דג DNA תלת-ממדי: טכניקה לאיתור גן מסוים על כרומוזום

תקציר

מקור: Gallerani, G. et.al. אפיון תאי גידול באמצעות חוט רפואי ללכידת תאי גידול במחזור: גישה תלת ממדית המבוססת על אימונופלואורסנציה ודגי DNA. J. Vis. Exp. (2017).

בידוד ואפיון תאי גידול במחזור הדם של חולי סרטן הוא סוג של ביופסיה נוזלית לא פולשנית וקשורה להישנות המחלה ולהתקדמות המחלה. סרטון זה מתאר את הטכניקה של הכלאה פלואורסצנטית באתרו של DNA (DNA FISH) על CTCs שנלכדו על חוט רפואי, כדי לחקור גן ספציפי מעניין.

פרוטוקול

1. 3D DNA-FISH יום 2

זהירות: יש להקדיש תשומת לב מיוחדת לטמפרטורה הגבוהה של המכשירים והחדר הלח.

1. הגדר את תנור ההכלאה ואת תנור החימום היבש (~ 3 שעות לפני תחילת פרוטוקול DNA-FISH). כוונו את תנור ההכלאה ל-75°C, כוונו את תנור החימום היבש ל-37°C וקררו את תמיסת ה-SSC 0.4× (pH = 7.0 ± 0.1) ל-4°C.
   הערה: מצב ה- pH של מאגרי FISH הוא קריטי וחייב להיות 7.0 ± 0.1.
2. לשטוף את החוט 3 פעמים קר כקרח 0.4× SSC solution.
   הערה: שמור את החוט בחושך כדי למנוע הלבנה פלואורוכרום במהלך ההליכים הבאים.
3. יבש במשך 10 דקות בחושך מתחת לארון האדים.
4. מערבלים ....

תוצאות

איור 1: חוט פונקציונלי, סידור סכמטי של גשושיות פירוק ALK, סכימת דפוסים צפויים של סידור מחדש של ALK ומחזיק מיוחד.(א) תיבות אדומות מדגישות את שלושת החלקים העיקריים של החוט: קצה פונקציונלי, פקק תיל וקצה לא מתפקד. הקצה הפונקציונלי הוא החלק העדין ביותר של החוט ואין לגעת בו במהלך הטיפול כדי למנוע ניתוק או נזק לתא. (b) הגשושיות הירוקות והאדומות נקשרות כל אח.......

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
טווין 20	ביו ראד	# 1706531
Vysis 20X SSC (66 גרם)	אבוט מולקולר בע"מ	# 30-804850	אבקה שתרחף מחדש במים מזוקקים, לפי המומלץ
מים	מיליפור
DAPI, כיתה FluoroPure	Invitrogen	# D21490
מיקרוסקופ פלואורסצנטי ZEISS אקסיוסקופ	ZEISS