בדיקת אימונופלואורסנציה: שיטה לזיהוי תאי גידול שנלכדו על חוט רפואי

תקציר

מקור: Gallerani, G. et.al., אפיון תאי גידול באמצעות חוט רפואי ללכידת תאי גידול במחזור: גישה תלת ממדית המבוססת על אימונופלואורסנציה ודגי DNA. J. Vis. Exp. (2017).

סרטון זה מתאר את הטכניקה של צביעה אימונופלואורסצנטית של תאי גידול במחזור שנלכדו על חוט רפואי מתפקד. החוט המתפקד מאפשר בידוד של CTCs in vivo, ישירות מזרם הדם של המטופל.

פרוטוקול

1. דג אימונו-DNA על חוט

1. קו סלולרי ספייק-אין על חוט (תמיכה בתלת-ממד)
   הערה: הגדרה ראשונית כוללת בחירה מדויקת של שורות תאים דבקים המבוססות על EpCAM-positivity. החוט מתפקד עם נוגדנים נגד EpCAM כך שרק תאים חיוביים ל- EpCAM מוכתמים.
   הערה: אין לגעת בחלק המתפקד של החוט כדי למנוע נזק.
   הערה: כל השלבים צריכים להתבצע תחת מכסה מנוע זרימה למינרית בתנאים סטריליים.
   1. יש להשהות מחדש את כל תכולת בקבוק T75 (מפגש של 80%) בבקבוקון של 5 מ"ל באמצעות 4 מ"ל של תווך שלם; עבור ספייק בודד, מומלץ לכ-2,000,000 תאים למקסם את היצמדות התאים לחוט.
   2. הסר את החוט מאריזת הזכוכית שלו.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
אתנול	קרלו ארבה	# 414605
טווין 20	ביו ראד	# 1706531
PBS (מלח חוצץ פוספט)	מדיקגו	# 09-9400-100
אצטון	סיגמא אולדריץ'	# 534064-500ML
מלט גומי	רויאל טאלנס	# 95306500
EpCAM-FITC (שיבוט: HEA-125)	מיטניי	#130-080-301
RPMI 1640	גיבקו	# 31870-025
XT ALK BA	בדיקות MetaSystems	# D-6001-100-OG
Detektor CANCER01 EpCAM	גילופי ננומדיזין		חוט פונקציונלי
מיקרוסקופ פלואורסצנטי ZEISS אקסיוסקופ	ZEISS
ניקון NIS-Elements BR 4.11.00 תוכנה 64 סיביות	ניקון
Nikon DS-QiMc 12 סיביות מצלמה דיגיטלית	ניקון	DS-QiMc