ניתוח מחזור התא: גישה לחקר ויסות מחזור התא של תאי סרטן ריאה נגועים ב- miRNA

תקציר

מקור: Hossian, A. K. M. N., et al. אנליזה של טיפולי miRNA קומבינטוריים לוויסות מחזור התא ואנגיוגנזה.J. Vis. Exp.(2019).

miRNA או microRNA הם מווסתי מפתח של התקדמות מחזור התא. סרטון זה מתאר ניתוח מחזור תאים מבוסס ציטומטריה של זרימה של תאי סרטן ריאות הנגועים ב-miRNA, כדי לחקור את ההשפעה של miRNA על ויסות מחזור התא. עיכוב התרבות על ידי עצירת התקדמות מחזור התא הראה פוטנציאל להיות גישה מבטיחה לטיפול בסרטן.

פרוטוקול

1. miR-143 ו- miR-506 transfection

זהירות: יש להשתמש בכפפות לטקס, משקפי מגן וחלוק מעבדה בעת ביצוע הניסויים המתוארים. במידת הצורך, השתמש בארון הבטיחות הביולוגית עם מאוורר הארון, מבלי לחסום את דרכי הנשימה או להפריע לזרימת האוויר הלמינרית. כוונו תמיד את חלון הזכוכית המגן לגובה המתאים, כמתואר על ידי היצרן.

1. זרע תאי NSCLC A549 בצלחת באר T25 ס"מ² צלוחיות / 6/96 במדיה DMEM / F12K בתוספת 10% FBS ו 1% פניצילין-סטרפטומיצין (מדיה תרבית) במכסה מנוע תרבית רקמה ולדגור לילה ב 37 ° C עם 5% CO₂ באינקובטור תרבית רקמה.
2. השהה את miR-143 ו/או miR-506 חיקוי, או ערבל siRNA עם חומר מדביק (2.4 מיקרוגרם של m....

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
DMEM 4.5 גרם/ליטר גלוקוז, ללא נתרן פירובט, עם L-גלוטמין	VWR	VWRL0100-0500
סרום בקר עוברי - פרימיום	Antlanta Biologicals	S11150
סרום בקר עוברי (FBS)	פישר סיינטיפיק	10438026
פניצילין-סטרפטומיצין 10/10	Antlanta Biologicals	B21210
ריבונוקלאז A מלבלב בקר	סיגמא	₪16513-50 מ"ג
פרופידיום יודיד	MP ביוכימיקלים LLC	IC19545825
אתנול, מוחלט (200 הוכחות), כיתה ביולוגיה מולקולרית	פישר ביוריאגנטים	BP2818500
אינקובטור CO2	תרמו סיינטיפיק	HERAcell 150i
A549 תאי סרטן ריאה מסוג תאים לא קטנים	ATCC	ATCC CCL-185
96 צלחת באר	CELLTREAT סיינטיפיק	50-607-511
FACS Calibur Flowcytometer	בקטון דיקינסון
תרבית תאים BioLite תרבית תרבית טיפול תרומתית	תרמו סיינטיפיק	12-556-009
מאצ'ין צנטריפוגות מבוקרות טמפרטורה	תרמו סיינטיפיק	ST16R
מיקרו צנטריפוגות מאצ'ין מבוקרות טמפרטורה	אפנדרוף	5415R
צינורות צנטריפוגות SpectraTube 15ml	VWR	470224-998
Modfit LT	תוכנת Verity		שלב 2.15: תוכנה חלופית לניתוח התפלגות אוכלוסיית מחזור התא
צינורות מיקרוצנטריפוגות Fisherbrand Basix עם כובעי הצמדה סטנדרטיים	פישרברנד בסיקס	02-682-002
חיקוי miRNA has-miR-143-3p	א.ב.מ	MCH01315
חיקוי miRNA has-miR-506-3p	א.ב.מ	MCH02824
תערובת תזונתית F-12K (Kaighn's Mod.) עם L-גלוטמין	קורנינג	קורנינג 45000-354
מקפיא שלילי 80°C	VWR	VWR40086A