בדיקת שטף חוץ-תאי: שיטה למדידת פרופיל מטבולי של תאים

תקציר

מקור: Hlozkova K. et al. הערכת הפרופיל המטבולי של תאי לוקמיה ראשוניים. J. Vis. Exp. (2018).

פרוטוקול זה מספק גישה ביוכימית למדידת קצב החמצה חוץ-תאי (ECAR) וקצב צריכת חמצן (OCR) של תאים לוקמיים ראשוניים עם בדיקת שטף חוץ-תאי. הערכת הפרופיל המטבולי של תאים אלה מסייעת לאפיין את דרישותיהם, מה שמוביל לטיפול מותאם אישית.

פרוטוקול

1. הכנת ריאגנטים

1. הכן 500 מ"ל של PBS על ידי המסת 137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 4.3 mM Na₂HPO₄, 1.47 mM KH₂PO₄, ב- ddH₂O. כוונן את ה- pH ל- 7.4 עם HCl. סטריל על ידי autoclaving.
2. הכנת 100 מ"ל של מדיום RPMI: RPMI-1640 בינוני עם L-Alanyl-Glutamine בתוספת 10% סרום בקר עוברי (FBS), פניצילין (100 U / mL) וסטרפטומיצין (100 מיקרוגרם / מ"ל).
3. מכינים 50 מ"ל של 0.1 מ 'NaHCO₃ במים מזוקקים. כוונן את ה- pH ל- 8.1, סנן סטריליזציה (0.22 מיקרומטר) ואחסן ב- 4 ° C.
   הערה: עבור שני לוחות אנלייזר שטף חוץ-תאי 8 בארות, להכין 250 μL של 0.1 M NaHCO₃ pH 8.1.
4. לה....

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
מנתח סוסון ים XFp	אג'ילנט טכנולוגיות	S7802A
מיני צלחת תרבית תאים XFp סוסון ים	אג'ילנט טכנולוגיות	103025-100
קורנינג™ Cell-Tak Cell and Tissue דבק	תרמופישר סיינטיפיק	CB40240
D-(+) גלוקוז	סיגמא-אולדריץ'	G7021-100G
אוליגומיצין A	סיגמא-אולדריץ'	75,351-5 מ"ג
2-Deoxy-D-גלוקוז	סיגמא-אולדריץ'	D8375-1G
FCCP	סיגמא-אולדריץ'	C2920-10MG
רוטנונה	סיגמא-אולדריץ'	R8875-1G
אנטימיצין A מ Streptomyces sp.	סיגמא-אולדריץ'	A8674-25MG
סוסון ים XF בסיס בינוני, 100 מ"ל	אג'ילנט טכנולוגיות	103193-100
תמיסת L-גלוטמין, 200 מילימטר	סיגמא-אולדריץ'	G7513-100ML