנה מייצגת גולם גידול גרורתי יחיד.

תוצאות

איור 1. הדמיה של גושי גידול ריאה על ידי אינפלציית דיו בהודו. הריאה של העכבר נושא הגידול נופחה בדיו הודי והתקבעה בתמיסה של פקטה. הנקודות הלבנות הן גרורות ריאה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
יישום קליפ אוטומטי 9 מ"מ	Becton Dickinson אבחון טיפול ראשוני. ספארקס, מרילנד	427630
מספריים חדים לניתוח	פישר	8940
ניתוח מלקחיים דקיקים	פישר	8875
70% אתנול	Ultrapure-usa.com
1/2 סמ"ק 27 גרם 1/2 מזרק שחפת	בקטון דיקינסון ושות' ניו ג'רזי	305620