Method Article

מיקרוסקופית Intravital של microcirculation המוח עכבר באמצעות חלון גולגולתי סגור

DOI:

10.3791/2184

⸱

November 18th, 2010

 , 
1Bioengineering, University of California, San Diego, 2La Jolla Bioengineering Institute

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מיקרוסקופיה Intravital לעקוב אחרי האירועים hemodynamic ו דלקתיות ומרחב ב microcirculation pial.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מודל זה הניסוי תוכנן לאמוד את microcirculation עכבר pial במהלך hemodynamic, אקוטי וכרוני פיזיולוגיים pathophysiological, התנאים דלקתיות מטבולית, באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי ב vivo. חלון סגור גולגולתי ממוקמת מעל קליפת parieto-העורפית השמאלית של העכברים. Microcirculation מקומי נרשם בזמן אמת דרך החלון באמצעות EPI ו תאורה פלואורסצנטי, מדידות של קטרים ​​כלי שיט תא הדם האדומים (RBC) מהירויות מבוצעות. מהירות RBC נמדד בזמן אמת צולבות מתאם ו / או אריתרוציטים ניאון שכותרתו. דבקות ליקוציט ואת טסיות לכלי pial והערכה של זלוף ו דליפה של כלי הדם נעשים בעזרת סמנים פלואורסצנציה שכותרתו כגון אלבומין-FITC נוגדנים אנטי-CD45 TxR. Microcirculation ניתן וידאו מוקלט שוב ​​ושוב על פני כמה ימים. השתמשנו בפעם הראשונה את החלון קרוב המוח מיקרוסקופיה intravital ללמוד את microcirculation pial לעקוב אחרי שינויים דינמיים במהלך זיהום Plasmodium אנקה berghei בעכברים מראים ביטוי של CM קשורה בתפקוד microcirculatory מאופיין vasoconstriction, הירידה העמוקה בדם זרימת הדם ובסופו של דבר לקרוס.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Craniotomy

Craniotomy ב 8 ל-10-שבוע בעכברים הישנים יש לבצע מראש כמו 1 שתואר לעיל, פרט לכך בר טיטניום אינו ממוקם בראש של החיה. חלון גולגולתי כרוני הוא יציב ומאפשר בדיקה הכנה של microcirculation pial אפילו חודשים לאחר השתלה. בדרך כלל, אנו מבצעים מחקרים שלנו 2-3 שבועות לאחר ההשתלה את החלון גולגולתי.

2. Intravital מיקרוסקופיה

  1. שני שלושה שבועות לאחר craniotomy, טמפרטורת הגוף מסומנת ולאחר מכן העכבר....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

השיטה המתוארת כאן מיקרוסקופיה intravital מספק כלי ייחודי ורב עוצמה להתבוננות מפורטת של microcirculation pial בתוך העכבר. זה מאפשר בידודם arterioles הפרט venules ומדידת שינויים של מספר פרמטרים כגון קוטר כלי, מהירויות RBC, זרימת הדם, היצמדות וגלגול של לויקוציטים, טסיות הדם וגורמים אחרים, דליפת הדם, pH רקמות pO2 רבות אפשריות אחרות יישומים. בתגובה וסקולרית vivo ניתן להעריך באופן מיידי על התערבויות הממשל כגון תרופות, או במהלך תהליכים פתולוגיים. יתר על כן, התנהגות micr.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
אין ניגודי אינטרסים הכריז.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

עבודה זו נתמכה על ידי מענקים R01-HL87290, R01-HL87290-S1 ו-R01 AI082610 מן המכון הלאומי לבריאות בארה"ב כדי LJMC.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
איזופלורןבקסטר אינטרנשיונל בע"מ
FDG9623 Carbocyanine dye Dil Molecular Probes, Life TechnologiesD306
Albumin-FITCSigma-AldrichA9771
Anti-CD45-TxR AbInvitrogenMCD4517
P. berghei ANKA-GFPMR4MRA-865

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Mostany, R., Portera-Cailliau, C. A craniotomy surgery procedure for chronic brain imaging. J. Vis. Exp. (15), (2008).
  2. Intaglietta, M., Tompkins, W. R. Microvascular measurements by video image shearing and splitting. Microvasc. Res. 5, 309-312 (1973).
  3. Briceno, J. C., Cabr....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Intravital MicroscopyMouse Brain MicrocirculationClosed Cranial WindowPial VesselsRed Blood Cell VelocityLeukocyte AdhesionFluorescent LabelingCerebral MalariaPlasmodium BergheiBlood Flow Measurement

Related Articles