כל ההליכים המערבים משתתפים אנושיים בוצעו בהתאם להנחיות המוסדיות, הלאומיות והבינלאומיות לרווחת האדם ונבחנו על ידי ועדת הבדיקה המוסדית המקומית.
1. שאיפת מח עצם והכנת דגימה
- הכנת המטופל והחומר
- מלאו מזרק אחד או שניים של 10 מ"ל בלידוקאין 1% באמצעות מחט של 16 מד. החלף את המחט במחט של 21 מד.
- יש לטפטף שתי טיפות של 5% EDTA על זכוכית שעון.
- הגדר שקופיות זכוכית (n = 15 עם מספור מטופלים ותאריך עקביים) להכנות המריחה.
- מניחים את המטופל במצב דקוביטוס לטרלי. אתר את עמוד השדרה האיליאק האחורי העליון וסמן ב- pen.
הערה: באופן כללי, עמוד השדרה האיליאק העליון האחורי ממוקם ברוחב יד אחת דיסטלי לפסגה האיליאק וברוחב יד אחת לרוחב לקו האמצע. אצל נקבות, עמוד השדרה בפועל עשוי להיות קצת יותר רוחבי, אצל חלק מהגברים קצת יותר מדיאלי.
- יש לחטא את העור בכלורהקסידין 0.5-1% באתנול מאזור הביופסיה המיועד החוצה במעגלים.
- פתחו את חבילת הכפפות הסטריליות, לבשו את הכפפות הסטריליות והניחו את החבילה על השולחן ליצירת שדה סטרילי. פתחו את החבילה עם מחט השאיפה והניחו אותה על השדה הסטרילי.
- לחדור את העור ואת הרקמה תת עורית ולבסוף periosteum. ב periosteum, לנהל את הלידוקאין בצורה כזו שטח בקוטר 1 ס"מ כבר מורדם.
הערה: ניהול נאות של לידוקאין לפריאוסטאום הוא אחד הגורמים החשובים ביותר לנוחות המטופל. בדוק אם הפריאוסטאום הורדם כראוי על ידי הקשה על מיקום הביופסיה המיועד עם המחט שהוחדרה ושאל אם המטופל מרגיש כאב כלשהו. שימו לב: ילדים מורדמים באופן מלא במהלך כל ההליך.
- החזק את מחט השאיפה (15 Ga x 2.8") עם הקצה הפרוקסימלי בכף היד ואת האצבע המורה כנגד הצד של מוט המתכת של המחט ליד הקצה; מיקום זה מאפשר שליטה טובה יותר.
- הציגו את המחט בתנועה סיבובית (על ידי תנועה מהירה לסירוגין) דרך העור לכיוון עמוד השדרה האיליאק והביאו את המחט למגע עם עמוד השדרה האיליאק האחורי.
- ודא כי הוא מחט הוא הציג לאזור מורדם של periosteum; המטופל צריך להרגיש רק לחץ ולא כאב. אם המטופל מרגיש כאב, או למקם מחדש את המחט, או לתת יותר לידוקאין.
- באמצעות לחץ עדין אך יציב, קדמו את המחט תוך כדי סיבובה לסירוגין נגד כיוון השעון. הכניסה לחלל המוח מזוהה בדרך כלל על ידי ירידה בהתנגדות.
- הסר את הסטיילט מהמחט. חבר מזרק ריק 10 מ"ל למחט.
- החל לחץ שלילי על ידי משיכת בוכנה מזרק עם משיכה עדינה. הזהירו את המטופל כי הוא עלול להרגיש תחושת התכווצויות וכאב כאשר המוח הוא שאיפה. אם לא משתחררים מספיק קוצים של מח עצם, יש לבצע שאיפה נוספת במשיכה מהירה אחת. רוב הדוקרנים יהיו ב 1-2 מ"ל הראשונים המתקבלים מהמשיכה הראשונית. לשאוף רק 1-2 מ"ל כדי למנוע דילול הדגימה.
הערה: דילול יגרום להמודילות ועלול לבלבל את תוצאות MRD.
- מוציאים את המזרק ומחליפים את הסטיילט במחט השאיפה. מוציאים חלק מהמח לתוך זכוכית שעון ואת השאר לתוך צינור 8 מ"ל מצופה הפרין.
הערה: הפוך כל צינור מיד לאחר הנחת מח העצם לשאוף לתוך צינור הדגימה כדי להבטיח נוגדי קרישה נאותים. קרישת מח עצם היא לעתים קרובות הגורם לחומר לא מתאים. מח עצם נוסף ניתן לשאוף מאותה נקודה, אך רצוי שהמחט מתקדמת 5-10 מ"מ לפני נטילת שאיפה חדשה. רצוי לא יותר מ 2 הגרלות לכל רמת הכנסה יש לקחת. הקפידו לסמן את הצינורות במספרים הולכים וגדלים המייצגים את ההגרלה הראשונה, השנייה ו/או העוקבת. מקובל להשתמש במשיכה הראשונה לניתוח האבחנתי הרלוונטי ביותר.
- לחלופין, הוציאו את המחט ממקום ההחדרה והכניסו אותה מחדש לחלל המח במרחק של כמה מילימטרים ממקום ההחדרה המקורי וחזרו על ההליך.
הערה: אין לשאוף יותר מ 1-2 מ"ל לכל משיכה, כדי למנוע זיהום דם משמעותי.
- חזור על הפעולה לעתים קרובות ככל שיש צורך בחומר. כאשר שואפים מספיק חומר לפרוטוקול המחקר הקליני הספציפי, יש להסיר את מחט מח העצם.
הערה: במקרה של שאיפות מח עצם איטיות או קשות אחרות, השימוש במזרקים שהיו סמוקים מראש עם נוגדי קרישה עשוי להיות מועיל. במקרה של ברז יבש, יש לבצע ביופסיית טרפין הנמצאת מחוץ לתחום כתב יד זה.
2. הכנת מריחות לבדיקה מורפולוגית
- להערכה מורפולוגית אופטימלית, בחרו קוצים (למשל באמצעות מרית פלסטיק) מהשאיפה בזכוכית השעון והניחו אותם על מגלשת זכוכית.
- הניחו בעדינות מגלשת זכוכית נוספת על המגלשה עם המח והחליקו בעדינות; הימנעו מכל לחץ.
הערה: רק במקרה של קוצים מח עצם גדול מאוד ניתן להפעיל לחץ קל, כדי להקטין את עובי התא מתפשט. ההליך נהנה מעזרה של עוזר שיכול לטפל בצינורות הדגימה. תיוג מדויק של הצינורות עם מספר המטופל ומספר משיכת מח העצם הרציפה הוא קריטי.
- יבשו היטב את המגלשה ולאחר מכן בצעו צביעה של מאי גימסה גרינוולד (ראו טבלת חומרים). בחנו תחת מיקרוסקופ האור מורפולוגיה (ראו איור 1).
הערה: איור 1A מראה את המריחות של מח עצם בריא המורכב מסוגי תאים פונקציונליים שונים, בעוד איור 1B הוא חולה AML עם פיצוצים לוקמיים בעיקר. כדי להגדיר טוב יותר את הנטל הלוקמי השיורי, יש לבצע אימונופנוטיפ.
