חדש במערכת במבחנה עבור טעינה בו זמנית four גידים בתרבות מתואר.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
במאמר זה
סיכום
תקציר
פציעות גיד (למשל, דלקת גידים היד, epicondyltis) בשל שימוש יתר נפוצים בפעילויות ספורט לבין מקום העבודה. רוב המשויכים חוזרות ונשנות, פעילות יד גבוה כוח. מנגנוני הנזק הסלולר מבניים עקב העמסה מחזורית אינם ידועים. המטרה של וידאו זה היא להציג שיטה חדשה שיכולה לטעון בעת ובעונה אחת four גידים בתרבית רקמה. הסרטון מתאר את השיטות של קציר רקמה סטרילית ואיך הגידים הם הועמסו על מערכת clamping כי הוא שקוע לאחר מכן לתוך התקשורת ומתוחזק על 37 ° C. אחת מהדק הוא קבוע ואילו השני הוא עבר עם מפעיל ליניארי. כוח מתיחה גיד מנוטר עם תא מטען בסדרה עם מהדק הנייד. ומפעילים נשלטים עם תוכנית LabVIEW. ארבעת הגידים ניתן לטעון שוב ושוב עם דפוסים שונים של הטעינה, שיעור החזרה, קצב העמסה, ומשך. טוען יכול להמשיך במשך כמה דקות עד 48 שעות. בסיום הטעינה, הגידים יוסרו אמצע החומר מופק עבור ניתוחים ביוכימיים. מערכת זו מאפשרת לחקירת ההשפעות של העמסה על דפוסי ביטוי גנים ושינויים מבניים הגיד. בסופו של דבר, מנגנונים של פגיעה עקב שימוש יתר יכול להיות מחקרים עם ממצאים ליישם טיפול ומניעה.
פרוטוקול
- מוסף התקשורת CO 2-מדיה עצמאית עם סרום שור עוברית, L-גלוטמין, אנטיביוטיקה, חומצה אסקורבית
- 40 מ"ל Aliquot לתוך צינורות 50 צנטריפוגות מ"ל (1 עבור כל גיד)
- Aliquot 10 מ"ל ל -15 מ"ל צינורות צנטריפוגה (1 עבור כל גיד)
- לעקר כלי ניתוח, סדינים החיטוי, פינצטה ו ברגים מומנט ב החיטוי
- לעקר מהדק ו מיקרומטר טיפים בכוח על ידי השריית באתנול 70% בין לילה
- קציר הגידים מן הכפות האחורי של הארנב. הארנב צריך להיות מורדמים לא יותר מ 2 שעות.
- גידים מקום בצינור 15 צנטריפוגות מ"ל מלא עם התקשורת
- פריסת סדין החיטוי מעוקרים להקים בשטח הסטרילי
- מדידת חתך באזור של גיד
- מיקרומטר פלייס טיפים על מיקרומטר, ליישר כראוי
- גריפ גיד ידי הקצוות
- Fit סעיף הגיד הדק בחריץ
- יש מקום עוזר משקל 50 גרם
- המתן 30 שניות, לקרוא עובי (CSA = עובי x 1.3)
- גיד המקום בחזרה שפופרת 15 מ"ל צנטריפוגות
- חזור עם גיד אחד להיות טעון
- הסר מפעיל מבסיס
- לחתוך שתי רצועות 40mm 15mm ידי אחד 3mm 5mm על ידי פיסת גזה סטרילית מ עבור כל גיד
- מרדדים כל רצועה בחוזקה מקום בין החריצים של מהדק דיסטלי
- הסר גיד מהצינור צנטריפוגות ומניחים על מלחציים, סוף דיסטלי של גיד על מהדק דיסטלי והאזור fibrocartilage של הגיד על clamp הפרוקסימלית
- גזה 3x5 פלייס חתיכה על גבי סוף דיסטלי של גיד, ולאבטח את מהדק
- Clamp הפרוקסימלית מאובטח, להבטיח גיד נשאר מיושר בין מהדק ועם רפוי מספיק שזה לא תחת מתח כאשר מלחציים הם התהדקו. הדקו מהדק את 1N-m
- 50 מ"ל מקום צנטריפוגות צינור עם התקשורת בבסיס
- המקום מפעיל בבסיס
- חזור עם גיד אחד להיות טעון
- מניחים בסיס מעל אמבט מים
- טוען פרוטוקול
- תנאי מוקדם גידים
- החל לטעון 0.5N, למדוד אורך גיד (זהו אורך מד)
- החל העמסה מחזורית
- הסר מפעיל מבסיס
- שחרור גיד מ מלחציים
- תהליך גיד
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
הסרטון מציג שיטה חדשה לטעינת סימולטני של עד ארבעה גידים חיים בתרבות רקמות. משך טעינת אופיינית הם 2 עד 48 שעות. לאחר הטעינה, גידים מוסרים ומעובד על ביטוי גנים. המערכת מאפשרת לחקירת ההשפעה של דפוס העמסה על שינויים בגנים הקשורים לשינויים ניווניים של הגיד. ניסויים אלה יכול לספק כמה תובנות מנגנוני פציעה הקשורים טעינה חוזרת. הם גם מספקים תובנה עומסים שיכולים לגרום נזק לרקמות. בסופו של דבר, התוצאות עשויות להיות בשימוש כדי למנוע ולטפל פציעות שימוש יתר על הגידים והרצועות.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
מותאמים אישית 4 שכבות טעינת מפעיל מערכת חימום מים באמבטיה 50 מ"ל צינורות גידים (ארנב) מדיה סטרילית
מקורות
- Asundi, K., Kursa, K., Lotz, J. C., Rempel, D. In vitro system for applying cyclic loads to connective tissues under displacement or force control. Ann Biomed Eng. 35, 1188-1195 (2007).
- Asundi, K. R., Rempel, D. M. Cyclic loading inhibits expression of MMP-3 but not MMP-1 in an in vitro rabbit flexor tendon model. Clin Biomech. , In Press Forthcoming.
- Asundi, K. R., Rempel, D. M. MMP-1, IL-1β and COX-2 mRNA Expression is Modulated by Static Load in Rabbit Flexor Tendon. Ann Biomed Eng. , In Press Forthcoming.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
