משלוח תוך סימפונות: טכניקה לניהול סוכן ניסיוני באופן סלקטיבי לתוך ריאה עכבר

תקציר

מקור: Liao, S. et. al. Direct intrabronchial administration to improve the selective agent deposition in the mouse lung. J. Vis. Exp. (2019).

סרטון זה מתאר גישה תוך-סימפונית למתן חומר ניסיוני באופן סלקטיבי לתוך ריאה ימנית ושמאלית דיסטלית. בפרוטוקול המוצג, אנו ננהל בלומיצין תוך סימפוני לתוך עכבר כדי לקבל מודל טוב יותר עבור פיברוזיס ריאתי.

פרוטוקול

כל ההליכים המערבים בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ועל ידי ועדת הבדיקה הווטרינרית JoVE.

1. אינטובציה IB לא ניתוחית וגישות לידה

1. גישת IB לקנולציה סלקטיבית של הריאה הימנית הדיסטלית
   1. לאחר ביצוע קנולציה תוך-טרכאלית (IT) (השתמש ביד הדומיננטית כדי להכניס את הצנתר המורחב לקנה הנשימה דרך חלל הפה), סובב את לוח הפלסטיק +30° (איור 1A).
   2. החזק את רכזת הצנתר והנחה אותה באופן טבעי במקביל לקו האמצע של העכבר, והרחיב אותה לעומקים מבוססי משקל כמתואר בטבלה 1.
      הערה: יש לציין את ההתנגדות בעומקים אלה. בשלב זה, העכבר יהפוך מעט טכיפני, כפי שמוסבר בתוצאות המייצגות. עבור מפעיל מנוסה, כ -90% מהניסיונות יצליחו לאחות את הריאה הימנית (עם טכיפנאה שצוינה).
   3. יש לספק 20 μL של 0.3% צבע כחול Evans (EBD, ראו טבלת חומרים) עם קצה העמסת ג'ל.
   4. יש לפזר 1-2 אליציטוטים (0.1 מ"ל כל אחד) של אוויר באמצעות טפטפת הזכוכית.
      הערה: זה מבטיח פינוי של תמיסת EBD שיורית (או חומרים ניסיוניים) מתוך הצנתר.
   5. משוך את הצנתר, ולאחר מכן לשמור על מיקום העכבר במשך 30 שניות.
   6. הניחו את בעל החיים על שמיכה מחממת עד שהוא חוזר להכרה. ההתאוששות מסתיימת בדרך כלל תוך 2 דקות.
2. גישת IB לקנולציה סגמנטאלית סלקטיבית של הריאה השמאלית הדיסטלית
   1. לאחר ביצוע קנולציית IT (השתמשו ביד הדומיננטית כדי להכניס את הצנתר המורחב לקנה הנשימה דרך חלל הפה), סובבו את לוח הפלסטיק -74° (איור 1B).
   2. החזיקו את רכזת הצנתר והפעילו לחץ עדין כדי לקדם את הצנתר לתוך הסימפונות הראשיים השמאליים, תוך הפעלת לחץ מתון הן כלפי מטה (90°) והן לכיוון קצה הספר. בעומקים שצוינו בטבלה 1, על המפעיל לשים לב להתנגדות כאשר המקטעים התחתונים של הריאה השמאלית מעורבים. אם מתרחשת טכיפנאה, משכו את הצנתר למצב 20-25 מ"מ, ונסו שוב.
   3. לאחר שיבול מקטעי הריאה התחתונה השמאלית, נדרש שינוי מיקום כדי לאפשר סיוע כבידתי למתן הסוכן. סובבו את לוח הפלסטיק ב-30° (איור 1B).
   4. לספק 40 μL של 0.3% EBD עם טיפ העמסת ג'ל.
      הערה: זה ריאלי לספק נפח גדול יותר של סוכן כי הריאה השמאלית יש רק אונה אחת.
   5. יש לפזר 1-2 אליציטוטים (0.1-0.3 מ"ל כל אחד) של אוויר באמצעות טפטפות הזכוכית.
      הערה: זה מבטיח פינוי של כל שאריות EBD (או חומרים ניסיוניים) מתוך הצנתר.
   6. משוך את הצנתר, ולאחר מכן לשמור על מיקום העכבר במשך 30 שניות.
   7. הניחו את בעל החיים על שמיכה מחממת עד שהוא חוזר להכרה. ההתאוששות מסתיימת בדרך כלל תוך 2 דקות.

תוצאות

איור 1: גישה לקנולציה סלקטיבית של אונת ריאות ימנית/שמאלית.(A) כדי להתמקד בריאה הימנית, לוח הפלסטיק מסובב +30°, מה שמשפר את הקלות של הפעלה סלקטיבית של סימפונות הגבעול הימני. הצנתר מתקדם (בהתאם למרחקים המוצעים בטבלה 1) כדי להפעיל באופן סלקטיבי אונות ימניות. 20 μL של 0.3% EBD ניתן. ב~90% מהניסיונות, האונה האחורית היא קנולציה. 10%...

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
22 G קטטר IV מסוכך	ב.ד.	381423
צבע כחול אוונס	סיגמא-אולדריץ'	E2129
LED-30W סיב אופטי כפול צוואר אווז אורות מאיר מיקרוסקופ	אמסקופ	LED-30W
מחט Precisionglide, 18G x 1"	ב.ד.	305195	קצה משופע, אורך 12 מ"מ