קציר מח עצם מגפה אחורית של עכבר

תקציר

מקור: Zhu, Y. P., Padgett, et al. הכנת מח עצם שלם לניתוח ציטומטריה מסה של תאי שושלת נויטרופילים. J. Vis. Exp. (2019).

סרטון זה מתאר פרוטוקול מפורט לבידוד מח עצם שלם טרי מגפיו האחוריות של העכבר כדי לחקור פגמים שלמים ב- BM עבור חולים עם הפרעות דם כגון לוקמיה.

פרוטוקול

1. עכבר קציר מח עצם (BM)

1. רכוש עכברי C57BL/6J מספק מסחרי. האכילו את התזונה הסטנדרטית של צ'או מכרסמים ושכנו בכלובי מיקרואיזולטורים במתקן ללא פתוגנים.
2. השתמש עכברים זכרים, 6-10 שבועות של גיל, למטרות ניסוי. המתת חסד על ידי שאיפת CO₂ ואחריה נקע צוואר הרחם.
3. הניחו את העכבר על כרית ניתוחים סטרילית כשהבטן כלפי מעלה. לעקר את העור של אזור הבטן והגפיים האחוריות על ידי ריסוס 70% אתנול. השתמש בזוג מספריים כירורגיים מנתחים כדי לחתוך את חלל הבטן פתוח.
4. הסר את העור כדי לחשוף את הגפיים האחוריות. השתמש בזוג מלקחיים קהים כדי להחזיק את שוקת העכבר ממש מתחת לקרסול. השתמש בזוג נוסף של מלקחיים חבישה מעוקלים כדי לייצב את השוקה מתחת למלקחיים החובשים הקהים. לשבור את השוקה ולחשוף את העצם על ידי קריעת השריר עם מלקחיים חבישה קהה.
   הערה: השוקה מחוברת באופן רופף למפרק הברך וניתן לבחור אותה בקלות על ידי שימוש במלקחיים קהה חוד.
5. מניחים את השוקה בקור 1x PBS.
6. לאחר מכן, הזיזו את המלקחיים המעוקלים והמייצבים כלפי מטה אל עצם הירך. החליקו את המלקחיים הקהים מתחת למפרק הברך והחזיקו את פיקת הברך. נקע את פיקת הברך על ידי משיכה עדינה כלפי מעלה. חשוף את עצם הירך על ידי תלישת השריר המחובר לפיקת הברך. אחזו את עצם הירך החשופה במלקחיים המעוקלות וחתכו את עצם הירך מתחתית העצם באמצעות מספריים כירורגיים מנתחים.
7. מניחים את עצם הירך בקור 1x PBS.
8. ניקוב חור בצינור מיקרוצנטריפוגה 0.5 מ"ל עם מחט 18 גרם.
9. הכניסו את עצם השוקה ואת עצם הירך לאותו צינור מיקרוצנטריפוגה בנפח 0.5 מ"ל כאשר הקצה הפתוח של העצמות פונה כלפי מטה אל החור.
10. הכניסו את הצינור בנפח 0.5 מ"ל המכיל גם את השוקה וגם את עצם הירך לתוך צינור מיקרוצנטריפוגה בנפח 1.7 מ"ל.
11. סובבו את הצינורות הדו-שכבתיים המכילים גם טיביה וגם עצם הירך במהירות של 5,510 x גרם במשך 30 שניות במיקרו-צנטריפוגה.
12. ודא כי BM מופק מן העצמות גלולה בתחתית הצינור. השליכו את הצינור בנפח 0.5 מ"ל המכיל את העצמות המקודשות. העכבר BM מוכן לשלבים הבאים.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
עכבר: C57BL/6J	מעבדת ג'קסון	מספר מלאי: 000664
HyClone פוספט תמיסת מלח חוצצת	GE מדעי החיים	חתול#SH30256.01