Method Article

הדמיה כרונית של עכבר-Visual Cortex שימוש ההכנה סחוט הגולגולת

DOI:

10.3791/2060

⸱

October 25th, 2010

 , 
1Neurobiology and Anatomy, University of Rochester

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

בחומר וידאו משלים זה, אנו מראים פרוטוקול עבור כרונית In vivo הדמיה של המוח שלם באמצעות הכנה דליל-הגולגולת.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

בשנת vivo הדמיה באמצעות שני פוטונים לייזר מיקרוסקופיית (2PLSM) מאפשר לימוד של תאים חיים תהליכים עצביים במוח שלם. הטכניקה המוצגת כאן מאפשרת הדמיה של אותו אזור של המוח במספר נקודות זמן (הדמיה כרונית) עם רזולוציה מיקרוסקופי המאפשר מעקב של הקוצים הדנדריטים שהם מבנים קטנים המייצגים את רוב אתרי מעוררים postsynaptic במערכת העצבים המרכזית. היכולת בבירור לפתור מבנים קורטיקליים קנס על מספר נקודות זמן יש יתרונות רבים, במיוחד במחקר של פלסטיות המוח שבו שינויים מורפולוגיים על הסינפסות שיפוץ מעגל עשוי לעזור להסביר את המנגנונים. בחומר וידאו משלימים זה, אנו מראים פרוטוקול עבור כרונית in vivo הדמיה של המוח שלם באמצעות הכנה דליל-הגולגולת. ההכנה סחוט הגולגולת היא גישה פולשנית, אשר ימנע נזק אפשרי ואת הדורה / או קליפת המוח, ובכך להקטין את תחילתה של תגובה דלקתית. כאשר בפרוטוקול זה מבוצע כהלכה, אפשר בבירור לעקוב אחר השינויים המאפיינים עמוד השדרה הדנדריטים במוח שלם על פני תקופה ממושכת.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. כדי להמחיש את הנוירונים במוח שלם באמצעות שני פוטונים מיקרוסקופיה, הכנה שבו הנוירונים מסומנים עם סמנים ניאון משמש. בניסויים שהוצגו כאן אנו משתמשים בקו ה-GFP-M עכבר מהונדס אשר תוויות שכבה 5 תאים פירמידליים 1. 5 שכבת תאים פירמידליים פרויקט תהליכים דנדריטיים לשכבות שטחיות, המאפשר ויזואליזציה של דנדריטים הקוצים הדנדריטים עד לעומק של 300 מיקרומטר מתחת לרמה של פיא. גישה חלופית היא להשתמש בתאים התווית סמנים ויראלי (ראה Lowery et al. שהוגשה יופיטר).
  2. לחטא את סביבת העבודה באמצעות אתנול 70% כלים החיטוי לניתוח aseptic. כיסוי משטח הפעלה עם רוטב נקי.....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

הדמיה כרונית באמצעות שני פוטונים מיקרוסקופיה הופכת פופולרית יותר ויותר טכניקה ללמוד שינויים מורפולוגיים מופעלות במהלך 2-5 הפלסטיות. כאן אנו מדגימים הכנה דליל, גולגולת לעקוב הקוצים הדנדריטים מזוהה במוח העכבר על ימים שלמים הדמיה שונים. בפרוטוקול זה, הגולגולת נותר בשלמותו, גרימת נזק מינימלי לקליפת המוח וכתוצאה מכך רמות נמוכות מאוד של neuroinflammation אשר עשוי לשנות את תפקוד המוח 6. זה מאפשר את החיה להיות צילמו מיד לאחר הניתוח הראשון ולאחר מכן reimaged ימים לאחר.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
אין ניגודי אינטרסים הכריז.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

עבודה זו נתמכה על ידי פרס Wellcome קריירה בורוז במדעי ביו (AKM), קרן וייטהול מענק מחקר (AKM), מלגת קרן סלואן (AKM), NIH EY019277 (AKM), וכן במימון ניי, חזון הדרכה גרנט, EY013319 ( EAK).

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
פנטניל ציטראטבביתקוקטייל פנטניל: קוקטייל הרדמה; מינון
IP: 0.0125 מ"ל/גרם

קוקטייל סופי: 0.05 מ"ג/ק"ג
Medetomindine הידרוכלורידבביתקוקטייל פנטניל: קוקטייל הרדמה; מינון
IP: 0.0125 מ"ל/גרם

קוקטייל סופי: 0.05 מ"ג/ק"ג
Midazolam HCLקוקטייל: קוקטייל הרדמה; מינון
IP: 0.0125 מ"ל/גרם

קונקטייל סופי: 0.05 מ"ג/ק"ג
2,2,2-tribrom– אברטין: חומר הרדמה; מינון
IP: 0.0075 סמ"ק/גרם

קוקטייל סופי: 1%
2-מתיל-2-בוטנול (ריכוז סופי: 0.775%)קוקטייל אברטין: חומר הרדמה;
מינון IP: 0.0075 סמ"ק/גרם

קוקטייל סופי: .775%
TC-1000 מערכת בקרת טמפ' לעכבריםCWE, Inc.TC-1000טמפרטורת גוף עכבר ויסות
Toberadexבביתמשחת עיניים
10% ברזל כלורידRicca Chemical Company3120-32הכנת גולגולת
דקה להבSable IndustriesS-6400הכנת גולגולת דקה
ציאנואקרילט 404,401לוקטיטP/N 46551הכנת גולגולת דקה
ציאנואקרילט 401לוקטיטP/N 40140הכנת גולגולת דקה
מאיץ דבק רוכסן בועטטכנולוגיית פייסרPT-29הכנת גולגולת דקה
רם מוצרים, בע"מTECH2000ON/OFFתכשיר גולגולת דקה
#6-0 (0.7 מטרי ) תפרEthicon Inc.K8894Hמתחדד C-1
מלקחיים לחבישת עיניים, 10 ס"מ, רוחב קצה 0.5 מ"מ,כלים כירורגייםכלי מדע עדינים11152-10
מספריים בון עדינים במיוחד, 8.5 ס"מ, קצה ישר, קצה חיתוך 13 מ"מכלים כירורגייםכלי מדע עדינים14084-08
מלקחיים דפוס סטנדרטי, ישר, 2.5 מ"מx1.35 מ"מטיפ, 12 ס"מכלים כירורגייםכלי מדע עדינים11000-12
פנטניל הבית קוקטייל תנול מיקרוכירורגי מיקרו מקדחה קוטר פלדה קוטר קצה 0.7 מ"מ כלי מדע עדינים 19008-07 הכנת גולגולת דקה תיבת בקרת מיקרו-מומנט וידית Tech2000 משי מעוקלים

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Feng, G. Imaging neuronal subsets in transgenic mice expressing multiple spectral variants of GFP. Neuron. 28 (1), 41-51 (2000).
  2. Holtmaat, A. high-resolution imaging in the mouse neocortex through a chronic cranial window. Nat Protoc. 4<....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Two Photon ImagingDendritic Spine ImagingThinned Skull PreparationChronic Brain ImagingMouse Visual CortexGFP Labeled NeuronsDendritic Spine MorphologyCortical Plasticity StudyIn Vivo MicroscopySkull Thinning Protocol

Related Articles